用作β分泌酶(BACE)抑制剂的3,4-二氢-吡咯并1,2-a吡嗪-1-基胺衍生物

摘要

本发明涉及作为β分泌酶抑制剂的新颖的3,4-二氢-吡咯并[1，2-a]吡嗪-1-基胺衍生物，β分泌酶也称作β-位点淀粉样蛋白裂解酶、BACE、BACE1、Asp2、或膜天冬氨酸蛋白酶2。本发明还涉及包含此类化合物的药物组合物，涉及制备此类化合物和组合物的方法，并且涉及此类化合物和组合物用于预防和治疗其中涉及β分泌酶的失调的用途，这些失调如阿尔茨海默病(AD)、轻度认知损害、衰老、痴呆、路易体痴呆、唐氏综合征、与中风相关的痴呆、与帕金森病相关的痴呆或与β-淀粉样蛋白相关的痴呆。

说明书

发明领域

本发明涉及作为β分泌酶抑制剂的新颖的3，4-二氢-吡咯并[1，2-a]吡嗪-1- 基胺衍生物，β分泌酶也称作β-位点淀粉样蛋白裂解酶、BACE、BACE1、 Asp2、或膜天冬氨酸蛋白酶2。本发明还涉及包括此类化合物的药物组合 物、涉及制备此类化合物和组合物的方法、并且涉及此类化合物和组合物用 于预防及治疗其中涉及β-分泌酶的失调的用途，这些失调如阿尔茨海默病 (AD)、轻度认知损害、衰老、痴呆、路易体痴呆、唐氏综合征、与中风相 关的痴呆、与帕金森病相关的痴呆或与β-淀粉样蛋白相关的痴呆。

发明背景

阿尔茨海默病(AD)是一种与衰老相关的神经退行性疾病。AD患者遭 受认知缺陷和记忆丧失连同行为问题，例如焦虑。超过90％的罹患AD的那 些病例具有散发形式的失调，而只有10％的病例是家族性或遗传性的。在美 国，年龄65岁的人约十分之一患有AD，而年龄85岁的每两个个体中就有1 个患有AD。距初次诊断的平均预期寿命是7-10年，并且AD患者需要来自 非常昂贵的协助生活机构或来自家庭成员的大量护理。随着群体中老年人数 量的不断增加，AD是不断增长的医疗关注。当前可用于AD的疗法只治疗该 疾病的症状，并且包括用于改善认知特性的乙酰胆碱酯酶抑制剂连同用于控 制与这种疾病(ailment)相关的行为问题的抗焦虑药和抗精神病药。

AD患者脑中的标志性病理特征是由tau蛋白的高度磷酸化产生的神经原 纤维缠结以及由β-淀粉样蛋白1-42(Abeta1-42)肽聚集形成的淀粉样蛋白 斑。Abeta1-42形成低聚物并且然后是原纤维，并且最终形成淀粉样蛋白斑。 这些低聚物以及原纤维被认为是尤其毒害神经的并且可以引起与AD相关的 大多数神经学损伤。预防Abeta1-42形成的药剂具有成为用于AD治疗的疾 病改性剂(disease-modifying agent)的潜能。Abeta1-42产生自淀粉样前体蛋 白(APP)，由770个氨基酸组成。Abeta1-42的N端被β分泌酶(BACE) 裂解，并且然后γ分泌酶裂解C-末端。除了Abeta1-42之外，γ分泌酶还释放 为主要裂解产物的Abeta1-40，以及Abeta1-38和Abeta1-43。这些Abeta形 式也可以聚集以形成低聚物和原纤维。因此，预期BACE抑制剂将预防Abeta 1-42连同Abeta1-40、Abeta1-38和Abeta1-43的形成，并且将是AD治疗中 的潜在治疗剂。

发明概述

本发明涉及式(I)的化合物

或其一种互变异构体或立体异构体形式，其中

R¹、R²、R³独立地选自下组，该组由以下各项组成：氢、卤素、氰基、 C_1-3烷基、单-和多卤代-C_1-3烷基以及C_3-6环烷基；

R⁴选自下组，该组由以下各项组成：氢、C_1-3烷基、甲氧基甲基、C_3-6环 烷基、单-和多卤代-C_1-3烷基、同芳基(homoaryl)以及杂芳基；

X¹、X²、X³、X⁴独立地是C(R⁵)或N，其条件是其中不超过两个表示 N；R⁵选自下组，该组由以下各项组成：氢、卤素、氰基、C_1-3烷基、单-和 多卤代-C_1-3烷基以及C_3-6环烷基；

L是一个键或-NHCO-；

Ar是同芳基或杂芳基；

其中同芳基是苯基或用一个、两个或三个取代基取代的苯基，这个或这 些取代基选自下组，该组由以下各项组成：卤素、氰基、C_1-3烷基、C_1-3烷氧 基、单-和多卤代-C_1-3烷基、以及单-和多卤代-C_1-3烷氧基；

杂芳基选自下组，该组由以下各项组成：吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪 基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、噻唑基、噻二唑 基、噁唑基、以及噁二唑基，各自任选地用一个、两个或三个取代基取代， 这个或这些取代基选自下组，该组由以下各项组成：卤素、氰基、C_1-3烷基、 C_1-3烷氧基、单-和多卤代-C_1-3烷基、以及单-和多卤代-C_1-3烷氧基；或其一种 加成盐或溶剂化物。

本发明例证了包含药学上可接受的载体以及任何上述化合物的一种药物 组合物。本发明的一个例证是通过混合任何上述化合物与药学上可接受的载 体制成的一种药物组合物。本发明例证了用于制造一种药物组合物的方法， 该方法包括混合任何上述化合物与药学上可接受的载体。

本发明例示了治疗β分泌酶介导的失调的方法，包括向需要其的受试者 给予治疗有效量的任何上述化合物或药物组合物。

本发明进一步例示了抑制β分泌酶的方法，包括向需要其的受试者给予 治疗有效量的任何上述化合物或药物组合物。

本发明的一个实例是治疗选自下组的失调的方法，该组由以下各项组 成：阿尔茨海默病、轻度认知损害、衰老、痴呆、路易体痴呆、唐氏综合 征、与中风相关的痴呆、与帕金森病相关的痴呆以及与β-淀粉样蛋白相关的 痴呆，优选地是阿尔茨海默病，该方法包括向需要其的受试者给予治疗有效 量的任何上述化合物或药物组合物。

本发明的另一个实例是任何上述化合物在治疗需要其的受试者中的以下 疾病中使用：(a)阿尔茨海默病、(b)轻度认知损害、(c)衰老、(d)痴呆、(e) 路易体痴呆、(f)唐氏综合征、(g)与中风相关的痴呆、(h)与帕金森病相关的 痴呆以及(i)与β-淀粉样蛋白相关的痴呆。

发明详细说明

本发明涉及如在上文中定义的式(I)的化合物及其药学上可接受的盐和 溶剂化物。式(I)的化合物是β分泌酶(也称作β-位点裂解酶、BACE、 BACE1、Asp2或膜天冬氨酸蛋白酶2)的抑制剂，并且在阿尔茨海默病、轻 度认知损害、衰老、痴呆、与中风相关的痴呆、路易体痴呆、唐氏综合征、 与帕金森病相关的痴呆以及与β-淀粉样蛋白相关的痴呆，优选地是阿尔茨海 默病、轻度认知损害或衰老，更优选地是阿尔茨海默病的治疗中是有用的。

在本发明的一个实施例中，R¹、R²、R³独立地选自下组，该组由以下各 项组成：氢、卤素、氰基、C_1-3烷基、单-和多卤代-C_1-3烷基以及C_3-6环烷 基；

R⁴选自下组，该组由以下各项组成：氢、C_1-3烷基、C_3-6环烷基、单-和 多卤代-C_1-3烷基、同芳基以及杂芳基；

X¹、X²、X³、X⁴独立地是C(R⁵)或N，其条件是其中不超过两个表示 N；R⁵选自下组，该组由以下各项组成：氢、卤素、氰基、C_1-3烷基、单-和 多卤代-C_1-3烷基以及C_3-6环烷基；

L是一个键或-NHCO-；

Ar是同芳基或杂芳基；

其中同芳基是苯基或用一个、两个或三个取代基取代的苯基，这个或这些取 代基选自下组，该组由以下各项组成：卤素、氰基、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、 单-和多卤代-C_1-3烷基、以及单-和多卤代-C_1-3烷氧基；杂芳基选自下组，该组 由以下各项组成：吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、呋喃基、噻吩基、吡 咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、噻唑基、噻二唑基、噁唑基、以及噁二唑 基，各自任选地用一个、两个或三个取代基取代，这个或这些取代基选自下 组，该组由以下各项组成：卤素、氰基、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、单-和多卤 代-C_1-3烷基、以及单-和多卤代-C_1-3烷氧基；或其一种加成盐或溶剂化物。

在本发明的一个实施例中，R¹、R²与R³独立地选自氢和C_1-3烷基；

X¹、X²、X³、X⁴独立地是C(R⁵)，其中每个R⁵选自氢和卤素；

L是一个键或-NHCO-；

Ar是同芳基或杂芳基；

其中同芳基是苯基或用一个、两个或三个取代基取代的苯基，这个或这 些取代基选自下组，该组由以下各项组成：卤素、氰基、C_1-3烷基、C_1-3烷氧 基、以及多卤代-C_1-3烷氧基；

杂芳基选自下组，该组由以下各项组成：吡啶基、嘧啶基、以及吡嗪 基，各自任选地用一个或两个取代基取代，这个或这些取代基选自下组，该 组由以下各项组成：卤素、氰基、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、以及多卤代-C_1-3烷 氧基；或

其一种加成盐或溶剂化物。

在本发明的另一个实施例中，R¹、R²与R³是氢；

X¹是CF；

X²、X³、X⁴是CH；

L是一个键或-NHCO-；Ar是同芳基或杂芳基；

其中同芳基是用氯取代的苯基；

杂芳基选自下组，该组由以下各项组成：吡啶基以及嘧啶基，各自任选 地用一个或两个取代基取代，这个或这些取代基选自下组，该组由以下各项 组成：氯、氟、氰基、甲基、以及甲氧基；或

其一种加成盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，用R4取代的碳原子具有R构型。

在本发明的一个实施例中，R¹和R³是氢，

R²是氢、氟或三氟甲基；

R⁴是甲基或二氟甲基；

X¹是CH或CF；

X²、X³、和X⁴是CH；

L是-NHCO-；

Ar是5-氯吡啶-2-基、5-氰基吡啶-2-基、5-氟吡啶-2-基、5-氰基-3-氟吡 啶-2-基、5-甲氧基吡嗪-2-基或1-二氟甲基吡唑-3-基；或

其一种加成盐或溶剂化物。

定义

“卤素”应当表示氟、氯以及溴；“C_1-3烷基”应当表示具有1、2或3个碳 原子的直链或支链饱和烷基，例如，甲基、乙基、1-丙基以及2-丙基；“C_1-3烷氧基”应当表示一个醚基，其中C_1-3烷基如之前定义；“单-和多卤代C_1-3烷 基”应当表示如之前定义的、用1、2、3个或可能的情况下如之前定义的更多 个卤素原子取代的C_1-3烷基；“单-和多卤代C_1-3烷氧基”应当表示一个醚基， 其中单-和多卤代C_1-3烷基如之前定义；“C_3-6环烷基”应当表示环丙基、环丁 基、环戊基以及环己基；“C_3-6环烷二基”应当表示一个二价基，如环丙烷二 基、环丁烷二基、环戊烷二基以及环己烷二基。

在此使用的术语“受试者”是指动物，优选地是哺乳动物，最优选地是人 类，该受试者是或已经成为治疗、观察或实验的对象。

在此使用的术语“治疗有效量”表示在研究员、兽医、医师或其他临床医 生寻找的在组织系统、动物或人类中引出生物学或医学反应的活性化合物或 药用剂的量，该反应包括正在被治疗的疾病或失调的症状的减轻。

在此使用的术语“组合物”旨在涵盖包括处于特定量的特定成分的产品， 连同直接或间接源于处于特定量的特定成分的组合的任何产品。

在上下文中，术语“式(I)的化合物”意在包括其加成盐、溶剂化物以及立 体异构体。

在上下文中，术语“立体异构体”或“立体化学同分异构体形式”可互换地 使用。

式(I)的化合物与式(I-1)的化合物以动态平衡的形式共存。

本发明包括为纯立体异构体或为两种或更多种立体异构体的混合物的、 式(I)的化合物的所有立体异构体。

对映异构体是彼此不重叠镜像的立体异构体。一对的对映异构体的1：1 混合物是一种消旋体或消旋混合物。非对映体(或非对映异构体)是不为对 映异构体的立体异构体，即，它们是不相关的镜像。如果化合物包含一个双 键，这些取代基可以处于E或Z构型。如果化合物包含一个二取代的环烷 基，这些取代基可以处于顺式或反式构型。因此，本发明包括对映异构体、 非对映异构体、消旋体、E异构体、Z异构体、顺式异构体、反式异构体及其 混合物。

绝对构型是根据Cahn-Ingold-Prelog系统指定的。不对称原子处的构型由 R或S指定。绝对构型未知的、已拆分的化合物可以被指定为(+)或(-)，取 决于它们使平面偏振光旋转的方向。

当鉴定一种特定立体异构体时，这意味着所述立体异构体基本上上无其 他异构体，即，与其他异构体的关联小于50％，优选地小于20％，更优选地 小于10％，甚至更优选地小于5％，特别是小于2％并且最优选地小于1％。 因此，例如当式(I)的化合物被指定为(R)时，这意味着该化合物基本上上无 (S)异构体；当式(I)的化合物被指定为E时，这意味着该化合物基本上无Z 异构体；当式(I)的化合物被指定为顺式时，这意味着该化合物基本上无反式 异构体。

此外，针对本发明化合物的一些晶型可以作为多晶型存在并且同样旨在 包括在本发明之内。另外，本发明的一些化合物可以与水(即，水合物)或 常用有机溶剂形成溶剂化物，并且此类溶剂化物也旨在涵盖在本发明的范围 之内。

为了在医学中使用，本发明化合物的盐是指无毒的“药学上可接受的 盐”。然而，其他盐在根据本发明的化合物或它们的药学上可接受的盐的制备 中可能是有用的。这些化合物的适合的药学上可接受的盐包括可以通过，例 如，混合该化合物溶液与一种药学上可接受的酸溶液形成的酸加成盐，该酸 例如是，盐酸、硫酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、乙酸、苯甲酸、柠檬酸、 酒石酸、碳酸或磷酸。此外，在本发明的化合物携带一个酸性部分的情况 下，其适合的药学上可接受的盐可以包括碱金属盐，例如，钠或钾盐；碱土 金属盐，例如，钙或镁盐；以及与适合的有机配体形成的盐，例如，季铵 盐。

在药学上可接受的盐的制备中可以使用的代表性的酸包括但不局限于以 下这些：乙酸、2，2-二氯乙酸、酰化氨基酸、己二酸、海藻酸、抗坏血酸、L- 天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、(+)-樟脑酸、樟脑磺酸、癸 酸、己酸、辛酸、肉桂酸、柠檬酸、环拉酸、乙烷-1，2-二磺酸、乙磺酸、2-羟 基-乙磺酸、甲酸、富马酸、半乳糖二酸、龙胆酸、葡庚糖酸、D-葡糖酸、D- 葡萄糖醛酸、L-谷氨酸、β-氧代-戊二酸、乙醇酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、 (+)-L-乳酸、(±)-DL-乳酸、乳糖酸、马来酸、(-)-L-苹果酸、丙二酸、(±)-DL- 扁桃酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、萘-1，5-二磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、硝 酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、磷酸、L-焦谷氨酸、水杨 酸、4-氨基-水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、单宁酸、(+)-L-酒石 酸、硫氰酸、p-甲苯磺酸、三氟甲磺酸、以及十一碳烯酸。在药学上可接受 的盐的制备中可以使用的代表性的碱包括但不局限于以下这些：铵、L-精氨 酸、苯乙苄胺、苄星青霉素、氢氧化钙、胆碱、二甲基乙醇胺、二乙醇胺、 二乙胺、2-(二乙氨基)-乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-甲基-葡糖胺、哈胺 (hydrabamine)、1H-咪唑、L-赖氨酸、氢氧化镁、4-(2-羟乙基)-吗啉、哌 嗪、氢氧化钾、1-(2-羟乙基)-吡咯烷、仲胺、氢氧化钠、三乙醇胺、氨丁三醇 以及氢氧化锌。

根据化学文摘服务社认同的命名法则产生本发明化合物的化学名。

A.最终化合物的制备

实验程序1

根据反应方案(1)，在一种适合的反应惰性溶剂(例如像，水或甲醇) 中，在热条件下(例如像，在60℃至90℃加热反应混合物，持续例如4至100 小时)进行的一个反应，可以通过将式(II)的中间化合物与一种适当的氨源 (例如像，氯化铵或氨水)进行反应来制备根据式(I)的最终化合物。在反应 方案(1)中，所有变量如在式(I)中定义。

反应方案1

实验程序2

另外地，根据反应方案(2)，在一种适合的反应惰性溶剂(例如像，二氯 甲烷)中，在一种缩合剂(例如像，4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基 吗啉鎓氯化物)存在下，在热条件下(例如像，在25℃加热反应混合物，持 续例如2小时)进行的一个反应，可以通过将式(III-a)的中间化合物与式(IV) 的中间体进行反应来制备根据式(I-a)的最终化合物(其中L是NHCO-)。在 反应方案(2)中，所有变量如在式(I)中定义。

反应方案2

实验程序3

根据反应方案(3)，在一种适合的反应惰性溶剂或惰性溶剂混合物(例如 像，1，4-二噁烷/乙醇)中，在一种适合的碱(例如像，碳酸钾)、Pd-络合催 化剂(例如像，四(三苯基膦)合钯(0))的存在下，在热条件(例如像，在微 波辐射下，在80℃加热反应混合物，持续例如20小时或例如，在150℃加热反 应混合物持续例如10min至30min)进行的一个反应，可以通过将式(III-b)的 中间化合物与式(V)的中间体进行反应来制备根据式(I-b)的最终化合物(其 中L是一个键)。在反应方案(3)中，所有变量如在式(I)中定义，并且W是卤 素。R⁶和R⁷可以是氢或烷基，或可以作为整体形成例如式-CH₂CH₂-、- CH₂CH₂CH₂-、或-C(CH₃)₂C(CH₃)₂-的二价基。

反应方案3

前述制备中的多个中间体以及起始材料是可以根据本领域中已知的、制 备所述或类似化合物的方法来制备的已知化合物并且一些中间体是新的。在 下文中将更加详细地描述此类制备方法中的多种。

B.中间化合物的制备

实验程序4

根据反应方案(4)，遵循本领域中已知的布赫瓦尔德-哈特维希型偶联程 序，随后进行酸性水解，可以从相应的、式(III-b)的中间化合物来制备根据 式(III-a)的中间体。可以通过将式(III-b)的中间化合物用在一种适合的反应 惰性溶剂(例如像，甲苯)中的二苯甲酮亚胺，在一种适合的碱(例如像， 叔丁醇钠)、Pd-络合催化剂(例如像，三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0))的存在 下，在热条件下(例如像，在100℃加热反应混合物，持续例如2小时)进 行处理来进行所述偶联。然后通过用一种强酸(例如像，盐酸)，在一种适 合的反应惰性溶剂(例如像，异丙醇)中，在热条件下(例如像，在25℃持 续例如1小时)进行处理将将所得的式(VI)的中间化合物转化为式(III-a)的 中间化合物。可替代地，通过在叠氮化钠、针对铜的配体(如N，N’-二甲基乙 二胺)、一种适合的碱(例如，碳酸钠)存在下，在一种反应惰性溶剂(如 DMSO)中，在热条件下(例如像，在110℃加热反应混合物，持续25小 时)进行铜催化偶联，能够从式(III-b)的中间体开始一步获得式(III-a)的中 间体。在反应方案(4)中，所有变量如在式(I)中定义，并且W是卤素。

反应方案4

实验程序5

根据反应方案(5)，遵循本领域中已知的硝基到氨基的还原程序，可以从 相应的、式(VIII-c)的中间体来制备根据式(VII)的中间体。例如，可以在氢 气氛下并且在一种适当的催化剂(例如像，钯炭)存在下，通过搅拌这些反 应物或使它们穿过一个流动反应器进行所述还原。适合的溶剂是，例如， 水、链烷醇(例如，甲醇、乙醇等等)、酯(例如，乙酸乙酯等等)。为了 提高所述还原反应的速率，升高反应混合物的温度和/或压力可以是有利的。 可以通过向该反应混合物中添加催化剂毒物(例如像，噻吩等等)来阻止反 应物以及反应产物中所不希望的、某些官能团的进一步氢化。在反应方案(5) 中，所有变量如在式(I)中定义。

反应方案5

实验程序6

根据反应方案(6)，可以从式(VII)的中间化合物来制备式(III-a)的中间 化合物。可以合宜地通过将所述中间体在热条件下(例如像，在80℃加热反 应混合物，持续例如72小时)用一种氨源(例如像，氯化铵或乙醇铵)处理 来进行所述转化。在反应方案(6)中，所有变量如在式(I)中定义。

反应方案6

实验程序7

根据反应方案(7)，在一种适合的反应惰性溶剂(例如像，甲醇)中，在 一种缩合剂(例如像，4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化 物)存在下，在热条件下(例如像，在25℃加热该反应混合物，持续例如3小 时)进行的一个反应，可以通过使式(VII)的中间化合物与式(IV)的中间体反 应来制备式(IX)的中间体(其中L是-NHCO-)。在反应方案(7)中，所有变 量如在式(I)中定义。

反应方案7

实验程序8

通常，遵循下文反应方案(8)和(9)中示出的反应步骤可以制备式(III-b) 和(III-c)的中间化合物。

反应方案8

A：硫代酰胺到脒的转化

A’：甲硫基到氨基的转化

B：硫的甲基化

C：酰胺到硫代酰胺的转化(硫化)

D：环化

E：去除任意N保护基

遵循本领域中已知的硫代酰胺到脒的转化程序，可以从相应的硫代酰胺 衍生物合宜地制备上述反应方案(8)中的脒衍生物(反应步骤A)。可以合宜 地通过将所述硫代酰胺在一种适合的反应惰性溶剂(例如像，水或甲醇以及 类似溶剂)中，在热条件下(例如像，在60℃至90℃加热反应混合物，持续 例如6至100小时)用一种氨源(例如像，氯化铵或氨水)处理来进行所述转 化。在类似条件下，还可以将甲基化的中间体(VIII-b)和(VIII-c)转化为所希 望的脒(反应步骤A’)。可以合宜地从相应的、溶于一种适合的溶剂(如丙 酮)中的硫代酰胺起始，在一种碱(例如碳酸钾)以及一种甲基化剂(例如 甲基碘)存在下，在热条件下(例如在室温持续3小时)来制备中间体(VIII- b)和(VIII-c)(反应步骤B)。

遵循本领域中已知的硫化程序，可以从酰胺衍生物制备上述反应方案(8) 中的硫代酰胺衍生物(反应步骤C)。可以合宜地通过将所述酰胺在在一种 反应惰性溶剂(例如像，四氢呋喃或1，4-二噁烷等等)中，在一种适合的碱 (像吡啶)存在下，在热条件下(例如像，在50℃至100℃加热反应混合 物，持续例如24小时)，用一种硫化剂(例如像，五硫化磷或2，4-双-(4-甲氧 基-苯基)-1，3-二硫杂-2，4-二磷杂环丁烷2，4-二硫化物[劳森试剂])处理来进行 所述转化。

遵循本领域中已知的环化程序，可以从相应的、式(XII-b)和(XII-c)的 中间化合物制备上述反应方案(8)中的式(XI-b)和(XI-c)的酰胺衍生物(反应 步骤D)。可以合宜地通过将式(XII-b)和(XII-c)的中间化合物用一种适合的 碱(如乙酸钾或甲醇钠)，在一种适合的反应溶剂(例如像乙醇等等)中， 在55℃至100℃持续确保完成该反应的一段时间来进行所述环化。

可以通过根据本领域中已知的方法进行保护基的去除，从相应的、式 (XIII-b)和(XIII-c)的中间化合物制备上述反应方案(8)中的式(XII-b)和(XII- c)的中间化合物。

实验程序9

反应方案9

F：烷基化

G：氧杂噻唑烷氧化

H：氧杂噻唑烷形成

遵循本领域中已知的烷基化程序，可以从相应的、式(XV-b)和(XV-c) 的中间化合物(其中，Z¹是胺的保护基，例如像叔丁氧基羰基)制备上述反 应方案(9)中的根据式(XIII-b)和(XIII-c)的中间体(反应步骤F)。可以合 宜地通过分别将(XV-b)和(XV-c)用(XIV)的相应中间化合物在一种适合的碱 (例如像，碳酸钠或碳酸铯)存在下，在一种适合的惰性溶剂(例如像， N，N-二甲基甲酰胺或二甲氧基亚砜)中，在低温(例如像0℃)持续30min， 并且然后在适度高温(例如像100℃)持续24小时至100小时，或例如，在 微波辐射下，在130℃加热反应混合物，持续例如30min至45min处理来进 行所述烷基化。

遵循本领域中已知的氧化程序，可以通过使式(XVI-b)和(XVI-c)的中 间化合物反应来制备上述反应方案(9)中的根据式(XV-b)和(XV-c)的中间体 (反应步骤G)。通过将相应的、式(XVI-b)和(XVI-c)的中间化合物用一种 氧化剂(例如像，高碘酸钠)，在一种适合的惰性溶剂(例如像，乙腈／水) 中，在氯化钌(III)存在下，在适度高温(例如像25℃)持续例如2小时处理 来合宜地进行所述氧化。

遵循本领域中已知的磺酰胺化(sulfamidate)形成程序，可以通过使式 (XVII-b)和(XVII-c)的中间化合物反应来制备上述反应方案(9)中的根据式 (XVI-b)和(XVI-c)的中间体(反应步骤H)。通过将相应的、式(XVII-a)和 (XVII-c)的中间化合物用亚硫酰二氯，在一种碱(例如像吡啶)存在下，在 一种适合的反应惰性溶剂(例如像，乙腈)中，在低温(例如像-40℃)持续 例如30min，并且然后在适度高温(例如像25℃)持续例如24至72小时处 理来合宜地进行所述转化。

通常，遵循本领域已知的、描述于文献中的斯特雷克型程序，可以制备 式(XVII-b)和(XVII-c)的中间化合物(其中Z¹是胺的保护基(例如像叔丁氧 基羰基))。

实验程序10

根据反应方案(14)，在一种适合的反应惰性溶剂(例如像，二氯甲烷) 中，在一种甲基化剂(例如像，三甲基氧鎓四氟硼酸)存在下，在热条件 (例如像，在25℃，持续例如4天)进行的一个反应，可以从式(XI-b)或(XI- c)的中间化合物制备根据式(XVIII)的中间化合物(其中Q是卤素或硝基)。 然后可以通过在热条件下(例如像，在80℃加热反应混合物，持续例如36小 时)与一种氨源(例如像，氯化铵与乙醇铵)反应而进一步将中间体(XVIII) 转化为脒(III-b)和(III-c)。在反应方案(10)中，所有变量如在式(I)中定义， 并且Q是卤素或硝基。

反应方案10

药理学

本发明的化合物及其药学上可接受的组合物抑制BACE，并且因此在治 疗或预防阿尔茨海默病(AD)、轻度认知损害(MCI)、衰老、痴呆、路易 体痴呆、脑淀粉样血管病、多发性梗死性痴呆、唐氏综合征、与帕金森病相 关的痴呆以及与β-淀粉样蛋白相关的痴呆中可能有用。

本发明涉及一种用作药物的、根据通式(I)的化合物、其立体异构体形 式或其药学上可接受的酸或碱加成盐或溶剂化物。

本发明还涉及用于在治疗或预防以下疾病或病症中使用的根据通式(I) 的化合物、其立体异构体形式或其药学上可接受的酸或碱加成盐或溶剂化 物，这些疾病或病症选自下组，该组由以下各项组成：AD、MCI、衰老、痴 呆、路易体痴呆、脑淀粉样血管病、多发性梗死性痴呆、唐氏综合征、与帕 金森病相关的痴呆以及与β-淀粉样蛋白相关的痴呆。

本发明还涉及根据通式(I)的化合物、其立体异构体形式或其药学上可 接受的酸或碱加成盐或溶剂化物，用于制造用于治疗或预防上文中提及的任 何一种疾病状况的药物的用途。

鉴于式(I)的化合物的效用，提供了治疗患有上文中提及的任何一种疾 病的温血动物(包括人类)的方法，或一种预防温血动物(包括人类)免于 上文中提及的任何一种疾病的方法。

所述方法包括向温血动物(包括人类)给予，即，全身给予或局部给 予，优选口服给予一个有效量的式(I)的化合物、其立体异构体形式、其药学 上可接受的加成盐或溶剂化物。

治疗方法还包括在一个方案中给予每天一到四次摄入之间的活性成分。 在这些治疗方法中，根据本发明的化合物优选地在给予之前配制。如在此在 下文所述的，使用熟知且容易获得的成分通过已知程序制备适合的药物制 剂。

可以适合于治疗或预防阿尔茨海默病或其症状的、本发明的化合物可以 单独给予或与一种或多种另外的治疗剂联合给予。联合治疗包括：包含式(I) 的化合物以及一种或多种另外的治疗剂的单个药物剂量制剂的给予，连同式 (I)的化合物和以其自身分开的药物剂量制剂存在的每种另外的治疗剂的给 予。例如，可以向患者给予一起处于单一口服剂量组合物(例如片剂或胶 囊)中的式(I)的化合物以及治疗剂，或可以将每种药剂以分开的口服剂量制 剂给予。

药物组合物

本发明还提供了用于预防及治疗其中β分泌酶的抑制是有益的疾病，例 如阿尔茨海默病(AD)、轻度认知损害、衰老、痴呆、路易体痴呆、唐氏综 合征、与中风相关的痴呆、与帕金森病相关的痴呆以及与β-淀粉样蛋白相关 的痴呆的组合物。所述组合物包含治疗有效量的、根据式(I)的化合物以及药 学上可接受的载体或稀释剂。

虽然活性成分可以单独给予，但是其优选地是作为药物组合物存在。因 此，本发明进一步提供了一种药物组合物，包含根据本发明的化合物、以及 药学上可接受的载体或稀释剂。该载体或稀释剂在与该组合物的其他成分的 相容性的意义上必须是“可接受的”并且对其受者无毒。

可以通过制药领域中熟知的任何方法制备本发明的药物组合物。将作为 活性成分的一种治疗有效量的具体化合物，处于碱形式或加成盐形式，与一 种药学上可接受的载体组合为一种精细混合物，该载体可以采取多种形式， 取决于所希望的用于给药的制剂的形式。优选地，令人希望的是这些药物组 合物处于适合于全身给予，例如，口服、经皮或肠胃外给予；或局部给予， 例如，经由吸入、鼻喷雾、滴眼剂或经由乳膏、凝胶、洗发水等等单一剂 型。例如，在制备处于口服剂型的组合物中，在口服液体制剂(例如悬浮 液、糖浆、酏剂和溶液)的情况下，可以采用任何常用药物介质，例如像 水、二醇类、油类、醇类等等；或者在粉剂、丸剂、胶囊、以及片剂的情况 下，采用固体载体，例如淀粉、糖、高岭土、润滑剂、粘合剂、崩解剂等 等。由于它们的给药方便，片剂和胶囊代表最有利的口服剂量单位形式，在 此情况下显然采用固体药物载体。对于肠胃外组合物，载体通常至少大部分 包括无菌水，虽然可以包括例如帮助溶解的其他成分。例如可以制备注射溶 液，其中载体包括盐水溶液、葡萄糖溶液或盐水与葡萄糖溶液的混合物。也 可以制备注射混悬液，在此情况下可以采用适当的液体载体、悬浮剂等等。 在适合于经皮给药的组合物中，载体任选地包括渗透增强剂和／或适合的润湿 剂，任选地与小比例的适合的任何性质的添加剂组合，这些添加剂不会引起 任何对皮肤的显著有害作用。所述添加剂可以促进对皮肤的给药和／或可以有 助于制备所希望的组合物。能以不同方式给予这些组合物，例如，作为透皮 贴剂、作为喷滴剂(spot-on)或作为软膏剂。

为了便于给药和剂量的一致性，尤其有利的将上述药物组合物配制为单 位剂型。如在说明书和权利要求中使用的，剂量单位剂型是指适合作为单一 剂量的物理上离散的单位，各单位含有经计算以产生所希望的与所需药物载 体相关的疗效的预定量的活性成分。这样的剂量单位剂型的实例是片剂(包 括刻痕片剂或包衣片剂)、胶囊、丸剂、粉包、薄片、注射溶液或悬浮液、 一茶匙的量、一大汤匙的量等，及其分开的多种剂型。

如本领域的普通技术人员所熟知的，给药的精确剂量以及频率取决于具 体使用的式(I)的化合物、正在被治疗的具体病症、正在被治疗的病症的严重 性、具体患者的年龄、体重、性别、失调程度以及总体身体健康状况，连同 个体可以服用的其他药物。此外，显然所述有效每日量可以降低或增加，这 取决于所治疗的受试者的反应和／或取决于对本发明的这些化合物开处方的医 师的评估。

取决于给药模式，该药物组合物将包括按重量计从0.05％至99％，优选 地按重量计从0.1％至70％，更优选地按重量计从0.1％至50％的活性成分， 以及按重量计从1％至99.95％，优选地按重量计从30％至99.9％，更优选地 按重量计从50％至99.9％的一种药学上可接受的载体，所有的百分数都基于 该组合物的总重量。

这些化合物可以用于全身给药，例如，口服、经皮或肠胃外给药；或局 部给药，如，经由吸入、鼻喷雾、滴眼剂或经由乳膏、凝胶、洗发水等等。 优选地这些化合物经口给予。如本领域的普通技术人员所熟知的，给药的精 确剂量和频率取决于使用的根据式(I)的具体化合物、正在被治疗的具体病 症、正在被治疗的病症的严重性、具体患者的年龄、体重、性别、失调程度 以及总体身体健康状况，连同个体可以服用的其他药物。此外，显然所述有 效每日量可以降低或增加，这取决于所治疗的受试者的反应和／或取决于对本 发明的这些化合物开处方的医师的评估。

可以与载体物质组合以生产一种单一剂型的式(I)的化合物的量将取决 于治疗的疾病、哺乳动物种类、以及具体给药模式而变化。然而，作为一般 指导，适合本发明的这些化合物的单位剂量可以，例如，优选地含有0.1mg 至约1000mg之间的活性化合物。优选的单位剂量在1mg至约500mg之 间。更优选的单位剂量在1mg至约300mg之间。甚至更优选的单位剂量在1 mg至约100mg之间。此类单位剂量可以一天给予超过一次，例如一天2、 3、4、5或6次，但是优选地每天1或2次，使得对于70kg成人而言，每次 给予的总剂量范围在每kg受试者体重0.001至约15mg。优选的剂量是每次 给予每kg受试者体重0.01至约1.5mg，并且此类疗法可以持续多个星期或月 份，并且在一些情况中，持续多年。然而，如本领域技术人员充分理解的， 将理解的是，针对任何具体患者的特定剂量水平取决于多种因素，包括所采 用的特定化合物的活性；正在被治疗的个体的年龄、体重、总体身体健康状 况、性别以及饮食；给药时间及途径；排泄率；先前已经给予的其他药物； 以及经历治疗的具体疾病的严重性。

如本领域技术人员将理解的，在一些情况下可能有必要使用这些范围外 的剂量。此外，应当注意临床医生或治疗医生结合个体患者反应将知道如何 以及何时开始、中断、调节、或终止治疗。

以下实例旨在说明但并非限制本发明的范围。

实验部分

在下文中，术语“AcOH”表示乙酸，“AcOEt”表示乙酸乙酯，“DCM”表示 二氯甲烷，“DIPE”表示二异丙醚，“DMF”表示N，N-二甲基甲酰胺，“DMSO” 表示二甲亚砜，“Et₂O”表示二乙醚，“Et₃N”表示三乙胺，“EtOH”表示乙醇， “MeCN”表示乙腈，“DCE”表示1，2-二氯乙烷，“MeOH”表示甲醇，“m.p.”表示 熔点，“rac”表示消旋的，“R_t”表示保留时间，“THF”表示四氢呋喃，“K₂CO₃” 表示碳酸钾，“NH₃”表示氨，“NH₄Cl”表示氯化铵，“HCl”表示盐酸， “Na₂SO₄”表示硫酸钠，“NaHCO₃”表示碳酸氢钠，“KHSO₄”表示硫酸氢钾， “MgSO₄”表示硫酸镁，“H₂O”表示水，“TFA”表示三氟乙酸，“sat.”表示饱和 的，“aq.”表示水性的，“min”表示分钟，“Pd₂(dba)₃”表示三(二苯亚甲基丙酮) 二钯(0)，“Pd(PPh₃)₄”表示四(三苯基膦)合钯(0)，“BINAP”表示2，2′-双(二苯基 膦基)-1，1′-联萘基，“TBAF”表示氟化四丁基铵，“NaH”表示氢化钠，“DDQ”表 示2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌，“DBU”表示1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一-7- 烯。

在一个单模反应器中进行微波辅助反应：Emrys^TM Optimizer微波反应器 (Personal ChemistryA.B.，currently Biotage)。

在来自ThalesNano纳米技术公司(ThalesNano Nanotechnology Inc.)的 一个连续流氢化器中进行氢化反应。

使用试剂级溶剂，在硅胶60F254板(默克公司)上进行薄层色谱 (TLC)。在标准技术下，在硅胶上进行开口柱色谱，粒度，网目=230- 400(默克公司)。使用来自默克公司的随时连接筒(ready-to-connect  cartridge)，在来自Armen Instrument的SPOT或LAFLASH系统上，在不规 则硅胶(粒度15-40μm(普通层一次性使用的快速柱))上进行快速柱色 谱。

在Perkin-Elmer341旋光计上用钠灯测量旋光度并且记录如下：[α]°(λ， cg／100ml，溶剂，T℃)。

A.中间体的制备

实例A1

中间体A1的制备：

将三甲基甲硅烷基氰化物(20g，200mmol)添加到在NH₃／MeOH(400 mL)中的3-溴-苯乙酮(20g，100mmol)和NH₄Cl(11g，200mmol)的搅 拌溶液中。将该混合物在室温下搅拌4天。然后在真空中蒸发溶剂并且将残 余物吸收到AcOEt(100mL)中。过滤掉固体并且将滤液在真空中蒸发以获 得中间体A1(20g，86％产率)，将其不进一步纯化而用于下一步骤中。

实例A2

中间体A2的制备：

将中间体A1(20g，88.9mmol)溶解于HCl／MeOH(500mL)中。将 该混合物回流4天。在冷却到室温之后，添加AcOEt(100mL)和H₂O(100 mL)并且将该混合物用AcOEt(2×100mL)萃取。

将合并的水层用NH₃水溶液碱化至pH=8并且用AcOEt(5×100mL) 萃取。干燥(Na₂SO₄)这些合并的有机层，过滤并且在真空中蒸发溶剂，以 获得为一种油的中间体A2(10.6g，46％产率)。

根据实例A1-A2中描述的合成程序制备以下中间体：

实例A3

中间体A3的制备：

来自rac-2-氨基-2-(3-硝基-苯基)-丙腈。快速柱色谱(硅胶；AcOEt于石 油醚中，1/10至1/4)以获得中间体3(63％产率)。

实例A4

中间体A4的制备：

在-15℃，将氢化铝锂(1M，在THF中；22mL，22mmol)滴加到在 THF(200mL)中的中间体A2(7.5g，29.1mmol)的搅拌溶液中。在1个小 时期间，将该混合物缓慢加热至0℃。添加更多的THF(150mL)并且滴加 Na₂SO₄的饱和溶液直到不再有氢气形成。添加无水Na₂SO₄并且允许该反应在 室温搅拌过夜。将该混合物用硅藻土过滤，用THF洗涤并且在真空中蒸发溶 剂。通过快速柱色谱(硅胶；在MeOH中的NH₃的7M溶液，在DCM中，0/100 至3/97)纯化该粗产物。收集所希望的部分并且在真空中蒸发溶剂，以获得为 一种油的中间体A4(5.70g，85％产率)。

实例A5

中间体A5的制备：

将硼氢化钠(16.3g，429.4mmol)分批添加到在MeOH(500mL)中的 中间体A3(48.3g，214.7mmol)的搅拌溶液中。将该混合物在室温下搅拌10 小时。在真空中蒸发溶剂。将残余物用NaHCO₃的饱和水溶液碱化直至pH＝9 并且用AcOEt(3×200mL)萃取。干燥(Na₂SO₄)这些有机层，过滤并且在 真空中蒸发溶剂，以获得中间体A5(30.26g，72％产率)。

实例A6

中间体A6的制备：

将苯甲酰氯(4.66mL，32.6mmol)在0℃分批添加到在饱和的 NaHCO₃(10mL)与THF(10mL)的混合物中的中间体A4(5g，21.73 mmol)的搅拌溶液中。

将该混合物在0℃搅拌10min并且在室温下搅拌15小时。将该混合物 在冰/H₂O浴中冷却并且边搅拌边用KHSO₄酸化至pH＝1-2。分离有机层并且 将水层进一步用AcOEt萃取。分离合并的有机层，干燥(MgSO₄)，过滤并 在真空中蒸发溶剂。通过快速柱色谱(硅胶；AcOEt在DCM中，0/100至 20/80)纯化该粗产物。收集所希望的部分并且在真空中浓缩，以获得为无色 油的中间体A6(7.8g，98％产率)。

实例A7

中间体A7的制备：

将在干MeCN(20mL)中的中间体A6(8g，21.9mmol)的溶液滴加 到冷却至-40℃并且在氮气氛下的在干MeCN(100mL)中的亚硫酰二氯 (4.01mL，54.9mmol)的搅拌溶液中。添加吡啶(8.84mL，109.8mmol)之 前，将该反应混合物在-40℃搅拌60min。允许该反应加热至室温并且搅拌 14小时。在真空中蒸发溶剂。将残余物用Et₂O进行处理，并且将固体过滤出 并且将滤液在真空中浓缩，以获得为一种淡黄色油的中间体A7(8g，89％产 率)。该产物不进一步纯化而用于下一反应中。

实例A8

中间体A8的制备：

在0℃，将氯化钌(III)(41mg，0.195mmol)添加到中间体A7(8g， 19.5mmol)在MeCN/H₂O(1∶1)(210mL)的混合物中，随后添加高碘酸 钠(6.26g，29.25mmol)。允许该反应加热至室温并且搅拌2小时。将混合 物用AcOEt稀释，用硅藻土过滤并且用AcOEt洗涤。向该滤液中添加H₂O和 AcOEt。分离有机层，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发溶剂。通过快速 柱色谱(硅胶；DCM)纯化该产物。收集所希望的部分并且在真空中浓缩， 以获得为淡黄色油的中间体A8(8g，96％产率)。

实例A9

中间体A9的制备：

在0℃，将二叔丁基二碳酸酯(10g，45.87mmol)分批添加到在饱和 NaHCO₃(50mL)与THF(50mL)的混合物中的中间体A5(3g，15.29 mmol)的搅拌溶液中。将该混合物在0℃搅拌10min并且在室温下搅拌15 小时。将该混合物在冰/H₂O浴中冷却并且边搅拌边用KHSO₄酸化至pH＝1- 2。分离有机层并且将水层进一步用AcOEt萃取。分离合并的有机层，干燥 (MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发溶剂。通过快速柱色谱(硅胶；AcOEt在 DCM中，0/100至100/0)纯化该粗产物。收集所希望的部分并且真空中进行 浓缩，以获得静置后固化的、为一种淡黄色油的中间体A6(4.5g，99％产 率)。

实例A1O

中间体A10的制备：

将在干MeCN(20mL)中的中间体A9(4.5g，15.18mmol)的溶液滴 加到冷却至-40℃并且在氮气氛下的在干MeCN(80mL)中的亚硫酰二氯 (2.771mL，37.96mmol)的搅拌溶液中。添加吡啶(6.12mL，75.93 mmol)之前，将该反应混合物在-40℃搅拌30min。允许该反应加热至室温 并且搅拌18小时。在真空中蒸发溶剂。将残余物用Et₂O处理。过滤出固体 并且将滤液在真空中浓缩，以获得为一种油的中间体A10(4.8g，92％产 率)。该产物不进一步纯化而用于下一反应中。

实例A11

中间体A11的制备

在0℃，将氯化钌(III)(29.5mg，0.14mmol)添加到在MeCN/H₂O(1∶ 1)(100mL)中的中间体A10(4.8g，14.02mmol)的混合物中，随后添加 高碘酸钠(4.5g，21.03mmol)。允许该反应加热至室温并且搅拌2小时。将 混合物用AcOEt稀释，用硅藻土过滤并且用AcOEt洗涤。向该滤液中添加H₂O 和盐水。分离有机层，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发溶剂。通过快 速柱色谱(硅胶；DCM)纯化该产物。收集所希望的部分并且在真空中浓 缩，以获得为淡黄色油的中间体A11(4.9g，97％产率)。

根据实例A9-A11中描述的合成程序制备中间体A12：

实例A12

中间体A12：(R)-[3-(叔丁氧羰基)-4-(5-溴-2-氟苯基)-4-甲基-[1，1，3]氧杂噻 唑烷-2，2-二氧化物的制备

制备自(R)-[3-(叔丁氧羰基)-4-(5-溴-2-氟苯基)-4-甲基-[1，1，3]氧杂噻唑烷- 2-氧化物(14.5g，36.79mmol)。进行快速柱色谱(硅胶；DCM)以获得为 白色固体的中间体A12(11.6g，77％产率)。

实例A13

中间体A13的制备：

在室温下，将碳酸铯(3.06g，9.83mmol)添加到在MeCN(16mL)中 的中间体A8(2g，4.69mmol)和1H-吡咯-2-羧酸乙酯(763mg，6.1mmol) 的混合物中。在微波辐射下，将该混合物在130℃加热30min。将该混合物用 DCM稀释并且用H₂O洗涤。分离有机相并且用H₂O(10mL)处理并且用DCM (2×10mL)萃取。分离有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空中蒸发溶 剂。通过快速柱色谱(硅胶；DCM)纯化该粗产物。收集所希望的部分并且 在真空中蒸发溶剂，以获得为一种无色油的中间体A13(1.7g，77％产率)。

实例A14

中间体A14的制备：

在0℃，在密封管中，将三氟化硼二乙基醚合物(4.53mL，36.1mmol) 添加到中间体A13(1.7g，3.61mmol)中，随后添加乙硫醇(8.01mL，108.2 mmol)。允许该混合物加热至室温并且在60℃搅拌3小时。将溶剂在真空中 蒸发并且将残余物溶解于DCM中并用饱和NaHCO₃洗涤。分离有机层，干燥 (Na₂SO₄)，过滤并在真空中蒸发溶剂。通过快速柱色谱(硅胶；AcOEt在 DCM中，0/100至50/50)纯化该粗产物。收集所希望的部分并且在真空中蒸 发溶剂，以获得为一种无色油的中间体A14(950mg，78％产率)。

实例A15

中间体A15的制备：

在室温下，将在MeOH中的25wt.％甲醇钠(1.284mL，5.36mmol)中 添加到在MeOH(8mL)中的中间体A14(950mg，2.82mmol)的溶液中。 将该混合物在55℃搅拌18小时。在真空中蒸发溶剂。将该残余物用NH₄Cl的饱 和水溶液进行处理并且用DCM萃取。将有机层分离、干燥(Na₂SO₄)、过滤 并且在真空中蒸发溶剂以获得为一种白色固体的中间体A15(850mg，99％产 率)，将其不进一步纯化而用于以下步骤中。

实例A16

中间体A16的制备：

将五硫化磷(940mg，4.23mmol)添加到在吡啶(7mL)中的中间体 A15(860mg，2.82mmol)的溶液中并且将该混合物在110℃加热38小时。在 真空中蒸发溶剂并且将粗产物通过短柱色谱(硅胶；AcOEt于DCM中，0/100 至100/0)进行纯化。收集所希望的部分并且在真空中蒸发溶剂，以获得为黄 色固体的中间体A16(830mg，92％产率)。

实例A17

中间体A17的制备：

将在丙酮(10mL)中的甲基碘(0.267mL，4.296mmol)与K₂CO₃ (0.59g，4.296mmol)添加到中间体A16(690mg，2.15mmol)的溶液中并 且将该混合物在室温搅拌3小时。在真空中蒸发溶剂并且将该粗产物吸收到 DCM(25mL)和H₂O(25mL)中。分离有机层，干燥(MgSO₄)，过滤并 在真空中蒸发溶剂。通过快速柱色谱(硅胶；AcOEt在DCM中，0/100至 50/50)纯化该粗产物。收集所希望的部分并且在真空中蒸发溶剂，以获得为 淡黄色固体的中间体A17(700mg，97％产率)。

实例A18

中间体A18的制备：

将NH₄Cl(447mg，8.35mmol)添加到在EtOH(39.67mL，79.34 mmol)中的NH₃的2M溶液中的中间体A17(700mg，2.09mmol)的悬浮 液中并且将该混合物在90℃加热24小时。将该溶剂在真空中蒸发并且将该 残余物悬浮于在EtOH(20mL，40mmol)中的NH₃的2M溶液中。添加 NH₄Cl(447mg，8.35mmol)并且将该混合物在90℃加热2天。在真空中蒸 发溶剂并且将残余物悬浮于DCM中并用H₂O洗涤。分离有机层，干燥 (MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发溶剂。通过快速柱色谱(硅胶；7M NH₃溶液在MeOH/DCM中，0/100至20/80)纯化该产物。收集所希望的部分并且 在真空中蒸发溶剂，以获得为淡黄色固体的中间体A18(550mg，86％产 率)。

实例A19

中间体A19的制备：

将碳酸铯(2.73g，8.37mmol)添加到在MeCN(16mL)中的中间体 A11(1.5g，4.186mmol)和1H-吡咯-2-羧酸乙酯(681mg，5.441mmol)的 混合物中。在微波辐射下，将该混合物在130℃搅拌30min。将该反应混合物 用DCM稀释并且用水性HCl(1N)洗涤。分离有机层，干燥(Na₂SO₄)，过 滤并在真空中蒸发溶剂。通过快速柱色谱(硅胶；DCM)纯化该粗产物。收 集所希望的部分并且在真空中蒸发溶剂，以获得为一种无色油的中间体A19 (1.5g，89％产率)。

实例A20

中间体A20的制备：

将HCl(9.295mL，37.181mmol，4M在1,4-二噁烷中)添加到中间体 A19(1.5g，3.718mmol)中并且将该混合物在室温下搅拌1小时。在真空中 蒸发溶剂并且将残余物悬浮于DCM中并用NaHCO₃的饱和水溶液洗涤。将有 机层分离、干燥(Na₂SO₄)、过滤并且在真空中蒸发溶剂以获得中间体A20 (1.1g，97％产率)，将其不进一步纯化而用于下一反应步骤中。

实例A21

中间体A21的制备：

在室温下，将MeOH(0.909mL，3.99mmol)中的25wt.％甲醇钠添加 到在MeOH(10mL)中的中间体A20(1.1g，3.63mmol)的溶液中。将该混 合物在65℃搅拌18小时。在真空中蒸发溶剂。将该残余物用NH₄Cl的饱和水溶 液进行处理并且用DCM萃取。分离有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空 中蒸发溶剂。通过快速柱色谱(硅胶；AcOEt)纯化该粗产物。收集所希望的 部分并且在真空中蒸发溶剂，并且将所得残余物用DIPE研磨，以获得为白色 固体的中间体A21(650g，66％产率)。

实例A22

中间体A22的制备：

将五硫化磷(799mg，3.59mmol)添加到在吡啶(10mL)中的中间体 A21(650mg，2.4mmol)的溶液中并且将该混合物在100℃加热18小时。在 真空中蒸发溶剂并且将粗产物通过短柱色谱(硅胶；AcOEt在DCM中，0／100 至100／0)进行纯化。收集所希望的部分并且在真空中蒸发溶剂，以获得为黄 色固体的中间体A22(535mg，78％产率)。

实例A23

中间体A23的制备：

将甲基碘(0.232mL，3.724mmol)和K₂CO₃(0.515g，3.724mmol)添 加到在丙酮(10mL)中的中间体A22(535mg，1.86mmol)的溶液中并且将 该混合物在室温下搅拌3小时。在真空中蒸发溶剂并且将该粗产物吸收到DCM (25mL)和H₂O(25mL)中。分离有机层并且将水层用DCM(3x25mL) 萃取。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发溶剂。通过快 速柱色谱(硅胶；AcOEt在DCM中，0／100至50／50)纯化该粗产物。收集所希 望的部分并且在真空中蒸发溶剂，以获得为淡黄色固体的中间体A23(490 mg，87％产率)。

实例A24

中间体A24的制备：

将在EtOH(28mL)中的中间体A23(490mg，1.626mmol)的溶液在 H-Cube反应器(1mL／min，30mm Pd／C5％筒，满H₂模式(full H₂mode)， 室温，2个循环)中进行氢化。然后，在真空中蒸发溶剂。通过快速柱色谱 (硅胶；在MeOH中的7M NH₃，在DCM中，0／100至10／90)纯化该粗产物。 收集所希望的部分并且在真空中蒸发溶剂，以获得为一种无色油的中间体A24 (100mg，23％产率)。

实例A25

中间体A25的制备：

将NH₄Cl(78.8mg，1.474mmol)添加到在EtOH(7mL，14mmol)中 的2M NH₃溶液中的中间体A24(100mg，0.368mmol)的溶液中并且将该 混合物在80℃加热3天。在真空中蒸发溶剂并且将残余物悬浮于DCM中并 用H₂O洗涤。分离有机层，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发溶剂。通 过快速柱色谱(硅胶；7M NH₃溶液在MeOH／DCM中，0／100至20／80)纯化 该产物。收集所希望的部分并且在真空中蒸发溶剂，以获得为淡黄色固体的 中间体A25(80mg，90％产率)。

实例A26

中间体A26的制备：

将5-氯-吡啶-2-羧酸(172mg，1.09mmol)添加到在MeOH(5mL)中 的4-(4，6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(330mg，1.19 mmol)的溶液中。将该混合物在室温下搅拌5min。然后将该混合物冷却至 0℃并且添加在MeOH(5mL)中的中间体A24(270mg，0.995mmol)的溶 液。将该混合物加热至室温并搅拌3小时。将该混合物用Na₂CO₃和H₂O的饱 和溶液进行处理并且用DCM萃取。分离有机层，干燥(MgSO₄)，过滤并在 真空中蒸发溶剂。通过快速柱色谱(硅胶；AcOEt在庚烷中50／50)纯化该粗 产物。收集所希望的部分并且在真空中蒸发溶剂，以获得为白色固体的中间 体A26(200mg，49％产率)。

实例A27

中间体A27的制备：

在室温下，将碳酸铯(18.27g，56.06mmol)添加到在MeCN(40mL) 中的中间体A12(11.5g，28.01mmol)和1H-吡咯-2-羧酸乙酯(4.56g，36.44 mmol)的混合物中。将该混合物在室温下搅拌20min并且然后在微波辐射下 将其在130℃加热30min。将该混合物用DCM稀释并且用H₂O洗涤。将有机相 干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空中蒸发溶剂。通过快速柱色谱(硅胶；DCM／ 庚烷，90／10)纯化该粗产物。收集所希望的部分并且在真空中蒸发溶剂，以 获得为粘性固体的中间体A27(10.7g，83％产率)。

实例A28

中间体A28的制备：

将HCl(15mL，60mmol，4M在1,4-二噁烷中)添加到中间体A27(9.5 g，20.864mmol)中并且将该混合物在室温下搅拌90min。在真空中蒸发溶剂 以获得不进一步纯化而用于下一反应步骤中的中间体A28(10g，不纯， 122％产率)。

实例A29

中间体A29的制备：

在室温下，将在MeOH中的25wt.％甲醇钠(15.714mL，68.93mmol) 添加到在MeOH(30mL)中的中间体A28(950mg，2.82mmol)的溶液中。 将该混合物在60℃搅拌18小时。在真空中蒸发溶剂。将该残余物用NH₄Cl的饱 和水溶液进行处理并且用DCM萃取。分离有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤并 在真空中蒸发溶剂。通过快速柱色谱(硅胶；AcOEt在DCM中，0／100至 20／80)纯化该粗产物。收集所希望的部分并且在真空中蒸发溶剂，以获得为 白色固体的中间体A29(1.5g，18％产率)。

实例A30

中间体A30的制备：

在室温下，将三甲基氧鎓四氟硼酸(2.56g，17.33mmol)添加到在 DCM(5mL)中的中间体A29(1.4g，4.33mmol)的溶液中。将该混合物在 室温下搅拌4天。稀释该反应混合物并且然后用冷的饱和NaHCO₃水溶液进行 处理。将有机层分离、干燥(MgSO₄)、过滤并且在真空中蒸发溶剂以获得 为一种灰白色固体的中间体A30(910mg，62％产率)，将其不进一步纯化而 用于下一反应步骤中。

实例A31

中间体A31的制备：

将NH₄Cl(577mg，10.79mmol)添加到在EtOH(5mL，10mmol)中 的2M NH₃溶液中的中间体A30(910mg，2.7mmol)的溶液中并且将该混 合物在80℃于一个密封管中加热36小时。将该混合物冷却至室温并且添加 NH₄Cl(432mg，8.1mmol)以及在EtOH(5mL，10mmol)中的2M NH₃溶液，并且将该混合物在80℃在一个密封管中加热36小时。将该混合物冷 却至室温并且添加NH₄Cl(432mg，8.1mmol)以及在EtOH(5mL，10 mmol)中的2M NH₃溶液，并且将该混合物在80℃在一个密封管中加热48 小时。在真空中蒸发溶剂并且将残余物悬浮于DCM中并用H₂O(4-5mL)洗 涤。分离有机层，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发溶剂。将所得粗产 物吸收到DCM中并且将沉淀出的固体过滤掉以获得为白色固体的中间体A31 (458mg，53％产率)。

实例A32

中间体A32的制备：

将叔丁醇钠(0.329g，3.43mmol)添加到在甲苯(8.7mL)中的中间体 A31(0.41g，1.143mmol)的混合物中。将该混合物搅拌5min并且然后在 氮气氛下在室温下添加rac-BINAP(0.213g，0.343mmol)以及Pd₂(dba)₃(105mg，0.114mmol)。将该混合物用氮气冲洗几分钟并且然后添加二苯 甲酮亚胺(0.383mL，2.286mmol)并且将该混合物在100℃搅拌2小时。冷 却至室温之后，将该混合物用H₂O稀释并且用DCM萃取。分离有机层，干 燥(MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发溶剂。通过快速柱色谱(硅胶；NH₃在 MeOH中的7M溶液，在DCM中，0／100至50／50)纯化该粗产物。收集所 希望的部分并且在真空中蒸发溶剂，以获得溶于HCl(6mL，36mmol，6M 在异丙醇中)中的粗品，并且将该混合物在室温下搅拌1小时。在真空中蒸 发溶剂。然后将该残余物吸收到DCM和异丙醇中并且添加固体NaHCO₃，并 且将该混合物在室温下搅拌2小时。过滤掉固体并且将滤液在真空中蒸发以 获得为一种粘性油的中间体A32(400mg，136％产率)，将其不进一步纯化 而用于下一反应步骤中。

实例A33

中间体A33的制备：

在室温下，向在MeCN(150mL)中的中间体A12(7.5g，18.281 mmol)和4-氟-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(2.9g，20.263mmol)混合物中添加DBU (5.5mL，36.814mmol)。将该混合物在90℃搅拌16小时。在冷却之后，蒸 发大部分溶剂并且将残余物溶解于DCM中并用0.5M HCl洗涤。分离有机层， 干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空中浓缩。将该残余物溶解于DCM(100mL) 中并且添加TFA(15mL)。将该混合物在室温下搅拌2小时。在真空中蒸发 溶剂。将该混合物用饱和Na₂CO₃碱化并且用DCM萃取。分离有机层，干燥 (Na₂SO₄)，过滤并在真空中蒸发溶剂。通过快速柱色谱(硅胶；MeOH在 DCM中，0／100至1／99)纯化该粗产物。收集所希望的部分并且在真空中浓 缩，以获得为灰白色固体的中间体A33(4.78g，70％产率)。

实例A34

中间体A34的制备：

根据实例A15中描述的合成程序从中间体A33制备中间体34。快速柱 色谱(硅胶；MeOH在DCM中，0／100至1／99)以获得为一种灰白色固体的 中间体A34(4.3g，98％产率)。

实例A35

中间体A35的制备：

将五硫化磷(14g，63.021mmol)添加到在THF(150mL)中的中间体 A34(4.3g，12.604mmol)的溶液中并且将该混合物在70℃加热24小时。将 反应物用硅藻土过滤并且用THF洗涤。将滤液在真空中浓缩。通过快速柱色 谱(硅胶；DCM)纯化残余物。收集所希望的部分并且在真空中浓缩，以获 得为淡黄色固体的中间体A35(3.65g，81％产率)。

实例A36

中间体A36的制备：

将叔丁基过氧化氢(70％，5.406mL，38mmol)添加到在MeOH(40 mL)中的7N NH₃中的中间体35(1.350g，3.779mmol)的溶液中。将该混 合物在室温下搅拌40小时。在真空中部分蒸发溶剂并且将残余物用DCM进 行处理并用稀释的Na₂CO₃溶液洗涤。分离有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤并 在真空中蒸发溶剂。通过快速柱色谱(硅胶；在MeOH中的7M NH₃溶液， 在DCM中，0／100至2／98)纯化该粗产物。收集所希望的部分并且在真空中 浓缩，以提供为黄色固体的中间体A36(990mg，77％产率)。

实例A37

中间体A37的制备：

在室温下，在氮气下，将甲苯(20mL)添加到中间体A36(400mg， 1.176mmol)、Pd₂(dba)₃(0.108g，0.118mmol)、BINAP(0.22g，0.353 mmol)以及叔丁醇钠(0.203g，2.177mmol)的混合物中。将该混合物用氮 气冲洗几分钟，然后添加二苯甲酮亚胺(0.359mL，2.352mmol)并且将该混 合物在90℃搅拌16小时。在冷却之后，将该混合物用H₂O稀释并且用DCM萃 取。分离有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空中浓缩溶剂。通过快速柱 色谱(硅胶；在MeOH中的7N NH₃溶液，在DCM中，0／100至1／99至5／95)纯 化该粗产物。收集所希望的部分并且在真空中浓缩，以获得为黄色泡沫的中 间体A37(440mg，85％产率)。

实例A38

中间体A38的制备：

将HCl(37％在H₂O中；500μL，16.182mmol)添加到在异丙醇(20 mL)中的中间体A37(920mg，2.089mmol)的溶液中。将该混合物在室温 下搅拌20min，然后在真空中浓缩并且重新溶解于25mL的异丙醇中。然后添 加NaHCO₃，并且将该混合物在室温下搅拌1小时。过滤该混合物并且将滤液 在真空中浓缩。通过快速柱色谱(硅胶；在MeOH中的7N NH₃，在DCM中， 1／99至10／90)纯化该产物。收集所希望的部分并且在真空中浓缩，以获得为 灰白色泡沫的中间体A38(470mg，81％产率)。

实例A39

中间体A39的制备：

在氮气氛下，在-78℃，将草酰氯(5.175mL，61.16mmol)滴加到在 DCM(103mL)中的DMSO(4.668mL，65.2mmol)的溶液中。将该混合物 在-78℃搅拌15min。然后添加N-boc-反式-4-羟基-1-脯氨酸甲酯(10g，40.77 mmol)并且将所得混合物在-40℃搅拌2小时。然后添加Et₃N(17mL，122 mmol)并且允许该混合物缓慢加热至室温并搅拌过夜。然后将该混合物用 10％柠檬酸溶液稀释并且用DCM萃取。将有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并且 在真空中浓缩，以获得为棕色油的中间体A39(10g)。

该粗品不进一步纯化而用于下一步骤中。

实例A40

中间体A40的制备：

将(三氟甲基)三甲基硅烷(8.768g，61.663mmol)在0℃添加到在THF (114mL)中的中间体A39(10g)的溶液中，随后添加TBAF(1M在THF 中，2.47mL，247mmol)。将该反应混合物加热至室温并且搅拌18小时。将 该混合物用饱和水性NH₄Cl进行淬灭。将该混合物搅拌15min，然后添加 TBAF(1M在THF中，5mL，5mmol)并且将该混合物搅拌30min。分离有 机层并且将水层用Et₂O萃取。将合并的有机相用H₂O和盐水溶液洗涤，然后用 Na₂SO₄干燥，过滤并在真空中浓缩。

通过快速柱色谱(硅胶；庚烷在AcOEt中，0／100至90／10)纯化该粗产 物。收集所希望的部分并且在真空中浓缩，以获得中间体A40(7.8g，61％产 率)。

实例A41

中间体A41的制备：

将亚硫酰二氯(14.352mL，196.633mmol)添加到在吡啶(188mL)中 的中间体A40(7.7g，24.579mmol)中。在氮气氛下将该混合物在80℃搅拌1 小时。将该混合物用H₂O淬灭，然后用Et₂O萃取。将有机层用HCl1M、 NaHCO₃饱和溶液洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速柱色 谱(硅胶；庚烷在AcOEt中，0／100至80／20)纯化该粗产物。收集所希望的部 分并且在真空中浓缩，以获得为黄色油的中间体A41(4.6g，63％产率)。

实例A42

中间体A42的制备：

将DDQ(16.607g，73.16mmol)添加到在二噁烷(45mL)中的中间体 A41(7.2g，24.385mmol)中。将该混合物在85℃搅拌104小时。将该混合物 过滤出并且将滤液在真空中浓缩。通过快速柱色谱(硅胶；DCM在庚烷中 40／60)纯化残余物。收集所希望的部分并且在真空中浓缩，以获得为棕色膏 的中间体A42(4g，85％产率)。

实例A43

中间体A43的制备：

将DBU(2.85mL，19mmol)添加到在MeCN(40mL)中的中间体A12 (6.07g，14.84mmol)和中间体A42(2g，10.356mmol)的混合物中。然后 将该混合物在90℃加热18小时。将反应物用DCM稀释并且用HCl1N溶液洗 涤。分离有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空中蒸发溶剂。通过快速柱 色谱(硅胶；DCM)纯化该产物。收集所希望的部分并且在真空中浓缩，以 获得为一种粘性固体的中间体A43(4.6g，59％产率)。

实例A44

中间体A44的制备：

根据实例A20-A23中描述的合成程序从中间体A43制备中间体A44：将该 化合物作为一种粗品用于随后的反应并且产率被假定为是定量的。

实例A45

中间体A45的制备：

该反应被设立为三个批次。记录了物质的总量。

将NH₃(2M在EtOH中，47mL，94mmol)添加到中间体A44(2.3g， 5.46mmol)和NH₄Cl(2.315g，43.7mmol)中。将该混合物在微波辐射下在 170℃加热45min，然后在真空中浓缩。添加另外45mL的NH₃(2M在EtOH 中)并且将该混合物在微波辐射下在170℃加热45min。过滤该混合物，然后 在真空中浓缩。通过快速柱色谱(硅胶；MeOH在DCM中，0／100至3／97)纯 化该粗品。收集所希望的部分并且在真空中浓缩，以获得中间体A45(2.1g， 99％产率)。

根据在实例A37-A38中描述的合成程序制备中间体A46：

实例A46

中间体A46的制备：

制备自中间体A45。使用DCM从粗制反应混合物中沉淀化合物(89％产 率)。

根据在实例A9-A11中描述的合成程序制备中间体A47：

实例A47

中间体A47的制备：

制备自氨基甲酸、N-[1-(5-溴-2-氟苯基)-2,2-二氟-1-(羟甲基)乙基]-，1，1-二 甲基乙酯。将该粗产物用庚烷研磨并过滤。将该灰色固体溶解于DCM中并且 通过快速柱色谱(硅胶；DCM)进行纯化。收集所希望的部分并且在真空中 浓缩，以获得为白色固体的中间体A47(78％产率)。

实例A48

中间体A48的制备：

在0℃，在氮气下，将NaH(在矿物油中的60％分散体，269mg，6.723 mmol)添加到在DMF(20mL)中的2-吡咯羧酸甲酯(841mg，6.723 mmol)的混合物中。然后将该混合物在0℃搅拌10min，并且然后添加在DMF (10mL)中的中间体A47(2g，4.482mmol)的溶液并且将该混合物在室温 下搅拌20小时。将反应物用饱和NH₄Cl淬灭并且用AcOEt萃取。将有机层分 离、干燥(MgSO₄)、过滤并且在真空中蒸发溶剂，以获得为一种油的中间 体A48(2.2g，100％产率)，将其不进一步纯化而用于下一步骤中。

根据在实例A20中描述的合成程序制备中间体A49：

实例A49

中间体A49的制备：

制备自中间体A48。进行快速柱色谱(硅胶；AcOEt在庚烷中，0／100 至15／85)以获得中间体A49(100％产率)。

实例A50

中间体A50的制备：

在一个密封管中，在0℃，将三甲基铝(2M在甲苯中；4.47mL，8.9 mmol)添加到在THF(20mL)中的中间体A49(1.75g，4.47mmol)的搅 拌混合物中。将该混合物在100℃搅拌2小时。将该混合物冷却至室温，倒 入烧瓶中，在0℃冷却并且用十水硫酸钠淬灭。将该混合物搅拌15min，然 后过滤并且在真空中蒸发滤液以获得为一种固体的中间体A49(1.657g， 103％产率)，将其不进一步纯化而用于下一步骤中。

根据在实例A16中描述的合成程序制备中间体A51：

实例A51

中间体A51的制备：

制备自中间体A50。进行快速柱色谱(硅胶；MeOH在DCM中，0／100 至05／95)以获得为一种淡黄色固体的中间体A51(52％产率)。

实例A52

中间体A52的制备：

将NH₃水溶液(7mL)添加到在MeOH(7mL)中的7N NH₃溶液中的 中间体A51(700mg，1.866mmol)的溶液中并且将该混合物在90℃在密封 管中加热21小时。然后蒸发溶剂并且添加更多的水性NH₃和在MeOH中的7 N NH₃。将该混合物在90℃搅拌24小时。在真空中蒸发溶剂。通过快速柱色 谱(硅胶；MeOH在DCM中，0／100至03／97)纯化该粗产物。收集所希望的 部分并且在真空中浓缩，以获得中间体A52(464mg，69％产率)。

根据在实例A37-A38中描述的合成程序制备中间体A53：

实例A53

中间体A53的制备：

制备自中间体A52。通过快速柱色谱(硅胶；7N NH₃在MeOH中，在 DCM中，0／100至10／90)。收集所希望的部分并且在真空中浓缩，以获得中 间体A53(69％产率)。

实例A54

中间体A54的制备：

在室温下，向在DCE(80mL)中的2-氨基-2-(5-溴-2-氟苯基)-1,3-丙二醇 (4.2g，15.9mmol)和原丙酸三乙酯(3.52mL，17.5mmol)的搅拌溶液中 添加一滴AcOH。将该混合物在80℃下加热90min，并且然后用饱和的水性 Na₂CO₃处理，然后用DCM萃取。将有机层分离、干燥(MgSO₄)、过滤并且 在真空中蒸发溶剂，以提供一种油(4.63g)，将其不进一步纯化而用于下一 步骤中。

实例A55

中间体A55的制备：

在0℃，在氮气下，将NaH(在矿物油中的60％分散体，735mg，18.4 mmol)添加到在DMF(40mL)中的中间体A54(4.63g，15.3mmol)的溶 液中。将该混合物在0℃搅拌10min，然后添加甲基碘(1.91mL，30.65 mmol)。将该混合物在室温下搅拌90min，然后用水性饱和NH₄Cl淬灭并且 用庚烷萃取。将有机层分离、干燥(MgSO₄)、过滤并且在真空中蒸发溶剂 以获得为一种油的中间体A55(4.73g)，将其不进一步纯化而用于下一步骤 中。

实例A56

中间体A56的制备：

将在HCl(6M在H₂O中，40mL)的中间体A55(4.95g，15.7mmol) 的溶液在100℃加热1小时。然后蒸发溶剂以给出为一种油的中间体A56 (4.3g)，将其不进一步纯化而用于下一步骤中。

根据在实例A9-A11、A43、A20、A50、A35、A36中描述的合成程序制 备中间体A57：

实例A57

中间体A57的制备：

制备自中间体A56。进行快速柱色谱(硅胶；在MeOH中的7N NH₃， 在DCM中，0／100至5／95)以获得中间体A57(68％产率)。

实例A58

中间体A58的制备：

将碘化亚铜(84mg，0.41mmol)添加到在DMSO(13mL)中的中间 体A57(617mg，1.47mmol)、叠氮化钠(242mg，3.67mmol)、N，N’-二 甲基乙二胺(142μL，1.32mmol)以及Na₂CO₃(447mg，4.41mmol)的悬 浮液中并且将反应物除气。将该混合物在110℃加热25小时，然后用1M HCl进行淬灭并且将水层用NH₄OH进行碱化并且用AcOEt(3x)萃取。分离 合并的有机层，干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩。通过快速柱色谱(二氧化 硅；在MeOH中的7N NH₃溶液，在DCM中，0／100至5／95)纯化该粗产 物。收集所希望的部分并且在真空中浓缩，以获得中间体A58(480mg， 92％产率)。

最终化合物的制备

实例B1

化合物1：rac-3-甲基-3-(3-嘧啶-5-基-苯基)-3,4-二氢-吡咯并[1，2-a]吡嗪-1- 基胺的制备

三氟乙酸盐

在一个密封管中，将Pd(PPh₃)₄(57mg，0.049mmol)添加到在1,4-二噁 烷(4mL)与EtOH(0.4mL)的混合物中的中间体A18(300mg，0.99 mmol)、嘧啶-5-硼酸(367mg，2.96mmol)和K₂CO₃(409mg，2.96 mmol)的搅拌悬浮液中。在微波辐射下，将该混合物在150℃加热30min。 在冷却至室温之后，将该混合物用H₂O进行稀释并且用DCM萃取。分离有 机层，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发溶剂。通过短柱色谱(硅胶；7 M NH₃溶液在MeOH／DCM中，0／100至3／97)纯化该粗产物。收集所希望的 部分并且在真空中浓缩，以给出一种固体，将该固体用Et₂O研磨、超声处 理、过滤并在50℃下在真空中干燥以获得一种固体，将该固体通过反相 HPLC(梯度从80％的在H₂O中的0.1％TFA溶液、20％MeCN至0％的在 H₂O中的0.1％TFA溶液、100％MeCN)进一步纯化以获得为一种固体的化 合物1(90.3mg，22％产率)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm1.74(s，3 H)，4.40(d，J＝13.6Hz，1H)，5.03(d，J＝13.4Hz，1H)，6.26(dd，J＝4.2，2.5Hz，1H)， 7.19(dd，J＝4.2，1.4Hz，1H)，7.31(t，J＝1.6Hz，1H)，7.45(br.d，J＝8.1Hz，1H)， 7.54(t，J＝7.9Hz，1H)，7.75(br.d，J＝7.9Hz，1H)，7.91(br.s，1H)，8.38(br.s.，1 H)，9.16(s，2H)，9.21(br.s，1H)，9.22(s，1H)，10.23(br.s，1H)。

实例B2

化合物2：rac-3-(3’，5’-二氯-联苯基-3-基)-3-甲基-3，4-二氢-吡咯并[1，2-a]吡 嗪-1-基胺的制备

在一个密封管中，将Pd(PPh₃)₄(30.4mg，0.026mmol)添加到在1，4-二 噁烷(4mL)和EtOH(0.4mL)的混合物中的中间体A18(160mg，0.526 mmol)、2，3-二氯苯基-硼酸(120.4mg，0.631mmol)和K₂CO₃(218mg， 1.58mmol)的搅拌悬浮液中。将该混合物在60℃加热18小时。在冷却至室 温之后，将该混合物用H₂O和NH₄Cl(饱和水溶液)稀释，然后用DCM萃 取。分离有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空中蒸发溶剂。通过短柱色 谱(MeOH在DCM中，0／100至3／97)纯化该粗产物。收集所希望的部分并 且在真空中浓缩以给出一种固体，将该固体用DIPE研磨、过滤并在50℃下 在真空中干燥以获得为一种固体的化合物2(136mg，70％产率)。¹H NMR (500MHz，CDCl₃)δppm1.56(s，3H)，4.11(br.s，2H)，4.05(d，J＝12.4Hz，1H)， 4.10(d，J＝12.7Hz，1H)，6.18(dd，J＝3.8，2.6Hz，1H)，6.43(dd，J＝3.8，1.4Hz，1 H)，6.75(dd，J＝2.3，1.4Hz，1H)，7.32(t，J＝1.7Hz，1H)，7.36-7.42(m，2H)，7.43 (d，J＝1.7Hz，2H)，7.53(dt，J＝6.9，1.9Hz，1H)，7.65-7.71(m，1H)。

实例B3

化合物3：rac-5-氯-吡啶-2-羧酸[3-(1-氨基-3-甲基-3，4-二氢-吡咯并[1，2-a] 吡嗪-3-基)-苯基]-酰胺的制备

将NH₄Cl(94mg，1.75mmol)添加到在EtOH(8.23mL)中的2M NH₃溶液中的中间体A26(180mg，0.44mmol)的悬浮液中并且将该混合物 在80℃加热6天。在真空中蒸发溶剂并且将残余物悬浮于DCM中并用H₂O 洗涤。分离有机层，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发溶剂。通过快速 柱色谱(硅胶；7M NH₃溶液在MeOH／DCM中，0／100至10／90)纯化该产 物。收集所希望的部分并且在真空中蒸发溶剂，以获得为白色固体的化合物3 (28mg，17％产率)。¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δppm1.56(s，3H)，2.96(br. s.，2H)，4.06(d，J＝12.7Hz，1H)，4.14(d，J＝13.3Hz，1H)，6.17(dd，J＝3.8，2.6Hz， 1H)，6.46(dd，J＝3.8，1.2Hz，1H)，6.75(dd，J＝2.3，1.4Hz，1H)，7.30(br.d，J＝7.8 Hz，1H)，7.35(t，J＝8.1Hz，1H)，7.68-7.73(m，1H)，7.88(dd，J＝8.4，2.3Hz，1H)， 7.91(t，J＝1.7Hz，1H)，8.25(d，J＝8.4Hz，1H)，8.57(d，J＝2.0Hz，1H)，9.86(br.s.， 1H)。

实例B4

化合物4：rac-5-甲氧基-吡嗪-2-羧酸[3-(1-氨基-3-甲基-3，4-二氢-吡咯并 [1，2-a]吡嗪-3-基)-苯基]-酰胺的制备

将5-甲氧基-吡嗪-2-羧酸(56.4mg，0.36mmol)添加到在MeOH(4 mL)中的4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(111mg， 0.4mmol)的溶液中。将该混合物在室温下搅拌5min。然后将该混合物冷却 至0℃并且添加在MeOH(2mL)中的中间体A25(80mg，0.33mmol)的 溶液。将该混合物加热至室温并搅拌3小时。将该混合物用饱和Na₂CO₃溶液 和H₂O进行处理并且用DCM萃取。分离有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤并 在真空中蒸发溶剂。将该粗产物用Et₂O进行研磨并且然后通过快速柱色谱 (硅胶；AcOEt在庚烷中，50／50)进行纯化。收集所希望的部分并且在真空 中蒸发溶剂，以获得为白色固体的化合物4(65mg，52％产率)。¹H NMR (500MHz，DMSO-d₆)δppm1.36(s，3H)，4.03(s，3H)，3.99-4.11(m，2H)，6.06 (br.s.，2H)，6.02(dd，J＝3.5，2.6Hz，1H)，6.52(dd，J＝3.5，1.2Hz，1H)，6.87(t， J＝1.7Hz，1H)，7.26(t，J＝7.8Hz，1H)，7.28-7.33(m，1H)，7.72(dt，J＝7.5，1.7Hz， 1H)，8.02(br.s，1H)，8.43(d，J＝1.2Hz，1H)，8.90(d，J＝1.2Hz，1H)，10.33(br.s.， 1H)。

实例B5

化合物5：(R)-5-氯-吡啶-2-羧酸[3-(1-氨基-3-甲基-3，4-二氢-吡咯并[1，2-a] 吡嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺的制备

将5-氯-吡啶-2-羧酸(122mg，0.774mmol)添加到在MeOH(4mL) 中的4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(214mg，0.774 mmol)的溶液中。将该混合物在室温下搅拌5min。然后将该混合物冷却至 0℃并且添加在MeOH(3mL)中的中间体A32(200mg，0.774mmol)的溶 液。将该混合物加热至室温并搅拌90min。将该混合物在冷水浴中在真空中 浓缩，并且然后将其用饱和Na₂CO₃溶液和H₂O进行处理且用DCM萃取。分 离有机层，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发溶剂。通过快速柱色谱 (硅胶；7N NH₃在MeOH中，在DCM中，0／100至2／98)纯化该粗产物。 收集所希望的部分并且在真空中蒸发溶剂以获得一种残余物，将该残余物用 Et₂O研磨以获得为白色固体的化合物5(65mg，21％产率)。¹H NMR(500 MHz，CDCl₃)δppm1.56(s，3H)，4.20(br.d，J＝12.7Hz，1H)，4.28(br.d，J＝12.4 Hz，1H)，4.59(br.s.，2H)，6.16(dd，J＝3.5，2.6Hz，1H)，6.43(br.d，J＝2.6Hz，1H)， 6.74-6.78(m，1H)，7.06(dd，J＝11.7，8.8Hz，1H)，7.79(dd，J＝6.9，2.6Hz，1H)， 7.87(dd，J＝8.4，2.3Hz，1H)，8.02(ddd，J＝9.0，4.0，3.2Hz，1H)，8.23(d，J＝8.4Hz， 1H)，8.56(d，J＝2.0Hz，1H)，9.82(br.s.，1H)。

实例B6

化合物6：(R)-5-氰基-吡啶-2-羧酸[3-(1-氨基-3-甲基-3，4-二氢-吡咯并 [1，2-a]吡嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺的制备

将5-氰基-吡啶-2-羧酸(115mg，0.774mmol)添加到在MeOH中的4- (4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(214mg，0.774mmol) 的溶液中。将该混合物在室温下搅拌5min。然后，将该混合物冷却至0℃并 且添加在MeOH(MeOH的总量为4mL)中的中间体A32(200mg，0.774 mmol)的溶液。将该混合物加热至室温并搅拌3小时。将该混合物在冷水浴 中在真空中浓缩，并且然后将其用饱和Na₂CO₃溶液和H₂O进行处理，然后 用DCM萃取。分离有机层，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发溶剂。通 过快速柱色谱(硅胶；7N NH₃在MeOH中，在DCM中，0／100至2／98)纯 化该粗产物。收集所希望的部分并且在真空中蒸发溶剂以获得一种残余物， 将该残余物用Et₂O研磨以获得为白色固体的化合物7(110mg，37％产 率)。¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δppm1.57(s，3H)，4.21(br.d，J＝12.1Hz，1 H)，4.28(br.d，J＝12.7Hz，1H)，4.37(br.s.，1H)，6.16(dd，J＝3.8，2.6Hz，1H)， 6.43(dd，J＝3.8，1.2Hz，1H)，6.77(dd，J＝2.5，1.3Hz，1H)，7.08(dd，J＝11.7，8.8 Hz，1H)，7.83(dd，J＝6.9，2.9Hz，1H)，8.01(ddd，J＝8.7，4.0，2.9Hz，1H)，8.18(dd， J＝8.1，2.0Hz，1H)，8.40(dd，J＝8.1，0.6Hz，1H)，8.85(br.d，J＝1.2Hz，1H)，9.85 (br.s.，1H)。

实例B7

化合物7：(R)-5-氟-吡啶-2-羧酸[3-(1-氨基-7-氟-3-甲基-3，4-二氢-吡咯并 [1，2-a]吡嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺的制备

将5-氟-吡啶-2-羧酸(123mg，0.869mmol)添加到在MeOH(4mL) 中的4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(240mg，0.869 mmol)的溶液中。将该混合物在室温下搅拌5min。然后，将该混合物冷却 至0℃并且添加在MeOH(2mL)中的中间体A38(200mg，0.724mmol) 的溶液。将该混合物加热至室温并搅拌2小时。将该混合物用饱和Na₂CO₃溶 液和H₂O进行处理，然后用DCM萃取。分离有机层，干燥(Na₂SO₄)，过 滤并在真空中蒸发溶剂。通过快速柱色谱(硅胶；7N NH₃在MeOH中，在 DCM中，0／100至4／96)纯化该粗产物。收集所希望的部分并且在真空中蒸 发溶剂以获得一种残余物，将该残余物用庚烷研磨以获得为白色固体的化合 物8(196mg，68％产率)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm1.41(s，3H)， 3.98(br.d，J＝12.7Hz，1H)，4.10(br.d，J＝12.5Hz，1H)，6.16(br.s.，2H)，6.41(d， J＝1.6Hz，1H)，6.94(dd，J＝3.4，2.0Hz，1H)，7.16(dd，J＝12.0，8.8Hz，1H)，7.75 (ddd，J＝8.8，4.2，2.8Hz，1H)，7.97(td，J＝8.7，2.8Hz，1H)，8.11(dd，J＝7.5，2.7Hz， 1H)，8.21(dd，J＝8.8，4.6Hz，1H)，8.73(d，J＝2.8Hz，1H)，10.51(br.s，1H)。

实例B8

化合物8：(R)-5-甲氧基-吡嗪-2-羧酸[3-(1-氨基-7-氟-3-甲基-3，4-二氢-吡 咯并[1，2-a]吡嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺的制备

将5-甲氧基-吡嗪-2-羧酸(134mg，0.869mmol)添加到在MeOH(4 mL)中的4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(240mg， 0.869mmol)的溶液中。

将该混合物在室温下搅拌5min。然后，将该混合物冷却至0℃并且添加 在MeOH(2mL)中的中间体A38(200mg，0.724mmol)的溶液。将该混 合物加热至室温并搅拌2小时。将该混合物用饱和Na₂CO₃溶液和H₂O进行处 理，然后用DCM萃取。分离有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空中蒸 发溶剂。通过快速柱色谱(硅胶；7N NH₃在MeOH中，在DCM中，0／100 至4／96)纯化该粗产物。收集所希望的部分并且在真空中蒸发溶剂以获得一 种残余物，将该残余物用庚烷研磨以获得为白色固体的化合物8(213mg， 71％产率)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm1.41(s，3H)，3.97(br.d， J＝12.9Hz，1H)，4.02(s，3H)，4.09(br.d，J＝12.5Hz，1H)，6.12(br.s.，2H)，6.40 (d，J＝1.8Hz，1H)，6.93(dd，J＝3.2，1.8Hz，1H)，7.15(dd，J＝12.0，8.8Hz，1H)， 7.72(ddd，J＝8.8，4.2，3.0Hz，1H)，8.12(dd，J＝7.4，2.8Hz，1H)，8.41(d，J＝1.4Hz， 1H)，8.87(d，J＝1.2Hz，1H)，10.40(br.s，1H)。

实例B9

化合物9：(R)-5-氰基-吡啶-2-羧酸[3-(1-氨基-3-甲基-7-三氟甲基-3，4-二 氢-吡咯并[1，2-a]吡嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺的制备

三氟乙酸盐

将5-氰基-吡啶-2-羧酸(82mg，0.551mmol)添加到在MeOH(3mL) 中的4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(168mg，0.606 mmol)的溶液中。将该混合物在室温下搅拌5min。然后，将该混合物冷却至 0℃并且添加在MeOH(2mL)中的中间体A46(200mg，0.551mmol)的溶 液。将该混合物加热至室温并搅拌18小时。将该混合物在冷水浴中在真空中 浓缩，并且然后将其用饱和Na₂CO₃溶液进行处理，然后用DCM萃取。分离有 机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空中浓缩。

通过快速柱色谱(硅胶；MeOH在DCM中，0／100至4／96)纯化该粗产 物。收集所希望的部分并且在真空中蒸发溶剂。将该化合物用Et₂O研磨以获 得一种混合物，将该混合物通过快速柱色谱(硅胶；MeOH在DCM中， 0／100至4／96)进行重提纯。收集所希望的部分并且在真空中蒸发溶剂，以获 得一个不纯的部分，将该部分通过(C18Sunfire30x1005um)上的RP HPLC，流动相(梯度从80％的在H₂O中的0.1％TFA溶液、20％MeCN至 0％的在H₂O中的0.1％TFA溶液、100％MeCN)进行纯化，从而获得为一种 白色固体的化合物9(121.3mg，39％产率)。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆) δppm1.79(s，3H)，4.50(br.d，J＝13.6Hz，1H)，4.92(br.d，J＝13.3Hz，1H)，7.31 (dd，J＝11.8，8.7Hz，1H)，7.51(br.s，1H)，7.86-7.93(m，2H)，7.95(br.s，1H)， 8.25(d，J＝8.1Hz，1H)，8.58(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，8.87(br.s.，1H)，9.20(d， J＝1.2Hz，1H)，9.55(br.s.，1H)，10.67(br.s.，1H)，10.99(br.s，1H)。

实例B10

化合物10：(R)-1-二氟甲基-1H-吡唑-3-羧酸[3-(1-氨基-3-甲基-7-三氟甲 基-3，4-二氢-吡咯并[1，2-a]吡嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺的制备

将1-二氟甲基-1H-吡唑-3-羧酸(31mg，0.193mmol)添加到在MeOH (3mL)中的4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(59mg， 0.212mmol)的溶液中。将该混合物在室温下搅拌5min。将该混合物冷却至 0℃并且添加在MeOH(2mL)中的中间体A46(70mg，0.193mmol，先前用 在MeOH中的NH₃处理以产生游离碱)。然后将该混合物在室温下搅拌18小 时。

将该混合物在冷水浴中在真空中浓缩，并且然后将其用饱和Na₂CO₃溶液 进行处理，然后用DCM萃取。分离有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空 中浓缩。通过快速柱色谱(硅胶；MeOH在DCM中，0／100至4／96)纯化该粗 产物。收集所希望的部分并且在真空中蒸发溶剂。将该化合物用Et₂O研磨， 以获得为一种白色固体的化合物10(56mg，62％产率)。¹H NMR(500MHz， DMSO-d₆)δppm1.40(s，3H)，4.13(br.d，J＝13.0Hz，1H)，4.29(br.d，J＝12.7Hz， 1H)，6.25(br.s.，2H)，6.87(br.s，1H)，7.01(d，J＝2.3Hz，1H)，7.16(dd，J＝11.8， 9.0Hz，1H)，7.59(br.s，1H)，7.63-7.69(m，1H)，7.92(t，J＝58.7Hz，1H)，8.05- 8.10(m，1H)，8.41(d，J＝2.3Hz，1H)，10.34(s，1H)。

实例B11

化合物11：rac-5-甲氧基-吡啶-2-羧酸[3-(1-氨基-3-二氟甲基-3，4-二氢-吡 咯并[1，2-a]吡嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺、化合物12：(R*)-5-甲氧基-吡啶-2-羧 酸[3-(1-氨基-3-二氟甲基-3，4-二氢-吡咯并[1，2-a]吡嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺以 及化合物13：(S*)-5-甲氧基-吡啶-2-羧酸[3-(1-氨基-3-二氟甲基-3，4-二氢-吡咯 并[1，2-a]吡嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺的制备

将5-甲氧基-吡嗪-2-羧酸(130mg，0.841mmol)添加到在MeOH(4 mL)中的4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(233mg， 0.841mmol)的混合物中。将该混合物在室温下搅拌5min，然后将其冷却至 0℃并且添加在MeOH(4mL)中的中间体A53(225mg，0.765mmol)。将 该混合物在室温下搅拌16小时，然后用饱和Na₂CO₃进行处理且搅拌几分 钟。浓缩溶剂，添加H₂O，然后用DCM／MeOH(9：1)的混合物进行萃取。 分离有机层，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将该粗产物用DCM研 磨并过滤以给出第一批化合物11。蒸发滤液并且通过快速柱色谱(硅胶； MeOH在DCM中，0／100至7／93)进行纯化。收集所希望的部分并且在真空 中蒸发溶剂，以获得化合物11的第二个批次，将其与前一批次合并。通过 CHIRALCEL(OD-H5μm，250x20mm)上的手性SFC、流动相(60％ CO₂，40％EtOH)纯化该外消旋化合物，以获得化合物12(57mg，17％产 率)。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm4.02(s，3H)4.28(br.d，J＝13.0Hz， 1H)4.61(br.d，J＝13.0Hz，1H)6.01(dd，J＝3.3，2.7Hz，1H)6.16(t，J＝55.5Hz，1 H)6.40(br.s.，2H)6.53(d，J＝2.6Hz，1H)6.98(br.s，1H)7.11-7.19(m，1H) 7.73-7.78(m，1H)8.11(dd，J＝7.1，2.7Hz，1H)8.41(d，J＝1.2Hz，1H)8.87(d， J＝1.2Hz，1H)10.42(br.s，1H)与化合物13(72mg，21％产率)，它的¹H NMR谱与化合物12的一致。

表1

获得化合物编号1、9、15和20，为一种三氟乙酸盐(.CF₃COOH)。

C.分析部分

LCMS

为了本发明化合物的(LC)MS-表征，使用以下方法。

通用程序A

使用Acquity UPLC(沃特斯公司(Waters))系统进行UPLC(超高效 液相色谱)测量，该系统包括一个样品组织器(sampler organizer)、一个二 元泵(该泵具有除气器)、一个四柱温箱、一个二极管阵列检测器(DAD) 以及一个柱，如在以下对应的方法中详细说明的。该MS检测器被配置为具 有一个电喷雾电离源。通过使用0.08秒的通道间延迟，在0.1秒内从100至 1000进行扫描，在一个单级四极杆SQD检测器(沃特斯公司)上获取质谱。 毛细管针电压是3.0kV。对于阳离子化模式的锥孔电压是25V并且对于阴离 子化模式的锥孔电压是30V。源温度维持在140℃。将氮气用作雾化气体。 用MassLynx-Openlynx软件进行数据采集。

方法1：

除了通用程序A之外：在来自安捷伦公司(Agilent)的RRHD Eclipse  Plus-C18(1.8μm，2.1x50mm)以1.0ml／min的流速进行反相UPLC，在 50℃没有到MS检测器的分流。所使用的梯度条件是：95％A(在 H₂O／MeCN95／5中的6.5mM NH₄AcO)、5％B(MeCN)，在3.8min之内 至40％A、60％B，在4.6min之内至5％A、95％B，保持至5.0min。进样 体积2μl。

通用程序B

使用HP1100(安捷伦科技有限公司(Agilent))系统进行HPLC测 量，该系统包括具有除气器的一个泵(二元或四元)、一个自动进样器、一 个柱温箱、一个二极管阵列检测器(DAD)以及一个柱，如在以下对应的方 法中详细说明的。该MS检测器(SQD，TOF)被配置为具有一个电喷雾电离 源。将氮气用作雾化气体。源温度维持在140℃。使用MassLynx-Openlynx软 件进行数据采集。

B1：通过使用0.08秒的通道间延迟，在0.1秒内从100至1000进行扫 描，在一个单级四极杆SQD检测器上获取质谱。毛细管针电压是3.0kV。对 于阳离子化模式的锥孔电压是20V并且对于阴离子化模式的锥孔电压是30 V。

B2：通过使用0.3秒的驻留时间，在0.5秒内从100至750进行扫描，在 飞行时间(TOF)检测器上获取质谱。对于阳离子化模式的毛细管针电压是 2.5kV并且对于阴离子化模式的毛细管针电压是2.9kV。对于阳离子化模式 和阴离子化模式两者的锥孔电压都是20V。亮氨酸-脑啡肽是用于锁定质量校 准的标准物质。

方法2：

除了通用程序B1之外：在60℃，在来自安捷伦公司的Eclipse Plus-C18 柱(3.5μm，2.1x30mm)上以用1.0mL／min的流速进行反相HPLC。所使 用的梯度条件是：95％A(在H₂O／MeCN95／5中的6.5mM NH₄AcO)、5％B (MeCN／MeOH1／1)，在5.0min之内至100％B，保持至5.15min并且在 5.30min处平衡至初始条件直到7.0min。进样体积2μl。

方法3：

除了通用程序B2之外：在60℃，在来自安捷伦公司的Eclipse Plus-C18 柱(3.5μm，2.1x30mm)上以1.0mL／min的流速进行反相HPLC。所使用 的梯度条件是：95％A(在H₂O／MeCN95／5中的6.5mM NH₄AcO)、5％B (MeCN／MeOH1／1)，在5.0min之内至100％B，保持至5.15min并且在 5.3min处平衡至初始条件直到7.0min。进样体积2μl。

方法4：

除了通用程序B2之外：在60℃，在来自安捷伦公司的Eclipse Plus-C18 柱(3.5μm，2.1x30mm)上以1.0ml／min的流速进行反相HPLC。所使用的 梯度条件是：95％A(在H₂O／MeCN95／5中的6.5mM NH₄AcO)、5％B (MeCN)，保持0.2min，在3.0min之内至100％B，保持至3.15min并且 在3.3min处平衡至初始条件直到5.0min。进样体积2μl。

通用程序C：

使用UPLC(超高效液相色谱)Acquity(沃特斯公司)系统进行LC测 量，该系统包括一个具有一个除气器的二元泵、一个自动进样器、一个二极 管阵列检测器(DAD)以及一个保持在40℃的柱，如在以下对应的方法中详 细说明。该MS检测器被配置为具有一个电喷雾电离源。通过使用0.1秒的扫描 间延迟，在0.2秒内从100至1000进行扫描，在三重四极杆Quattro检测器(沃 特斯公司)上获取质谱。毛细管针电压是3kV并且源温度被维持在130℃。用 于阳离子化模式和阴离子化模式的锥孔电压是20V。将氮气用作雾化气体。 用MassLynx-Openlynx软件(沃特斯公司)进行数据采集。

方法5：

除了通用程序之外：在一个Waters Acquity BEH(桥联乙基硅氧烷／二氧 化硅杂化物)苯基-己基柱(1.7μm，2.1x100mm)上以0.343mL／min的流速 进行反相UPLC。采用两个流动相(流动相A：95％7mM NH₄AcO／5％ MeCN；流动相B：100％MeCN)来运行以下梯度条件：在2.18min之内从 84.2％A和15.8％B(持续0.49分钟)到10.5％A和89.5％B，保持1.94min并且 在0.73min之内回到初始条件，保持0.73min。使用2ml的进样体积。

熔点

值是峰值亦或熔化范围，并且获得的值具有与这个分析方法通常相关的 实验不确定性。

Mettler FP81HT／FP90或FP62仪

对于多种化合物，在Mettler FP62或Mettler FP81HT／FP90装置上在开管毛 细管中确定熔点。用1℃／分钟、3℃／分钟、5℃／分钟或10℃／分钟的温度梯度 对熔点进行测量。最高温度是300℃。从数字显示器读取熔点。

对于多个化合物，使用购买自上海精密科学仪器有限公司(Shanghai  Precision and Scientific Instrument Co.Ltd)的WRS-2A熔点测定仪确定熔点 (m.p.)。用0.2℃／分钟-5.0℃／分钟的线性加热率测量熔点。记录的值是熔化 范围。最高温度是300℃。

表2：分析数据-R_t表示保留时间(以min计)，[M+H]⁺表示化合物的质子化质 量，方法是指用于(LC)MS的方法。

n.d.表示表示未确定

SFC-MS方法：

用于SF-MS方法的通用程序：

使用来自伯格仪器公司的分析型SFC系统进行SFC测量，该系统包括用 于递送二氧化碳(C0₂)和改性剂的一个FCM-1200二元泵流体控制模块、一 个CTC分析自动液体取样器、一个用于将柱从室温加热至80℃的TCM- 20000热控制模块。使用配备有经得起400bar的高压流通池的一个Agilent 1100UV光电二极管阵列检测器。来自柱的流量被分流到MS光谱仪。该MS 检测器配置有大气压电离源。用于Waters ZQ质谱分光光度计的以下电离参 数是：电晕：9μa，源温度：140℃，锥孔：30V，探头温度450℃，萃取器 3V，脱溶剂气体400L/hr，锥孔气体70L／hr。将氮气用作雾化气体。用 Waters-Micromass MassLynx-Openlynx数据系统进行数据采集。

方法1：

除了通用程序之外：在35℃，在一个CHIRALCEL OD-H DAICEL柱(5 μm，4.6x250mm)上以3.0mL／min的流速进行SFC中的手性分离。流动相是 CO₂，40％EtOH(+0.3％iPrNH₂)，以恒溶剂模式保持7min。

方法2：

除了通用程序之外：在35℃，在一个CHIRALPAK AD-H DAICEL柱(10 μm，4.6x250mm)上以3.0mL／min的流速进行SFC中的手性分离。流动相是 CO₂，15％EtOH，15％异丙醇(+0.3％iPrNH₂)，以恒溶剂模式保持7min。

表3：分析的SFC数据-R_t表示保留时间(以min计)，[M+H]⁺表示该化合物的 质子化质量，方法是指用于对映异构体纯的化合物的SFC／MS分析的方法。

*A表示洗脱的第一个同分异构体。B表示洗脱的第二个同分异构体。

旋光度：

在具有钠灯的Perkin-Elmer341旋光计上测量旋光度并且记录如下：[α]_λ^t℃(c g／100mL，溶剂)。

表4：分析数据-用于对映异构体纯的化合物的旋光值。

药理学实例

在本发明中提供的化合物是β-位点APP-裂解酶1(BACE1)的抑制剂。 BACE1(一种天冬氨酸蛋白酶)的抑制被认为对于阿尔茨海默病(AD)的治 疗是有意义的。来自β-淀粉样前体蛋白(APP)的β-淀粉样蛋白肽(Aβ)的 产生和累积被认为在AD的起始和进展中起关键作用。通过在Aβ结构域的N 末端和C末端分别由β分泌酶与和γ分泌酶进行连续裂解从淀粉样前体蛋白 (APP)产生Aβ。

凭借它们抑制酶活性的能力，式(I)的化合物被预期为基本上在BACE1 处具有它们的作用。使用下文描述的并且适合此类化合物(并且更具体地， 根据式(I)的化合物)的鉴定的、基于生物化学荧光共振能量转移(FRET) 的测定和SKNBE2细胞中的细胞αlisa测定，测试了这样的抑制剂的行为，这 些行为显示于表1中。

基于生物化学FRET的测定

该测定是基于荧光共振能量转移测定(FRET)的测定。用于该测定的底 物是APP衍生的、含有淀粉样前体蛋白(APP)β分泌酶裂解位点的 ‘Swedish'Lys-Met/Asn-Leu突变的13个氨基酸的肽。这种底物还含有两个荧 光团：(7-甲氧基-香豆素-4-基)乙酸(Mca)是具有在320nm处的激发波长和 在405nm处的发射波长的一种荧光供体，并且2，4-二硝基苯基(Dnp)是一 种专有的淬灭剂受体。已经对这两个基团之间的距离进行了选择，使得在光 激发后，供体荧光能量通过共振能量传递被受体显著地淬灭。在被BACE1裂 解后，荧光团Mca与淬灭基团Dnp分离，恢复供体的全荧光效应。荧光的增 加与蛋白质水解速率线性相关(Koike H(小池)等人，J.Biochem.(《生物 化学杂志》)1999，126，235-242)。

简言之，在384孔规格中，在化合物不存在或存在下，将处于1μg／ml 终浓度的重组BACE1蛋白在室温下与10μm底物在孵育缓冲液(pH5.0的 40mM柠檬酸盐缓冲液、0.04％PEG、4％DMSO)中孵育120min。接下来 通过在T=0和T=120处(在320nm处激发并且在405nm处发射)的荧光测 量直接测量蛋白质水解的量。结果以RFU表示为在T120与T0之间的差异。

通过％Controlmin对化合物浓度曲线的最小二乘法拟合获得最佳拟合曲 线。由此可以获得IC50值(引起50％活性抑制的抑制浓度)。

LC=低对照值的中位值

  =低对照：不与酶反应

HC=高对照值的中位值

  =高对照：与酶反应

作用％=100-[(样品-LC)／(HC-LC)*100]

对照％=(样品／HC)*100

Controlmin％=(样品-LC)／(HC-LC)*100

以下示例性的化合物如上所述被基本测试并且展现出以下活性：

表5

SKNBE2细胞中的细胞αlisa测定

在两个αlisa测定中，对产生并分泌到人神经母细胞瘤SKNBE2细胞培养 基中的总Aβ和Aβ42水平进行定量。该测定基于表达野生型淀粉样前体蛋白的 人神经母细胞瘤SKNBE2(hAPP695)。稀释这些化合物并且添加到这些细胞 中，孵育18小时并且然后进行Aβ42和总Aβ自勺测量。通过夹心αlisa测量总Aβ以 及Aβ42。αlisa是使用分别用于总Aβ以及Aβ42检测的、附接到链霉亲和素包被 的珠子上的生物素酰化抗体AbN／25以及结合受体珠子的抗体Ab4G8或 cab42／26的一种夹心测定。在总Aβ或Aβ42的存在下，这些珠子变得紧密靠 近。供体珠子的激发引起单线态氧分子的释放，触发受体珠子中能量传递的 级联，导致光发射。在孵育1小时之后测量光发射(在650nm处激发并且在 615nm处发射)。

通过％Controlmin对化合物浓度曲线的最小二乘法拟合获得最佳拟合曲 线。由此可以获得IC50值(引起50％活性抑制的抑制浓度)。

LC=低对照值的中位值

=低对照：在没有化合物的情况下预孵育细胞，在αlisa中没有生物 素酰化的Ab

HC=高对照值的中位值

=高对照：在没有化合物的情况下预孵育细胞

作用％=100-[(样品-LC)／(HC-LC)*100]

对照％=(样品／HC)*100

Controlmin％=(样品-LC)／(HC-LC)*100

以下示例性的化合物如上所述被基本测试并且展现出以下活性：

表6

体内效力证明

本发明的Aβ肽降低剂可以用于治疗哺乳动物(例如人)中的AD，或可 替代地，在动物模型，例如但不局限于，小鼠、大鼠或豚鼠中证明效力。哺 乳动物可以不被诊断为患有AD，或可以不具有针对AD的遗传易感性，但是 可以是转基因的，使得它以类似于在罹患AD的人类中见到的方式过度产生 并最终沉积Aβ。

可以使用任何标准方法以任何标准形式给予Aβ肽降低剂。例如但不局 限于，Aβ肽降低剂可以处于口服或通过注射摄入的液体、片剂或胶囊的形 式。Aβ肽降低剂可以按足以显著降低在血液、血浆、血清、脑脊液 (CSF)、或脑中的Aβ肽的水平的任何剂量给予。

为了确定Aβ42肽降低剂的急性给药是否会降低体内Aβ肽水平，使用了 非转基因的啮齿动物，例如，小鼠或大鼠。检查用Aβ肽降低剂处理的动物并 与未处理或用载体处理的那些进行比较，并且通过标准技术，例如，使用 ELISA对可溶性Aβ42以及总Aβ的脑水平进行定量。处理周期从小时(h) 至天变化，并且一旦效应起始时程可以确立，基于Aβ42降低的结果调节处理 周期。

显示了用于测量体内Aβ42降低的一个典型实验方案，但这只是可以用来 优化可检出Aβ水平的许多变化中的一种。例如，Aβ肽降低化合物被配制到 20％羟丙基β环糊精中。以单次口服剂量(p.o)或单次皮下剂量(s.c)向禁 食过夜的动物给予这些Aβ肽降低剂。在一定的时间之后，通常是2h或4h(如 在表7中指出的)，处死这些动物并且分析Aβ42水平。

通过断头术和放血将血液收集在EDTA-处理过的收集管中。将血液在 4℃在1900g离心10min(min)并且回收血浆并快速冷冻以用于随后分析。 将脑从颅骨和后脑上移除。移除小脑并且分开左半球和右半球。将左半球在- 18℃下储存以用于测试化合物水平的定量分析。将右半球用磷酸盐缓冲盐水 (PBS)缓冲液冲洗并且立即在干冰上冷冻并在-80℃下储存直到匀浆以用于 生化测定。

将来自非转基因动物的小鼠脑重悬浮于含有蛋白酶抑制剂(Roche- 11873580001或04693159001)的、每克组织8倍体积的0.4％DEA(二乙 胺)／50mM NaCl中，例如，对于0.158g的脑，添加1.264ml的0.4％ DEA。在FastPrep-24系统(MP生物医学公司(MP Biomedicats))中使用溶 解基质D(MPBio#6913-100)在6m／s持续20秒将所有样品均质化。将匀浆 在221.300xg离心50min。然后将所得高速上清液转移到新的微量离心管 中。将九份上清液用1份0.5M Tris-HCl(pH6.8)中和并用来定量总Aβ和 Aβ42。

为了定量脑匀浆的可溶性部分中的总Aβ和Aβ42，使用了酶联免疫吸附 测定。简言之，在Ultraculture公司的1.5ml微量离心管中制备标准品(合成 的Aβ1-40以及Aβ1-42的稀释液，Bachem公司)，其中最终浓度范围从 10000至0.3pg／ml。将样品和标准品与用于Aβ42检测的HRPO-标记的N末 端抗体以及与用于总Aβ检测的生物素酰化的中间．结构域(mid-domain)抗 体4G8共孵育。然后将50μl的结合物／样品或结合物／标准品混合物添加到抗 体包被的板上(对于Aβ42检测，捕获抗体选择性地识别Aβ42的C末端，抗 体JRF／cAβ42／26，对于总Aβ检测，捕获抗体选择性地识别Aβ的N末端，抗 体JRF／rAβ／2)。允许该板在4℃孵育过夜以允许抗体-淀粉样蛋白复合物的 形成。根据制造商的说明书(皮尔斯公司(Pierce Corp.)，伊利诺伊州罗克 福德市)，在这种孵育以及随后的洗涤步骤之后，通过添加Quanta Blu荧光 过氧化物酶底物来完成用于Aβ42定量的ELISA。在10min至15min之后进 行读数(在320nm处激发／在420nm处发射)。

针对总Aβ检测，根据制造商的说明书(皮尔斯公司，伊利诺伊州罗克 福德市)，添加链霉亲和素-过氧化物酶-结合物，60min之后进行一个另外的 洗涤步骤并且添加Quanta Blu荧光过氧化物酶底物。在10min至15min之后 进行读数(在320nm处激发／在420nm处发射)。

在这个模型中，与未处理的动物相比，至少20％的Aβ42降低将是有利 的。

以下示例性的化合物如上所述被基本测试并且展现出以下活性：

表7：

p.o.表示口服