从钦州石金钱龟中提取活性肽的方法

摘要

本发明公开了一种从钦州石金钱龟中提取活性肽的方法，包括下述步骤：原料处理、水解、酶解、冷冻、融化、浓缩、喷雾干燥即得成品。相比现有的种子液摇床活化、接种、发酵液培养、破壁的技术，时间大大缩短。

说明书

技术领域

本发明涉及一种活性肽的制备方法，具体涉及一种从钦州石金钱龟中提 取活性肽的方法。

背景技术

石金钱龟，又称石龟，拟水龟属，属水陆两栖动物，有着极高的药用价 值、食用价值、观赏价值和人文价值。众人皆知龟类是长寿之物。龟的寿命 长达几百年，常言道“千年王八，万年龟”，龟不但有极强的生命力，而且体 内有多肽长寿因子。食用、药用龟肉能延年益寿，而且长寿龟体内的多肽长 寿因子能充分被人体所吸收。人体很多活性物质都是以肽的形式存在的，经 研究发现人体干重的70%以上都是蛋白质（由50个以上氨基酸组成的肽就称 为蛋白质），所以说没有肽，就没有活性，就没有生命。肽涉及人体的激素、 神经、细胞生长和生殖各领域。活性肽主要控制人体的生长、发育、免疫调 节和新陈代谢，它在人体处于一种平衡状态，若活性肽减少后，人体的机能 发生重要变化，对于儿童来说，他的生长、发育变得缓慢，甚至停止，长久 下去就形成了侏儒；对成年人或老年人，缺少活性肽后，自身的免疫力就会 下降，新陈代谢紊乱，内分泌失调，引发各种疾病的产生，如失眠、身体消 瘦或浮肿。由于活性肽还作用于神经系统，因此人体就会变得动作迟缓，头 脑不再聪慧，更主要的是活性肽减少，直接引起人身体各部位逐渐出现全面 衰老，引发各种疾病。科研人员还发现龟从不患癌症，其体内含有抗癌物质。 运用乌龟精华，使人延年益寿这一生命科学研究的前沿目标，当前引人注目。

钦州地处沿海，有着养殖龟鳖的得天独厚的自然优势和传统产业优势， 由于地理环境和水土不同，钦州产的龟鳖肉质特别香甜，享有“天下名龟出 钦州”之盛名。钦州石金钱龟，是广西壮族自治区钦州市特产，为中国地理 标志产品。钦州石金钱龟养殖有着悠久的历史，积累了成熟的经验，养殖户 利用本地沿海、沿江低值小杂鱼丰富的优势，以鲜活鱼虾天然饲料喂养为主， 养殖的石金钱龟更接近自然生态产品，具有更高的营养价值。经过多年的发 展，钦州的石金钱龟养殖户发展到1万多户，养殖数量发展到70多万只，年 产值3亿多元，龟鳖产业已成为钦州市农民群众致富奔康的支柱产业。

如CN200910061718.0一种制备皮肤长寿因子肽的工艺,公开一种制备皮 肤长寿因子肽的工艺，将种子液摇床活化15-30小时，然后接种到含有PTS 多肽的发酵液中。发酵液15-40℃间隙搅拌培养1-4天,然后将发酵液沸水浴 破壁10-40分钟，离心收集上清液,对其浓缩干燥得到蛋白质含量高，功能活 性好的皮肤长寿因子肤,但是时间长,收率低。如何从钦州石金钱龟体内提取 有效的活性肽，运用现代高科技生物制造技术，研制成高端保健食品使人类 提高免疫力，增强抵抗力，使人类更加长寿，活得更健康，更精彩。这一项 目的研究和开发具有巨大的市场潜力和发展前景，目前如何更好地利用酶促 反应，运用现代高科技生化制造技术，研制出更好的提取分离纯化技术工艺 使提取率得到不断提高是研究的方向。这一领域的研究前景广泛，具有很大 的挖掘潜力。对保健食品的开发运用具有重大意义。

发明内容

本发明提供了一种工艺简单、效率高的以钦州石金钱龟为原料提取活性 肽的方法。

本发明是通过如下技术方案实现的:

一种从钦州石金钱龟为原料提取活性肽的方法，包括下述步骤:

a.原料处理：取钦州石金钱龟，去除内脏后，清洗干净，保留龟壳、龟 肉；

b.水解：加入8-10倍量的纯净水，用1M HCl调节混合物pH值至1.8-2.5， 煮沸后维持压力0.1Mpa水解8-10小时，煮沸维持压力过程中注意补充失去 的水分；

c.酶解：水解完成后，过滤，收集滤液，加入1M NaOH调pH值至3.5-5.5， 加入0.2-0.3%重量份木瓜蛋白酶，45-50℃酶解反应10-12h；

d.冷冻：将酶解后的溶液，离心30分钟，转速4000r/min，收集沉淀， -10℃冷冻24h；

e.融化、浓缩：将上步骤得到的冷冻物取出，加热使之融化，过滤，收 集滤液，将滤液进行浓缩成相对密度为1.22(60℃)的浸膏；

f.将浸膏进行喷雾干燥，包装后即得成品。

采用本发明的得方法得到的活性肽，具有如下性状：

白色结晶粉末；味微苦，易溶于水。

采用本发明的方法以钦州石金钱龟为原料提取活性肽，与现有技术相比， 本发明的优点：

1、钦州石金钱龟在强酸性条件下进行水解，然后在酸性的pH条件下进 行酶解，再结合冷冻和融化工艺，相比现有的种子液摇床活化、接种、发酵 液培养、破壁的技术，时间大大缩短；

2、采用本发明的方法，提纯率和分离度更高，若不加酸性蛋白酶进行酶 解反应，提取率仅为2%左右，提取率相当低，加入酸性蛋白酶进行酶解后， 活性肽的提取率为10%以上，提取率增加了5倍多。

具体实施方式

下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。

实施例1：

一种从钦州石金钱龟为原料提取活性肽的方法，包括下述步骤:

a.原料处理：取钦州石金钱龟，去除内脏后，清洗干净，保留龟壳、龟 肉；

b.水解：加入8倍量的纯净水，用1M HCl调节混合物pH值至2.5，煮 沸后维持压力0.1Mpa水解10小时，煮沸维持压力过程中注意补充失去的水 分；

c.酶解：水解完成后，过滤，收集滤液，加入1M NaOH调pH值至5.5， 加入0.3%重量份木瓜蛋白酶，50℃酶解反应12h；

d.冷冻：将酶解后的溶液，离心30分钟，转速4000r/min，收集沉淀， -10℃冷冻24h；

e.融化、浓缩：将上步骤得到的冷冻物取出，加热使之融化，过滤，收 集滤液，将滤液进行浓缩成相对密度为1.22(60℃)的浸膏；

f.将浸膏进行喷雾干燥，包装后即得成品，活性肽的提取率为10.5%。

实施例2：

一种从钦州石金钱龟为原料提取活性肽的方法，包括下述步骤:

a.原料处理：取钦州石金钱龟，去除内脏后，清洗干净，保留龟壳、龟 肉；

b.水解：加入10倍量的纯净水，用1M HCl调节混合物pH值至1.8，煮 沸后维持压力0.1Mpa水解8小时，煮沸维持压力过程中注意补充失去的水分；

c.酶解：水解完成后，过滤，收集滤液，加入1M NaOH调pH值至3.5， 加入0.2%重量份木瓜蛋白酶，45℃酶解反应10h；

d.冷冻：将酶解后的溶液，离心30分钟，转速4000r/min，收集沉淀， -10℃冷冻24h；

e.融化、浓缩：将上步骤得到的冷冻物取出，加热使之融化，过滤，收 集滤液，将滤液进行浓缩成相对密度为1.22(60℃)的浸膏；

f.将浸膏进行喷雾干燥，包装后即得成品，活性肽的提取率为11.2%。

实施例3：

一种从钦州石金钱龟为原料提取活性肽的方法，包括下述步骤:

a.原料处理：取钦州石金钱龟，去除内脏后，清洗干净，保留龟壳、龟 肉；

b.水解：加入10倍量的纯净水，用1M HCl调节混合物pH值至2.0，煮 沸后维持压力0.1Mpa水解10小时，煮沸维持压力过程中注意补充失去的水 分；

c.酶解：水解完成后，过滤，收集滤液，加入1M NaOH调pH值至4.5， 加入0.25%重量份木瓜蛋白酶，50℃酶解反应12h；

d.冷冻：将酶解后的溶液，离心30分钟，转速4000r/min，收集沉淀， -10℃冷冻24h；

e.融化、浓缩：将上步骤得到的冷冻物取出，加热使之融化，过滤，收 集滤液，将滤液进行浓缩成相对密度为1.22(60℃)的浸膏；

f.将浸膏进行喷雾干燥，包装后即得成品，活性肽的提取率为11.5%。