一种高含腐殖质的河口底泥总DNA提取方法

摘要

本发明公开了一种高含腐殖质河口底泥总DNA的提取方法。用无菌生理盐水洗涤底泥，去除部分腐殖质等杂质，同时对微生物起浓缩作用；再利用CTAB、蛋白酶K和溶菌酶在液氮和65℃水浴中反复冻融，使细胞破壁，然后加SDS在65℃水浴中保温2h，以结合蛋白质；加入等体积酚/氯仿/异戊醇(25∶24∶1)，去除蛋白质；加等体积异丙醇沉淀DNA，用70％乙醇洗涤沉淀，晾干后，用TE(pH8.0)溶解DNA；加3倍体积的无水乙醇重新沉淀DNA，70％乙醇洗涤沉淀，晾干后，用TE溶解沉淀DNA，储存在-20℃下备用。本发明的方法操作简单、价格便宜；用本发明的方法提取的河口底泥总DNA具有纯度高和生物多样性完整的优点，可以用于分子生物学研究和微生物多样性分析。