一种脑心通胶囊的含量检测方法

摘要

本发明涉及一种脑心通胶囊的含量检测方法，由黄芪66份、赤芍27份、丹参27份、当归27份、川芎27份、桃仁27份、红花13份、制乳香13份、制没药13份、鸡血藤20份、牛膝27份、桂枝20份、桑枝27份、地龙27份、全蝎13份、水蛭27份组成，采用超高效液相色谱(UPLC)技术同时测定脑心通胶囊中羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B、藁本内酯5个主要化学成分，可在24 min内完成一次色谱分析，各主要成分色谱峰之间有良好的分离度，精密度、重复性的RSD均小于2.0%，可较全面地控制脑心通胶囊的质量。

说明书

技术领域

本发明涉及一种脑心通胶囊的含量检测方法，属于医药制剂技术领域。 

背景技术

脑心通胶囊（市售产品，质量标准公开于2002年国家药品监督管理局汇编的《国家中成药标准汇编——中成药地方标准上升国家标准部分》的《内科——脑系》分册，标准号：WS-10001（ZD-0001）-2002）是由黄芪、赤芍、丹参、当归、川芎、红花、桃仁、乳香（制）、 没药（制）、鸡血藤、牛膝、桂枝、桑枝、地龙、全蝎、水蛭16味药材加工制成的临床常用中药复方制剂，具有益气活血、化瘀通络的功效，用于气虚血滞、脉络瘀阻所致的中风中经络及胸痹心痛、胸闷、心悸、气短，脑梗塞、冠心病心绞痛的治疗。现行脑心通胶囊质量标准的含量测定项下，仅检测芍药苷单一指标性成分的含量，同时现有技术的文献研究结果显示，该制剂的含量测定多采用HPLC法，往往仅检测其中单一某味药中的一种或几种指标成分，而测定脑心通胶囊中多味药、多种成分含量尚未见报道。另外，组方中黄芪、赤芍、丹参、当归、川芎、红花的用量较大，曾有文献报道过赤芍中的芍药苷、丹参中的丹酚酸 B、当归和川芎中的阿魏酸和藁本内酯、红花中的羟基红花黄色素A等主要活性成分，分别在不同的色谱条件下进行含量测定，但同时在一个制剂的同一次检测过程及条件下测定这些成分的研究成果尚未有记载，值得研究人员深入研究。随着超高效液相色谱(UPLC)技术的发展，快速检测多成分的设想得以实现，通过同一制剂多成分的检测可以更好地监控药品生产的质量标准。本发明采用UPLC技术，建立了同时测定脑心通胶囊中羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B、藁本内酯5个化学成分含量的方法，可在短时间内完成一次色谱分析，此分析方法快捷、准确，重复性好，为全面、客观的控制脑心通胶囊质量提供了依据。 

发明内容

本发明目的在于提供一种快捷、准确、稳定、重复性好的脑心通胶囊的含量检测方法。 

本发明技术方案由以下步骤组成：（1）取脑心通胶囊内容物粉末精密称重后，至具塞磨口锥形瓶中，精密加入一定量有机溶剂，再称重后，用适宜方式提取，放置室温，用有机溶剂补足损失重量，摇匀，以微孔滤膜过滤，续滤液即得供试品溶液；（2）精密称取羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B、藁本内酯的对照品适量，用有机溶剂分别制成不同 浓度的混合溶液，即得混合对照品溶液；（3）以十八烷基硅烷键合硅胶作为固定相填充色谱柱；以有机溶剂-水按一定比例混合为流动相；梯度洗脱；流速为0.1-1.0 mL·min^-1；检测波长200-400nm；柱温20-40 ℃；样品管理器温度为2-8 ℃；（4）分别精密吸取混合对照品溶液1-10 μL，供试品溶液1-10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得； 

具体的实验步骤组成为：（1）取脑心通胶囊内容物粉末精密称重0.5 g后，至150 mL具塞磨口锥形瓶中，精密加入60-80%甲醇25-75mL，再称重后，用超声波提取15-45 min，放置室温，用60-80%甲醇补足损失重量，摇匀，以微孔滤膜过滤，续滤液即得供试品溶液；（2）精密称取羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B、藁本内酯的对照品适量，用甲醇分别制成不同浓度的混合溶液，即得混合对照品溶液；（3）以十八烷基硅烷键合硅胶作为固定相填充色谱柱；以乙腈（A）－0.5%甲酸水溶液（B）为流动相；梯度洗脱；流速为0.1-1.0 mL·min^-1；检测波长200-400nm；柱温20-40 ℃；样品管理器温度为2-8 ℃；（4）分别精密吸取混合对照品溶液2μL，供试品溶液2μL，注入液相色谱仪，测定，即得。 

其中优选的实验步骤为：（1）取脑心通胶囊内容物粉末精密称重0.5 g后，至150 mL具塞磨口锥形瓶中，精密加入75%甲醇50mL，再称重后，用超声波提取30 min，放置室温，用75%甲醇补足损失重量，摇匀，以0.2 μm微孔滤膜过滤，续滤液即得供试品溶液；（2）精密称取羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B、藁本内酯的对照品适量，用甲醇分别制成3.880、13.50、1.345、8.600、5.840 μg·mL^-1的混合溶液，即得混合对照品溶液；（3）以WATERS ACQUITY UPLC BEH C₁₈ (2.1 mm×100 mm，1.7μm)为色谱柱；以乙腈（A）－0.5%甲酸水溶液（B）为流动相；以0~1 min，8%A；1~3 min，8%A →32%A；3~15 min，32%A →57%A；21~23 min，57%A →100%A的规律梯度洗脱；流速为0.3mL·min^-1；检测波长：羟基红花黄色素A为400 nm、芍药苷为235 nm、丹酚酸B为280 nm、阿魏酸和藁本内酯为324 nm；柱温28 ℃；样品管理器温度为4 ℃；（4）分别精密吸取混合对照品溶液2μL，供试品溶液2μL，注入液相色谱仪，测定，即得。 

本发明技术方案检测的是一个有着16味药材组成的药物多成分含量，化学成分非常复杂，各成分极性差异较大，在以往的研究当中，仅有单一成分检测指标的报道，因此造成药物质量监控缺乏科学、全面、客观的评价，影响了药物临床应用的稳定性。如果想克服单一检测指标的缺陷，需要多成分同时检测，但采用传统的阴性样品法，不仅操作繁琐，而且难以反映方法的专属性。如处方中多种药材含同一化学成分，则易出现假阳性干扰结果，如川芎、当归中均含有阿魏酸、藁本内酯。本研究利用PDA检测器所采集的三维信息，比较样品中的各待测成分峰和对应标准品色谱峰的紫外吸收图谱，验证了检测方法的专属性。 

为此，本发明技术方案的实现能达到以下的有益效果： 

（1）通过先进的超高效液相色谱(UPLC)技术在24min中内能够完成一次色谱分析，达到快速监控的程度，有利于规模化大生产的应用；（2）采用梯度洗脱的方式能够明显提高各成分的分离效果，检测结果更为准确；（3）采用200-400nm全波长扫描的方式寻找各成分的最佳吸收波长，并最终确定了多波段检测的手段，能够达到响应信号较好，其他成分干扰较小，专属性较强，最大化地检测出各成分含量的效果；（4）检测脑心通胶囊的处理采用超声提取方式，不但提高药物成分的溶出速度，而且对羟基红花黄色素A、丹酚酸B等热不稳定成分的提取起到保护作用，最大程度避免了较高温度、较长提取时间造成的成分损失。因此，经过上述各项技术的有机结合，使得本发明药物的各主要成分色谱峰之间有良好的分离度，羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B、藁本内酯5 个成分质量浓度分别在0.970~9.70μg·mL-1（r=0.9993）、3.38~33.8μg·mL-1（r=0.9995）、0.336~3.36μg·mL-1（r=0.9996）、2.15~21.5μg·mL^-1（r=0.9999）、1.46~14.6μg·mL^-1（r=0.9998）的范围内与峰面积呈良好的线性关系，方法的平均回收率( n = 6) 分别为99.47%、101.3%、98.45%、98.54%、99.02%，精密度、重复性的RSD均小于2.0%。实现了复杂组合物含量测定的多成分同时监测方式，为脑心通胶囊的进一步研究提供技术支持。 

具体实施例

以下是本发明内容的具体实施例，用于阐述本申请文件中所要解决技术问题的技术方案，有助于本领域技术人员理解本发明内容，但本发明技术方案的实现并不限于这些实施例。 

实施例1 

（1）将黄芪66g、赤芍27g、丹参27g、当归27g、川芎27g、桃仁27g、红花13g、制乳香13g、制没药13g、鸡血藤20g、牛膝27g、桂枝20g、桑枝27g、地龙27g、全蝎13g、水蛭27g十六味药材，取地龙、全蝎，粉碎成细粉；其余黄芪等十四味粉碎成细粉，与地龙、全蝎粉末配研，过筛，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得胶囊剂。（2）取胶囊20粒，精密称重，完全转移胶囊的内容物至干燥恒重的称量瓶中，再精密称重空胶囊壳，计算胶囊平均粒重。精密称量胶囊内容物约0.5 g，至150 mL具塞磨口锥形瓶中，精密加入75%甲醇50 mL，称重，超声波（功率280 W，频率40 kHz)提取30 min，放置室温，用75%甲醇补足损失重量，摇匀，以0.2 μm微孔滤膜过滤，续滤液即得供试品溶液；精密称取羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B、藁本内酯的对照品适量，用甲醇制成3.880、13.50、1.345、8.600、5.840 μg·mL^-1的混合溶液，即得混合对照品溶液。（3）色谱条件：色谱柱为WATERS ACQUITY UPLC BEH C₁₈ (2.1 mm×100 mm，1.7 μm)；以乙腈( A)－0.5%甲酸水溶液( B)为流动相，梯度 洗脱(0~1 min，8%A；1~3 min，8%A →32%A；3~15 min，32%A →57%A；21~23 min，57%A →100%A)；流速为0.3 mL·min^-1；检测波长：羟基红花黄色素A为400 nm，芍药苷为235 nm，丹酚酸B为280 nm，阿魏酸和藁本内酯为324 nm；柱温：28 ℃；样品管理器温度为4 ℃；理论塔板数以羟基红花黄色素A和丹酚酸B计分别为58954和65956。（4）分别精密吸取混合对照品溶液2μL，供试品溶液2μL，注入液相色谱仪，测定，即得。详细图谱见说明书附图部分。 

经过我们的大量实验研究结果表明，上述实验步骤中的关键参数可以用以下数据替换，效果也达到药品生产标准要求。 

①色谱流动相的有机相可以选择不同比例的甲醇、正己烷、乙酸乙酯、氯仿等；②色谱流动相的水相可以选择不同比例的纯水、甲酸、磷酸、磷酸缓冲溶液等；③检测波长可以在200~400 nm范围内选择；④脑心通胶囊的化学成分提取方式可以选择超声波提取、加热回流提取、渗漉法提取、浸泡法提取等；⑤脑心通胶囊的化学成分提取溶媒可以选择不同比例的乙醇、甲醇、乙酸乙酯、正丁醇等有机溶剂；⑥色谱柱可以选择不同型号的C₁₈、C₈、C₄、苯基柱等；⑦梯度洗脱参数可以在：流速0.1-1.0 mL·min^-1，柱温20-40 ℃；样品管理器温度为2-8 ℃；进样量1-10 μL等范围内选择。 

附图说明

1.图1为检测波长为235nm时，a为胶囊样品组，b为对照品组，两者对应的色谱峰2为芍药苷的图谱； 

2.图2为检测波长为280nm时，a为胶囊样品组，b为对照品组，两者对应的色谱峰4为丹酚酸B的图谱； 

3.图3为检测波长为324nm时，a为胶囊样品组，b为对照品组，两者对应的色谱峰1、3、4、5分别为羟基红花黄色素A、阿魏酸、丹酚酸B、藁本内酯的图谱； 

4.图4为检测波长为400nm时，a为胶囊样品组，b为对照品组，两者对应的色谱峰1为羟基红花黄色素A的图谱。