一种非诺贝特脂质立方液晶固体粉末及其制备方法

摘要

本发明涉及药物制剂技术领域，提供了一种非诺贝特脂质立方液晶固体粉末及其制备方法。所述非诺贝特脂质方晶固体粉末是在非诺贝特脂质方晶中加入适量麦芽糖糊精经喷雾干燥制备得到；或者在非诺贝特脂质方晶中加入冻干赋形剂经冷冻干燥制备得到。所述的非诺贝特脂质方晶固体粉末具有便于运输和储藏，稳定性高，载药量及药物生物利用度高的特点。

说明书

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，更为具体地，涉及一种非诺贝特脂质立方液晶固体粉末及其制备方法。

背景技术

脂质立方液晶微粒（cubosomes）是指一定浓度的两亲性脂质在水中会自发形成热力学稳定的脂质双层，然后再通过扭曲形成可空间填充的立方液晶体系。该立方液晶具有双连续但不交叉的水道，即在三维方向上，以最小表面原理，水区和脂质区周期性循环排列，形成“蜂窝状”结构。因为其独特的双水道结构，使其具有多样化的包裹性，它既能包裹水溶性药物如马来酸噻吗洛尔、四环素、头孢唑林、阿霉素等，也能包裹脂溶性药物如维生素E、阿司匹林等，此外，甲硝唑、马来酸氯苯那敏、溴丙胺太林、盐酸普萘洛尔等一些药物也能包裹其中。

自组装成立方液晶纳米粒的双亲性脂质分子报道最多的是甘油单油酸酯（GMO），甘油单油酸酯-水系统最为常用。但单纯的由GMO和水形成的脂质立方液晶水分散系并不稳定，因为它的疏水链会暴露在水介质中，从而破坏晶体的内部结构。

现有技术中脂质立方液晶有三种经典的微粒：一是采用喷雾干燥法制备得到的前体，以固态或液态存在；二是采用经典机械高能量输入法制备得到的大立方凝胶微粒，它具有各向同性（外观上澄清），僵硬的固态状；三是采用乳化法制备得到的立方液晶纳米粒分散体系，显示为均一，热力学稳定，呈周期性排列晶体。

高能量输入法具体操作为先将脂质材料和水相混合制得大立方凝胶粒子，反应24小时，通过机械法或超声法将立方凝胶粒子分散成纳米和微米级的颗粒。分散加工过程常用高压均质机，而且数次循环均质才能形成均一的立方颗粒。如果要使得颗粒更小，可使用高压乳化器以减小粒径。但该方法有以下几个缺点：1.由于形成的中间产物大立方凝胶粒子粘性很大，要将其纳米化比较困难，需要输入大量能量，会降低立方脂质-水系统的自组装能力，而且过多的能量输入会破坏立方液晶相的内部结构；2.反应时间过长，不利于大量生产。

乳化法的具体操作为在室温条件下，通过稀释甘油单油酸酯-乙醇系统，自发乳化，形成立方液晶纳米粒；整个过程中只是简单的混合，避免了机械能或超声能等过多能量的输入。该方法的关键是加入了助水溶剂（如乙醇）。助水溶剂是一种两亲性但是没有表面活性剂功能的分子，它能破坏液晶相，即促进形成液晶颗粒分散系，本身不参与形成液晶，当混合入一定量时，它可以增加水不溶性脂质如甘油单油酸酯的溶解性。乳化法可应用于室温条件下，而且其中间产物是低粘度、各向异性的L_α相，无需高能量输入即可制的脂质立方液晶纳米粒。乳化法虽有以上优点，但其产物为液态，不利于运输，粒径不宜控制，不稳定。

喷雾干燥法的具体操作是把立方液晶纳米粒制成前体粉末形式：①在水改良淀粉溶液中，喷雾干燥由淀粉-甘油单油酸酯-水系统形成的分散体系，制成包裹有淀粉的甘油单油酸酯；②由乙醇-葡聚糖-甘油单油酸酯-水系统形成乳剂，喷雾干燥后，制成包裹有葡聚糖的甘油单油酸酯。淀粉和葡聚糖作为包裹甘油单油酸酯的胶囊材料，不但在干燥过程中，可以减少粉末的内聚现象，而且在粉末通过水合作用形成脂质立方液晶纳米粒时，具有可溶性胶体稳定剂的作用。加入水之后，两种粉末可以形成平均粒径为0.6μm的胶体状、稳定的立方液晶纳米粒。淀粉系统形成的是粗分散系，而葡聚糖系统形成的是乳剂，乳剂比粗分散系更容易喷雾和分散，所以葡聚糖系统获得的颗粒粒径分布范围较窄。但该方法用来做胶囊的淀粉和葡聚糖含量很高（淀粉75%，葡聚糖60%），导致脂质体含量很少，可以包裹药物的含量也相应减少。所以此方法适合用于药效值较高的药物，如酶，维生素等。而且形成的粒径较大（600nm），不适于制成注射剂。

非诺贝特为苯氧芳酸类调血脂药，它能显著降低血清甘油三酯和低密度脂蛋白、胆固醇、极低密度脂蛋白和载脂蛋白-B的浓度，并能使高密度脂蛋白、载脂蛋白-A及载脂蛋白A1与载脂蛋白-B的比值升高，比起氯贝丁酯的作用要更强，它适用于各种高脂血症，如：高TC血症、高TG血症及混合型高脂血症，降TG功效显著，可作为降TG的首选药物。除此之外，非诺贝特还能降低血浆纤维蛋白原含量，减少血小板的粘性，从而降低血栓的形成。当非诺贝特进入人体后，会被组织和血浆中的酯酶水解，生成的具有活性的代谢产物——非诺贝特酸，从而起到降低血脂的作用。

非诺贝特属于亲脂性化合物，在水中几乎不溶，油水分配系数为5.3，口服吸收差，因此生物利用度低。到目前为止，非诺贝特在国内外已经上市的剂型主要有胶囊剂和片剂，最常见的是采用原料药微粉化技术，以提高其生物利用度；此外非诺贝特双层渗透泵制剂、缓释微丸、纳米混悬剂、微粉化胶囊等，均已有文献报道。但这些剂型提高非诺贝特生物利用度的能力依旧有限。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有非诺贝特剂型的技术不足，提供一种非诺贝特脂质立方液晶固体粉末的制备方法。

本发明要解决的另一技术问题是提供基于所述制备方法获得的非诺贝特脂质立方液晶固体粉末，所述非诺贝特脂质立方晶固体粉末具有良好的载药量特性，能很好地提高非诺贝特生物利用度。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现：

提供一种非诺贝特脂质立方液晶固体粉末的制备方法，包括以下步骤：

S1.制备非诺贝特脂质立方液晶；

S2.往S1制备得到的非诺贝特脂质立方液晶中加入麦芽糖糊精得到混合物，用水稀释所述混合物后经喷雾干燥即得；或者在S1制备得到的非诺贝特脂质立方液晶中加入冻干赋形剂后经冷冻干燥即得；

其中，S1所述的非诺贝特立方液晶的制备方法是，按照质量比，取甘油单油酸酯（GMO）和泊洛沙姆407（F-127）在50～70℃下水浴熔融后加入非诺贝特成为油相，往油相中加入一定量的水超声混匀溶解后得混合物，将混合物置入高压灭菌器中，加热升温至90～110℃，放冷气3～5min，然后盖上放气孔，加热升温到115～125℃处理10～20min；

所述甘油单油酸酯（GMO）、泊洛沙姆407（F-127）、非诺贝特和水的质量比为20：1.5～3.0：0.5～3.0：180；

S2所述的麦芽糖糊精、甘油单油酸酯（GMO）、泊洛沙姆407（F-127）、非诺贝特和水的质量比为60：20：1.5～3.0：0.5～3.0：400g。

作为一种优选方案，S1是分别取甘油单油酸酯和泊洛沙姆407（F-127），在60℃下水浴熔融；加入蒸馏水超声溶解后放入高压灭菌器中，加热温度到100℃，放冷气4min，盖上放气孔，加热升温到121℃后，继续加热处理15min得所述非诺贝特脂质立方液晶。

由于单纯的由GMO和水形成的脂质立方液晶水分散系并不稳定，疏水链会暴露在水介质中，从而破坏晶体的内部结构。本发明在S1制备非诺贝特脂质立方液晶时，在疏水链和水介质中加入双亲性分散介质避免输水链与水介质的反应，从而保护晶体内部不被破坏。本发明针对GMO、非诺贝特的特性、不断分析研究结合大量实验总结，适宜用量的泊洛沙姆407（F127）是一种理想的稳定剂和分散介质。泊洛沙姆407（F127）是由聚氧乙烯（PEO）、聚氧丙烯（PPO）组成PEO₉₈-PPO₆₇-PEO₉₈非离子三嵌段共聚物，疏水性PPO与颗粒表面结合，亲水性PEO则覆盖在表面，形成空间上的“盾牌”，进而起到稳定的作用。加入F127的含量会影响最后形成的脂质液晶纳米粒的结构和颗粒大小。当F127含量为3%时，形成螺旋型结构（C_D）为主，随着F127含量的增加，螺旋型结构逐渐转变为体心立方结构（C_P），当F127含量达到15%，形成的脂质立方液晶纳米粒以体心立方结构为主，此时形成的纳米粒不受温度影响（25～65℃）。这是因为，当F127浓度较低时，F127主要包裹在颗粒的表面上，当F127浓度提高完全覆盖住颗粒表面之后，多余的F127就会进入甘油单油酸酯内部。和甘油单油酸酯相比，F127的亲水性更强，所以加入F127可以增加立方相的水合作用程度。

作为一种优选方案，S2所述喷雾干燥的条件为：进风温度为120～140℃，实际出口温度为85～100℃，风速为80～100L/min，进料速度为30～40mL/min。

作为一种最优选方案， S2所述喷雾干燥的条件为：进风温度为130℃，实际出口温度为97～90℃，风速为90L/min，进料速度为35mL/min。

应用喷雾干燥技术制备非诺贝特脂质方晶固体粉末的过程中，需要克服液体料在干燥中产生的热敏性、变性等技术难题。通常，当喷雾干燥混悬液时，在某些范围的进口温度条件下，喷雾干燥只能作为一种干燥手段来干燥混悬液中原有的颗粒，不能改变原有颗粒的形貌；而在某些范围的进口温度下，喷雾干燥可以成为制备理想粒径产品的有效手段；同时，还必须综合考虑液体料本身的热敏性和变性等性能与进口温度、出口温度、进样流速、压力和风速等因素之间的相互影响，这些因素之间的相互影响不是简单的一对一的关系，需要付出长期大量的实验摸索和创造性的分析总结才能总结出针对性的解决方案。本发明将非诺贝特脂质方晶和麦芽糖糊精按照适宜的比例混合后加水配制得到混悬液，经精确条件设定的喷雾干燥后得到干燥粉末，实验结果可知，将本发明所得干燥粉末重新分散后的脂质立方液晶在显微镜下呈球形，无明显的微粒聚集现象，效果很好。

作为一种优选方案，S2所述冷冻干燥的条件是：-45℃预冻6小时之后开始升温干燥，程序为：-35℃ 1h；-30℃ 8h；-25℃ 8h；-20℃ 5h；-10℃ 2h；0℃ 2h；10℃ 1h；20℃ 3h。

作为一种优选方案，S2所述冻干赋形剂为甘露醇、麦芽糖、乳糖和葡萄糖中的一种或其混合。

作为一种最优选方案，S2所述冻干赋形剂为甘露醇和葡萄糖的混合物，或者为甘露醇和乳糖的混合物。

作为一种最优选方案，所述甘露醇和葡萄糖的混合质量比例为1：1；所述为甘露醇和乳糖的混合质量比例为1：1。

作为一种优选方案，S2所述冻干赋形剂的加入量按照加入后其占非诺贝特脂质立方液晶和冻干赋形剂混合物总质量的9.09%确定。

本发明同时提供一种由上述制备方法制备得到的非诺贝特脂质方晶固体粉末。

本发明具有如下有益效果：

本发明针对非诺贝特提供了其脂质立方液晶固体粉末的制备方法，经过创造性地分析和大量实验，总结出处方配伍以及制备工艺参数，得到的非诺贝特固体粉末便于运输、储藏、载药量高，显著提高非诺贝特的生物利用度，所述脂质立方液晶固体粉末载药后，粒径均匀，复溶后粒径在500nm左右，稳定性高。

附图说明

图1 非诺贝特物理混合偏光照片。

图2 非诺贝特脂质立方液晶立方相偏光照片。

图3 非诺贝特脂质立方液晶微粒透射电子显微镜。

图4 非诺贝特脂质立方液晶喷雾干燥粉末复溶后偏光显微镜。

图5 非诺贝特脂质立方液晶喷雾干燥粉末复溶后透射电子显微镜。

图6 非诺贝特脂质立方液晶喷雾干燥粉末和原料药累积释放量。

图7非诺贝特脂质立方液晶喷雾干燥粉末与其原料药混悬剂大鼠体内的血药浓度-时间曲线(n=6)。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例本身对发明不做任何形式的限定。

实施例1 非诺贝特脂质立方液晶的制备

取甘油单油酸酯20g，乳化剂泊洛沙姆407（F-127） 2.0 g，在60℃下水浴熔融，加入非诺贝特 1g成为油相，往油相中加入去离子水177ml，超声溶解后放入高压灭菌器中，加热到100℃，放冷气3~5min，然后盖上放气孔，加热升温到121℃后，继续加热处理15min。得非诺贝特脂质立方液晶。

实施例2 非诺贝特脂质立方液晶喷雾干燥粉末的制备

S1.分别取甘油单油酸酯（GMO）和泊洛沙姆407（F-127）和非诺贝特，在60℃下水浴熔融；加入去离子水45mL超声溶解后放入高压灭菌器中，加到100℃，放冷气4min，然后盖上放气孔，加热升温到121℃后，继续加热处理15min；

S2. 加入麦芽糖糊精，用去离子水55mL稀释至一定浓度，用喷雾干燥机进行喷雾干燥；喷雾条件为：进风温度为130℃，实际出口温度为97～90℃，风速为90L/min，进料速度为35mL/min。结果得到非诺贝特脂质立方液晶喷雾干燥粉末。

实施例3非诺贝特脂质立方液晶冷冻干燥粉末的制备

   S1.取甘油单油酸酯20g，乳化剂泊洛沙姆407（F-127） 2.0g，在60℃下水浴熔融，加入非诺贝特 1.0g，按油相：加入蒸馏水177ml，超声溶解后放入高压灭菌器中，加热温度到100℃，放冷气3～5min，后盖上放气孔，加热升温到121℃后，继续加热处理15min得非诺贝特脂质立方液晶；

   S2.将 S1所得非诺贝特脂质立方液晶中分别加入20g冻干赋形剂后进行冷

干燥；冻冻干燥的条件：-45℃的冻干机中预冻6h，之后开始升温干燥，程序为：-35℃ 1h；-30℃ 8h；-25℃ 8h；-20℃ 5h；-10℃ 2h；0℃ 2h；10℃ 1h；20℃ 3h。

冻干赋形剂的筛选：按照表3的配伍和比例在制得的非诺贝特脂质立方液晶中分别加入葡聚糖、甘露醇、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、葡聚糖：甘露醇（质量比为1:1）、葡聚糖：乳糖（质量比为1:1）、葡聚糖：葡萄糖（质量比为1:1）、甘露醇：乳糖（质量比为1:1）、甘露醇：葡萄糖（质量比为1:1）为冻干赋形剂，取2ml各置10ml西林瓶中进行后续的冷冻干燥实验；

一般来说，加冻干赋形剂之后，固体含量宜为4%～25%，因此此处固体含量为19.54%，加水量为80.46%，如表3所示。

仔细观察记录非诺贝特脂质立方液晶冷冻干燥粉末外观；并且加入适量蒸馏水，室温下振摇均匀，重新获得非诺贝特脂质立方液晶混悬液，观察并记录其状态。若无冻干赋形剂的加入，在冷冻干燥中，原剂型会遭到破坏；因此加入冻干赋形剂十分必要。由表4可知，甘露醇、麦芽糖、乳糖作为冻干赋形剂，要比葡聚糖、葡萄糖效果好；此外，两种冻干赋形剂混合要比单一种类冻干赋形剂效果好。其中甘露醇+葡萄糖、甘露醇+乳糖效果最好，因此，此处选择此两种辅料作为冻干赋形剂。

实施例4 非诺贝特脂质立方液晶固体粉末的粒度研究

将干燥后的非诺贝特脂质立方液晶喷雾干燥粉末，加入适量蒸馏水中，室温下振摇均匀，重新获得非诺贝特脂质立方液晶微粒。附图4和5表明：非诺贝特药物在偏光显微镜下呈现偏光色彩，形成脂质立方液晶后，药物结晶的偏振光消失。喷雾干燥和冷冻干燥的赋性物皆为水溶性，复溶后通过偏光显微镜和电子显微镜分析，脂质方晶结构仍然存在，只是粒度增大。

分别取非诺贝特脂质立方液晶、喷雾干燥前（加入麦芽糖糊精）、及喷雾干燥复溶后液体、冻干前、冻干后复溶，用粒度测定仪进行粒度测定。由表5可知，加入麦芽糖糊精之后，立方液晶的粒径由235.2±25.32nm增加到276.5±38.18nm。而复溶之后，立方液晶粒径较增加到567.8±150.5，比喷雾干燥前增加了一倍。

实施例5 体外释放度试验

采用桨法考察非诺贝特脂质立方液晶喷雾干燥粉末、原料药粉的体外释放特性。结果见附图6所示。

释放介质的配制：称取40g十二烷基硫酸钠，以1：100质量比溶于水中，配制成4000ml1%SDS溶液备用。

实施例6 脂质立方液晶微粒在大鼠体内的药物动力学研究

服药方案：12只SD大鼠，依次称重，按体重均衡原则平均分成2组，雌雄各半，每6只一组；实验前均禁食12h，饮水自由。一组作为对照组，给予非诺贝特混悬剂，另一组为样品组，给予非诺贝特脂质立方液晶喷雾干燥粉末复溶后的样品。根据含FT20mg/kg的剂量对大鼠灌胃给药；

样品组给药：非诺贝特脂质立方液晶喷雾干燥粉末（实施例2制备得到）复溶后的样品。大鼠禁食12h，根据20mg/kg的非诺贝特含量称取相应非诺贝特脂质立方液晶干燥粉末适量，加入3ml蒸馏水溶解，对大鼠灌胃给药。

对照组给药：非诺贝特混悬剂。大鼠禁食12h，根据20mg/kg的剂量称取相应非诺贝特原料药适量，加入到含适量麦芽糖糊精的3ml水溶液中，混合均匀，对大鼠灌胃给药。

肝素离心管和毛细管的制备：将0.1ml的1%肝素纳溶液放于试管内，均匀浸湿管壁，放于烘箱80℃烘干，备用；将直径为1mm的毛细玻璃管用0.1mL的1%肝素纳溶液浸润，后用滤纸吸干，用砂轮截成边缘均匀，约2cm的取血毛细管。

对照组和样品组取样：给药后分别于0.5、1.5、2.5、4.5、7、10、13、16、24、30、36、48、60h自大鼠眼眶静脉丛取全血约0.4ml于肝素离心管中，4000r/min，离心10min，取上清液即为血浆，保存备用。

6组大鼠分别灌胃给药，测定各个时间点的血药浓度，并根据血药浓度绘制各组药时曲线，结果见附图7，实施例2制备得到的非诺贝特脂质立方液晶喷雾干燥粉末给药后在大鼠体内于4.5h时达到血药峰值浓度，且高达89.92μg/ml，而非诺贝特混悬剂在7h时达峰，浓度为6.44μg/ml。由结果可知，将非诺贝特制成脂质立方液晶剂型之后，大鼠血药浓度明显升高，说明本发明所述的非诺贝特脂质立方液晶喷雾干燥粉末可以显著提高大鼠对非诺贝特的吸收，提高生物利用度。