一种基于简易大规模PCR高效制备线性DNA的方法

摘要

本发明提出了一种大规模PCR快速制备线性DNA的方法，它是在中国专利（ZL201010229160.5）低成本获得高特性DNA聚合酶RKOD的基础上，利用优化的PCR程序建立了高于常规PCR体积50-1200倍的大规模PCR方法，利用本发明获得PCR产物的浓度可达300μg/mL。在该发明中，PCR体系中的dNTPs、引物和PCRbuffer参照常规PCR浓度加样，质粒模板的浓度为1μg/mL，DNA聚合酶的用量为10U/mL，大规模PCR步骤为：(1)将反应体系置于98℃水浴0.5min；(2)72℃水浴1min；(3)将步骤(1)(2)进行40个循环，回收PCR产物。利用本发明能够实现线性DNA低成本、高速率、大规模的生产，可为进一步低成本、高效快速制备线性DNA疫苗应对新发传染病奠定基础。