一种用于皮肤美容保健的复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素及其制备方法

摘要

本发明涉及化妆品皮肤美容保健及延缓皮肤衰老等领域，具体是一种用于皮肤美容保健的复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素及其制备方法。将从新鲜鹿茸中提取分离的具有高效天然生物活性的复合鹿茸多肽冻干粉、与具有促进该功效成分透皮吸收的纳米级缓冲微乳按一定比例配成组合美容精华素，能使其功效成分透皮吸收快、生物活性保存长、生物利用度高、作用效果好、使用更安全。另外，该组合精华素制备工艺简练、技术操作简单，既可节约能源和成本，又低碳环保不污染环境，且适合产业化批量生产和普及应用。

说明书

技术领域

本发明涉及一种可用于皮肤美容保健及延缓皮肤衰老的组合精华素及其制备方法。它是用从新鲜鹿茸中提取分离的、具有天然生物活性的鹿茸多肽及其保护剂为主要功效成分的复合鹿茸多肽冻干粉、与具有促进功效成分透皮吸收的纳米级缓冲微乳按一定比例配成的组合美容精华素，具体涉及一种用于皮肤美容保健的复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素及其制备方法。 

背景技术

一、美容精华素的技术背景： 

精华素是将从某些动物脏器或组织、天然植物或中草药、海洋生物、微生物等中提取、分离、纯化出来的天然功效成分或生物活性物质或皮肤营养素等，按照一定的比例添加到某些高品质液体化妆品中即可制备成具有不同美容功效和皮肤抗衰老作用的美容精华素，这是当今美容化妆品和皮肤抗衰老外用制剂中最受消费者青睐和欢迎的剂型之一。目前国际上无论是哪个国家的精华素产品、也无论是哪个品牌的精华素，无论其中含有什么成分、或者具有何种功能的精华素，无非有两种剂型，即水剂型精华素和油剂型精华素两种。在中国，目前，用于面部美容的精华素之中大都含有某些皮肤组织及其细胞生存和生长 所需要的营养素、细胞生长因子、抗氧化生物酶、保湿因子、生物活性物、天然植物及中草药提取物和植物挥发油、以及胶原蛋白水解液、胎牛血浆或血清等，因此诞生了诸如皮肤抗衰老精华素、皮肤营养精华素、皮肤美白精华素、皮肤抗皱精华素、皮肤保湿精华素、皮肤祛斑精华素、丰胸美体精华素、纤体瘦身精华素、香薰精华素等。人们习惯地认为，只要平时经常使用它就有一定的皮肤抗衰、防老、抗皱、保湿、美白、去斑等作用。当皮肤自然衰老而出现较多皱纹、或因季节变化皮肤变得干燥粗糙、因不良习惯变得面部灰暗无光、因长时间光照皮肤色素加深时，都会选择使用不同类型的精华素。 

二、鹿茸多肽的技术背景 

近年来，相关领域的研究人员已经对鹿茸、特别是新鲜鹿茸中一些具有高度生物的活性物质和功效成分进行研究、开发和应用，如对鹿茸多肽及鹿茸生长因子应用性研究工作正陆续展开。由于鹿茸自我生长和再生修复速度很快，因此人们推测鹿茸中可能存在某种与一般组织不同或者种类更多、含量更加丰富的鹿茸活性多肽因子(主要包括鹿茸多肽和生长因子)，从而有序控制、有效刺激着鹿茸的快速生长，并促进鹿茸骨质和表皮层的迅速增生。目前，鹿茸多肽正在被相关医学领域研究和应用：(1)用于创伤愈合：鹿茸多肽能加速实验性骨折大鼠骨痂的形成和骨折的愈合，改善骨折部位的生物力学性能，对骨痂内骨胶原的积累和钙盐沉积有促进作用；鹿茸多肽还是一种促细胞有丝分裂剂，能刺激软骨细胞和成骨样细胞增殖；且鹿茸多肽对大鼠背部皮肤缺损有修复作用，对表皮细胞和成纤维细胞增殖也有明显的促进作用，能加速皮肤创伤愈合。(2)用于神经损伤修复：鹿茸总多肽在体外可促进神经干细胞向神经元分化。它能促进大鼠坐骨神经损伤后神经再生、加快其神经轴突生长速度，有助于坐骨神经功能的恢复。鹿茸多肽还能促进周围神经生长，主要是通过扩张神经外周 及内部血管，改善损伤神经的微环境，提高微动脉血流量等作用实现；同时，还具有加快损伤神经变性坏死物质的清除，增加对神经再生物质的供给，加快轴浆的恢复，进而防止神经元坏死，促进神经损伤早期的再生功能。(3)用于免疫功能提升：鹿茸混合多肽有对抗环磷酰胺所诱导的小鼠白细胞和骨髓有核细胞减少，能提高血清总蛋白、白蛋白及球蛋白含量以及吞噬细胞的吞噬功能；对红细胞免疫功能、特异或非特异性免疫功能具有一定的提升作用。(4)用于抗炎作用：鹿茸多肽可对各种急、慢性炎症发挥明显的抑制作用，并可使肾上腺皮质的兴奋性和刺激作用增强。而鹿茸多肽的有明显抗炎作用。(5)提高抗氧化作用：鹿茸多肽可提高小鼠清除自由基的能力，降低动物组织脑和肝组织中丙二醛(MDA)含量，抑制细胞脂质过氧化水平和生物膜受损程度；且在体外能抑制大鼠脑、肝、肾微粒体脂质过氧化反应及还原型细胞色素C形成，提高机体的抗氧化作用。(6)用于肿瘤抑制：鹿茸多肽对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤株有显著的促分化作用，并能抑制肿瘤细胞的增殖。同时，能使肿瘤模型动物的生存时间显著延长，抗肿瘤作用显现。(7)对性功能影响：鹿茸多肽使腺垂体细胞培养液中黄体生成素含量增多，睾丸精原细胞数目增多，生精细胞层数增多，睾酮素分泌增多。然而，人们过去对新鲜鹿茸的提取多采用传统的煎、煮、熬或烘烤、风干、粉碎、酒泡等古老方式，在很大程度上破坏了不耐热、易变性的多肽、蛋白质等活性成分，其中可用于皮肤外用方面的生物活性物质及其功效成分少之又少，加上过去对新鲜鹿茸功效成分的测定和分析多集中在一般组成成分和普通生化组分等方面，因此，鹿茸生物活性物质和功效成分在皮肤方面鲜少应用，在化妆品美容保健和皮肤抗衰老方面的应用更加稀少。 

近年来，国内外学者相继发现和报道了新鲜鹿茸中不仅具有能促进细胞核糖体及蛋白质合成的鹿茸多肽，而且还从新鲜鹿茸中提取分离了具有多肽类活性物质的细胞生长因子，并证明该鹿茸活性多肽及其细胞因子大约由68个氨基 酸组成，其分子量月7200道尔顿，纯品鹿茸多肽的性状为淡黄色粉末，属于水溶性物质，易溶于水。同时还证实，在提取分离的鹿茸多肽中，还含有其它能促进细胞分裂和增殖的多种细胞生长因子，如角质形成细胞因子(KGF)、表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、血小板衍生因子(PDGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)、转化生长因子(TGF)等，真正是一个鹿茸多肽及细胞生长因子库。而这些具有天然生物活性的鹿茸多肽及细胞生长因子，是目前公认的皮肤美容保健、延缓皮肤衰老和皮肤屏障功能重建的重要功效成分和生物活性物质。因此，鹿茸多肽及其细胞生长因子的发现和提取分离，为其在皮肤美容保健之中的应用奠定了基础。 

三、微乳的技术背景 

微乳(microemulsion，ME)是一种由水相、油相、表面活性剂及助表面活性剂所组成的外观澄清透明的、液滴粒径小于100nm的、且热力学和动力学均十分稳定的液态体系。微乳以极小微粒著称，它的乳滴可自由分散在另一种液体之中而形成胶体分散系统，其乳滴形状多为球形，且大小基本均匀一致，流动性良好，即使经过一定温度下的长时间放置、加热或高压灭菌或离心分离也不会使之分层。即使在相组成临界点上，由于温度发生变化而被破坏，但当恢复到正常温度时，此系统又可自主恢复到微乳状态。微乳和普通乳状液具有三个根本点：第一，普通乳液的形成一般需要外界提供能量，而微乳则是自发形成的；第二，普通乳液是热力学不稳定体系，在存放过程中将发生聚结而最终分为油、水两相。而微乳则是热力学和动力学均稳定体系，不会发生聚结。第三，普通乳液的粒径通常在微米级，而微乳的粒径基本控制在10-100nm，并可作为脂溶性和水溶性营养物质与功效成分的载体。微乳中的营养物质与功效成分根据其亲脂性和亲水性的差异，可能主要存在于油相、水相、油水界面膜相，或在各 相之间进行分布。营养物质与功效成分的解离性质、脂水分配系数可能有所变化，这样，营养物质与功效成分在微乳系统中就可能呈现出不同的稳定性及其分布特征等。微乳作为功效成分载体和促进透皮吸收渗透剂，与普通乳剂相比，微乳粒径微小至纳米级、且分布非常均匀，因此，更加有利于与生物活性物质和功效成分相融合和均匀分布，使其透皮作用更佳，生物利用度更高；而且，与脂质体等其它相比，微乳性质更加稳定，且制备更易工业化或产业化。 

当前同类技术或产品的不足之处

目前美容精华素应用的不足之处：美容精华素的生产简便、操作容易、使用方便、且在实际应用及其作用功效上确有很多优点和优势，然而，其明显的缺陷和不足也有不少。目前美容精华素应用的不足之处主要有如下方面：第一，大多数用于皮肤美容的精华素中含有不同浓度的乙醇，使用时具有一定的嗅觉刺激性和皮肤刺激性，特别是某些对乙醇敏感的肤质很容易引起皮肤过敏和皮肤干燥，而且对眼睛也有不同程度的刺激性；第二，美容精华素的作用和功效主要依赖于其中所含有或添加的功效成分及其生物活性，但很多功效成分及其生物活性在液体或溶剂之中很容易降解或水解，以至于很多功效成分的分子结构破坏、生物活性丧失、生理功能降低；第三，美容精华素的频繁开启容易挥发和丢失部分溶剂，使其中功效成分的溶解性和稳定性降低，不仅影响产品的感官和质量，而且也影响到产品的稳定性和实际效果，因此，精华素通常较难保存、且贮存期不太长；第四，美容精华素在经常使用过程中如未注意卫生，很容易使其造成污染、滋生大量有害或致病性微生物，从而影响皮肤健康、甚至造成交叉感染；第五，为促进功效成分和生物活性物质透皮吸收，某些美容精华素中添加了一定浓度的促透皮渗透剂，而有些促透皮渗透剂较易引起皮肤 过敏或刺激、过多使用甚至有一定的生物毒性(如DMSO等)；第六，美容精华素中大多数是水溶性物质、即使其中添加了某些油溶性物质，需要添加一些乳化剂或助乳化剂才能使其均匀分散、完全溶解，但即使添加一些乳化剂或助乳化剂也很难维持精华素的长久稳定性、且某些乳化剂或助乳化剂使用曾有引起皮肤过敏的报道；第七，更重要的是，精华素中的溶剂本身并不具备促进功效成分经皮渗透和吸收的作用，即使目前人们在精华素中人为添加一些所谓促皮肤渗透剂，但其实际促透皮渗透作用又非常有限，特别是由于皮肤屏障结构的组织学特点，严格限制了一些外源性物质，包括蛋白质、水、糖、脂质、维生素、无机离子或化妆品功效成分等物质通过，绝大多数功效成分均无法或很难通过完整的皮肤角质层屏障发挥应有的生物学作用，因此，添加到精华素中的功效成分和生物活性物质的生物利用度较小、生物学作用和使用效果有限。 

目前鹿茸多肽应用的不足之处：鹿茸多肽作为具有生物活性的功效成分具有广泛的生物学作用和应用领域，但鹿茸多肽目前主要在医学研究和部分临床领域中应用，尚未见在皮肤美容保健和延缓皮肤衰老中应用的正式产品。而且，如果采用现有方法制备的鹿茸多肽在皮肤美容保健和延缓皮肤老化产品中应用仍然存在一定局限性和不足之处。主要表现在：(1)采用传统加热、强酸或酶蛋白水解新鲜鹿茸所得到的鹿茸多肽虽多肽含量较高、且得率较高，但加热、强酸或酶蛋白水解方法不仅较多浪费能源和污染环境，而且所得鹿茸多肽在很大程度上失去了天然生物活性，实际应用时其生物学作用和生理学功能有限，也难以最大限度发挥和达到鹿茸多肽本应具有的应用效果；(2)采用目前常规的酸醇法提取分离所得鹿茸多肽，其分子构象、天然特性等较传统方法较多保留、生物学活性也有所提高，但酸醇法所得鹿茸多肽较为粗糙、纯度不高、且含有较多不溶性杂质和皮质类固醇激素及性激素，这些直接用在皮肤美容保健和延 缓皮肤老化方面可能存在着皮肤刺激及过敏风险和副作用等；(3)采用柱层析法或高效液相进一步纯化，虽能得到分子量分布均一性较好、纯度较高、生物活性较好的鹿茸多肽，但采用此法所得鹿茸多肽不仅得率很低、操作繁琐、需要特殊仪器设备、应用成本高、价格贵等，而且该法难以产业化扩试和规模生产，也无法普及应用；加上该法完全剔除其它成分、包括具有协同增效的功效成分，故实际应用效果也很有限；(4)鹿茸多肽在液体中不易保存、且易于降解、生物活性也大大降低，而采用冻干粉并辅以保护剂和增效剂才是最佳方案。 

目前微乳应用的不足之处：虽然目前已有微乳产品，有些也许其粒径也能达到纳米级，但目前配制的微乳，尽管其组方及其比例不尽相同，特别是其水相均用去离子水或蒸馏水，这虽对整个微乳形成至关重要，但采用蒸馏水作为水相配制微乳对其pH值无缓冲和稳定作用，特别是一些用于皮肤美容、抗衰老、再生修复、促进皮肤细胞增殖等功能性的美容化妆品对pH值的稳定性具有更高要求，特别是用于促进表皮和真皮细胞增殖的活性多肽和细胞因子类美容化妆品，不仅需要最佳的pH值环境，而且，还需要稳定的pH条件才能更加有利于皮肤细胞生长和增殖；不仅如此，皮肤细胞生存、生长和分裂、增殖还需要一定的离子浓度和渗透压，而这些，仅采用原来所用的水相(蒸馏水)是无法具备的、也是其应用的缺陷和不足。本发明的纳米级微乳配方中的水相弃用蒸馏水而采用的0.01mol/L pH7.2磷酸盐缓冲生理盐水目前检索尚未发现有人在微乳制备时使用，利用此微乳配方及制备方法不仅为皮肤细胞生长和增殖提供了良好的微环境，而且，还为其提供了较为稳定而合适的pH条件以及优越的离子浓度和渗透压；同时，还可缓冲或中和该产品在实际应用于面部皮肤之后因为面部皮肤的pH值较低而出现整个微乳系统pH值的波动或下降，从而更加有利于皮肤组织细胞的生长和增殖以及新生细胞生理功能的充分发挥。 

发明内容

本发明针对目前相关技术及其制剂的某些缺陷和不足，发明一种用于皮肤美容保健的复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素。该组合精华素中的复合鹿茸多肽冻干粉中的鹿茸多肽不仅具有良好的天然构象、生物活性和分子量小等特点，且复合鹿茸多肽冻干粉中还具有完全匹配的鹿茸多肽活性保护性和协同增效剂；该组合精华素中的纳米级缓冲微乳不仅具有粒径小、分布均匀、速溶复合鹿茸多肽冻干粉、促进功效成分与生物活性物质渗透及透皮吸收好等优点，还具有皮肤组织细胞生长和增殖最为有利和适宜的pH值、离子浓度和渗透压等微环境。而且，复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素，其透皮吸收性更好、稳定性更好、感观良好、疗效性更好、使用更安全和方便。而且，本发明的目的还在于提供一种用于皮肤美容保健的复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素的制备方法。同时，针对上述相关技术及其制剂的某些缺陷和不足等问题，本发明提供解决这些缺陷问题的方案如下。 

本发明的设计原则 

本发明总体设计原则是：利用鹿茸多肽高效天然生物活性及其与保护剂和增效剂复合后的共济协同作用所具有的独特皮肤抗衰老、表皮修复及皮肤屏障功能重建与美容保健生物学效应和生理学功效、以及鹿茸多肽生物活性不易在液体中长久保存而制备成冻干粉等；同时，利用纳米级缓冲微乳具有对鹿茸多肽及其保护剂和增效剂的良好溶解性和包容性以及活化效应，特别是纳米级缓冲微乳作为良好经皮传递载体的促进鹿茸多肽及其保护剂和增效剂的透皮吸收作用等，发明一种用于皮肤美容保健的复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素。本发明具体设计原则是：首先设计一种能成功从新鲜鹿茸中提取分离具有天然生物活性、高效生理学作用的鹿茸多肽的工艺技术和操作方法、 并获得品质优良的小分子鹿茸多肽；再将这种具有天然生物活性、高效生理学作用及促进皮肤组织细胞增殖和相关蛋白组合成、表达与分泌的小分子鹿茸多肽与不同种类的鹿茸多肽冻干保护剂和协同增效剂按照合适的比例进行复合配制并制备出复合鹿茸多肽冻干粉，使之具有更长作用效应、更好协同效果和更久保存期等；然后，设计并配制能与该复合鹿茸多肽冻干粉完全匹配、相溶、且具有促进鹿茸多肽及其保护增效剂透皮吸收的纳米级缓冲微乳，并将它作为复合鹿茸多肽冻干粉的溶媒及经皮传递与透皮吸收载体；最后，试制并确定复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳最佳比例、并配制出具有皮肤抗衰老与美容保健作用的组合精华素。使本发明的这种用于皮肤美容保健的复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素，在未混合前既能长久保留鹿茸多肽的天然构象及分子结构，又能持续发挥鹿茸多肽的高度生物活性和生理功能，还解决了鹿茸多肽在液体中长期保存易于分解或降解并不断失去其生物活性等问题；同时，使纳米级缓冲微乳既保留了美容精华素所具有的使用方便和舒适等特点和优势，又具有高效经皮传递载体和促进透皮吸收的功能，还营造和提供了有利于皮肤组织细胞生长、发育、增殖和代谢最佳的细胞微环境，即合适的营养条件、生长因子、pH值、离子浓度、渗透压等，使这种复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素在实际应用中具有更好的皮肤抗衰老和美容保健效果。 

本发明的技术方案 

(一)本发明组合精华素的组方及其比例： 

1.一种用于皮肤美容保健的复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素，其特征在于它是由具有皮肤抗衰老和美容保健作用的复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳两个部分所组成，其各自原料组成的百分比分别如下： 

(1)复合鹿茸多肽冻干粉原料组成重量百分比是：鹿茸多肽：0.01～0.50；甘 露醇：0.10～1.50；甘氨酸：0.10～1.50；脯氨酸：0.10～1.50；羟脯氨酸：0.10～1.50；白蛋白：0.20～2.50。 

(2)纳米级缓冲微乳原料组成重量百分比是：pH7.2磷酸盐缓冲生理盐水(0.01mol/L)：20.0～60.0；肉豆蔻酸异丙酯：5.0～25.0；辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯：15.0～55.0；聚甘油脂肪酸酯：5.0～30.0。 

(3)复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素组成重量百分比是：复合鹿茸多肽冻干粉：0.01-10.0；纳米级缓冲微乳：90.0-99.99。 

2.一种用于皮肤美容保健的复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素，其特征是它由具有皮肤抗衰老和美容保健作用的复合鹿茸多肽冻干粉各原料组成的优选百分比与纳米级缓冲微乳各原料组成的优选百分比分别如下： 

(1)复合鹿茸多肽冻干粉原料组成的优选重量百分比是：鹿茸多肽：0.02；甘露醇：0.50；甘氨酸：0.50；脯氨酸：0.50；羟脯氨酸：0.50；白蛋白：0.98。 

(2)纳米级缓冲微乳原料组成的优选重量百分比：pH7.2磷酸盐缓冲生理盐水(0.01mol/L)：36.0；肉豆蔻酸异丙酯：14.0；辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯：37.5；聚甘油脂肪酸酯：12.5。 

(3)复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素组成的重量百分比：复合鹿茸多肽冻干粉：3.0；纳米级缓冲微乳：97.0。 

3.一种用于皮肤美容保健的复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素，其特征在于它们是由3％的复合鹿茸多肽冻干粉和97％的纳米级缓冲微乳所组成。3％的复合鹿茸多肽冻干粉是由鹿茸多肽、甘露醇、甘氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸和白蛋白所组成；而97％的复合鹿茸多肽冻干粉溶媒-纳米级缓冲微乳则是由：水相(0.01mol/LpH7.2磷酸盐缓冲生理盐水)、油相(肉豆蔻酸异丙酯)、表面活性剂(辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯)和助表面活性剂(聚甘油脂肪酸酯)所组成。 

(二)本发明组合精华素制备技术及操作方法： 

1、复合鹿茸多肽冻干粉的制备技术及操作方法： 

(1)准确称取刚刚从雄性梅花鹿割据下来的含血新鲜鹿茸，并将其切成小块后，直接放入高速电动匀浆器的容器之中。 

(2)配制pH4.0醋酸-醋酸钠(HAc-NaAc)缓冲溶液作为新鲜鹿茸酸解匀浆液；然后，按照新鲜鹿茸10倍的比例将事先预冷的该酸解匀浆液添加到内有新鲜鹿茸小块的高速电动匀浆器之中，并立即进行酸解匀浆。 

(3)收集并合并上述新鲜鹿茸酸解匀浆液，立即放置于高速冷冻离心机中高速离心，留取高速离心后的上层清液(上清液)，并用量筒计量其体积。 

(4)将此上清液用粗滤器进行过滤后，再用超滤器和分子量为10万道尔顿的聚砜中空纤维超滤膜进行超滤；小心收集分子量≤10万道尔顿的全部透过液(首次超滤透过液)，并计量体积(ml)。 

(5)将分子量≤10万道尔顿的全部透过液(首次超滤透过液)用超滤器和分子量为1万道尔顿的聚砜中空纤维超滤膜再次进行超滤；小心收集分子量≤1万道尔顿的全部透过液(二次超滤透过液)，并计量体积(ml)。 

(6)将分子量≤1万道尔顿的全部透过液(二次超滤透过液)用纳滤器和分子量为300道尔顿的纳滤膜对上述体积过大的透过液进行浓缩，可得到被纳滤膜截留的浓缩液(三次纳滤截留液)，其中含有分子量在300-10000道尔顿之间的、与皮肤美容和抗衰老相关的鹿茸多肽及细胞因子。且经过该纳滤膜后，可除去皮肤美容禁用的性激素和皮质类固醇激素，如睾酮素(分子量在288.42)、皮质醇(分子量在362.46)、雌醇(分子量在270)、雌二醇(分子量在272.38)、雌三醇(分子量在288)、黄体酮(分子量在314.47)等。 

(7)检测并调整纳滤膜截留液中鹿茸多肽含量，使其达到2mg/ml后，再取该调整液100ml(鹿茸多肽总含量0.20g)，分别加入甘露醇5.0g、甘氨酸5.0g、 脯氨酸5.0g、羟脯氨酸5.0g、白蛋白9.8g，充分混合均匀。 

(8)将上述含鹿茸多肽浓缩液及其保护剂和增效剂的鹿茸多肽复合液经0.45μm滤菌器超滤后分装至规格为10ml的西林瓶中，每支西林瓶中加入该复合液1.0ml，如此可分装100支西林瓶中；然后，按照冷冻干燥的规范化程序，放置到冷冻干燥机中进行冷冻干燥，即可得到每个西林瓶中含鹿茸多肽2mg、甘露醇50mg、甘氨酸50mg、脯氨酸50mg、羟脯氨酸50mg、白蛋白98mg的复合鹿茸多肽冻干粉，加盖后，立即进行压盖密封，并于-20℃低温冰箱保存备用。 

2、纳米级缓冲微乳的制备： 

(1)在室温条件下，首先按照辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯∶聚甘油脂肪酸酯＝3∶1的比例，准确吸取辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯375ml和聚甘油脂肪酸酯125ml，并放置在同一个洁净的1000ml容器之中；然后，再用JB-3A型定时恒温磁力搅拌器进行充分搅拌，转速200rpm/min，连续10min，使之完全混匀为辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯与聚甘油脂肪酸酯的混合液500ml。 

(2)分别量取360ml pH7.2磷酸盐缓冲生理盐水(0.01mol/L)和140ml肉豆蔻酸异丙酯，分别加至500ml辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯与聚甘油脂肪酸酯混合液中；用定时恒温磁力搅拌器进行充分搅拌，转速200rpm/min，连续30min，即可得到液体总量为1000ml的无色透明的纳米级缓冲微乳。 

(3)将此纳米级缓冲微乳分别分装至规格为10ml的无色透明的西林瓶中，每个西林瓶中加入该液10ml，如此可分装到100支西林瓶中；加盖后，立即进行压盖密封，并置于阴凉、干燥、通风处保存备用。这样，装有纳米级缓冲微乳的西林瓶数量与含有复合鹿茸多肽冻干粉的西林瓶的数量相同。 

(4)此时，该纳米级缓冲微乳原料组成的优选重量百分比正好是：pH7.2磷酸盐缓冲生理盐水(0.01mol/L)36.0、肉豆蔻酸异丙酯14.0；辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯37.5、聚甘油脂肪酸酯12.5。 

3、复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素的制备与用法： 

(1)复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素的制备：各取1支装有复合鹿茸多肽冻干粉和纳米级缓冲微乳的西林瓶、并开启瓶盖。立即将纳米级缓冲微乳倒入至复合鹿茸多肽冻干粉中，将其反复颠倒轻轻混匀3min，直到复合鹿茸多肽冻干粉完全被溶解为止；再用无色透明滴瓶上的滴管将此完全溶解液全部转移到带滴管的无色透明滴瓶中混匀、加盖，即成为10ml复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素，可直接将其进行皮肤或面部外用。由于每支有复合鹿茸多肽冻干粉的西林瓶中含鹿茸多肽2mg、甘露醇50mg、甘氨酸50mg、脯氨酸50mg、羟脯氨酸50mg、白蛋白98mg，而每支冻干粉需要添加10ml纳米级缓冲微乳后才可配制成本发明组合精华素，亦即每10ml组合精华素中含有鹿茸多肽2mg、甘露醇50mg、甘氨酸50mg、脯氨酸50mg、羟脯氨酸50mg、白蛋白98mg。如以配制100ml组合精华素计算，即将10ml组合精华素中各成分相应扩大10倍，则每100ml组合精华素中复合鹿茸多肽冻干粉中各物质的百分比含量正好是：鹿茸多肽：0.02；甘露醇：0.50；甘氨酸：0.50；脯氨酸：0.50；羟脯氨酸：0.50；白蛋白：0.98。而复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素组成的重量百分比也正好是：复合鹿茸多肽冻干粉3.0、纳米级缓冲微乳97.0。 

(2)复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素的使用方法：正式使用前，先按照医学美容规范化要求去除面部皮肤老化的角质(仅在首次使用时)；以后使用时，则按照常规洁面法清洁面部皮肤；待皮肤完全干燥后，即可取本发明组合精华素10-20滴于手掌之中并使其均匀分散；然后，以此轻轻涂擦或拍打面部，直至其基本擦干和吸收干净即可；如皮肤仍然干燥，可按此法再重复一次；每天使用2-3次，连续使用30天为一个使用周期。如某些面部老化较为明显或严重者，可按照上述用法连续使用3个周期、直至获得明显效果为止。 

本发明的创新点和有益效果

1、目前鹿茸多肽作为主要功效成分多用于口服以提高机体免疫功能等用途，也有将鹿茸多肽作为注射液用于骨损伤修复及促进成骨细胞增殖等用途，但将鹿茸多肽作为主要功效成用于配制护肤化妆品及美容保健品和皮肤抗衰老产品目前国内外尚未见报道。本发明采用复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳合理应用和优势互补结合模式现用现配组合精华素、并将其直接用于营养护肤、表皮细胞增殖及活化、以及抗皱、祛斑、激光、磨削或果酸去死皮(无细胞结构的老化角质层)过度等引起的表皮损伤和皮肤角质层剥脱后修复、表皮屏障功能重建等皮肤美容保健和皮肤抗衰老领域此乃首次，而且在其组成体系及组方成分与比例设计、以及其制备方法和应用模式等方面具有创新性。或者说，目前国内外用于皮肤抗衰老和美容保健的所有精华素中尚未见以鹿茸多肽作为主要功效成分配制的产品，更无将复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳按照特定组方和比例现用现配的组合精华素。 

2、目前制备和市售的鹿茸多肽多及其相关产品主要来源于传统工艺及酸醇法从鹿茸中提取分离的粗品鹿茸多肽，其中不仅含有较多不溶性杂质和美容化妆品产品中明令禁止添加的类固醇皮质激素和性激素(包括雌二醇、雌三醇、黄体酮、睾酮素、脱氢表雄酮、皮质醇等)，而且，这些鹿茸多肽的天然构象和分子结构及生物活性等在提取分离时均受到不同程度影响、甚至出现明显改变，限制和影响了其应用范围和使用效果。但是，采用本发明制备的复合鹿茸多肽不仅鹿茸多肽含量高、分子量较小，而且，含有多种与皮肤抗衰老和美容保健相关的细胞生长因子(如表皮细胞生长因子、成纤维细胞生长因子、转化因子、胰岛素样生长因子)等具有天然生物活性的增效协同成分，尤其是采用本发明制备方法中采用分子量300道尔顿的纳滤膜进行超滤后，不仅起到了对鹿茸多 肽浓度的调控作用，且去除了新鲜鹿茸中所固有的类固醇皮质激素和性激素。 

3、本发明制备方法提取鹿茸多肽采用的原料是含血新鲜鹿茸，而传统方法及酸醇法提取鹿茸多肽则是采用经过大量自来水冲洗和蒸馏水漂洗的不含血鹿茸。鹿茸血本身就来源稀少、非常稀缺和珍贵、且含有大量丰富的与皮肤美容保健和延缓皮肤衰老相关的生物活性物质。本发明所用含血鹿茸不仅可得鹿茸中更加优质的鹿茸多肽，而且，还同时可得鹿茸血中包括鹿茸多肽在内的生物活性物质；更重要的是，直接采用刚从雄性梅花鹿割据下来的新鲜鹿茸提取鹿茸多肽，还可大大简化提取工艺，提高工作效率，节省制备时间，提高多肽资源利用，减轻环境污染，降低水源浪费，减少生产成本等。 

4、本发明制备方法提取鹿茸多肽所用醋酸-醋酸钠缓冲系统的pH值较传统酸醇法pH3.0-3.5的范围提高到pH3.8-4.0范围，使多肽生成条件更加温和，大分子水解或降解反应更加合理，从而，既可提高鹿茸多肽得率，又能获得更多优质鹿茸多肽，还能更好保持其天然构象和生物活性，而且，还能保留其中更多细胞生长因子等与皮肤美容保健和延缓皮肤衰老相关生物活性物质。 

5、本发明制备方法提取鹿茸多肽时彻底摒弃了传统酸醇法中添加高纯度和高浓度乙醇等污染环境、又不安全、还可使部分多肽变性的化学提取分离法，而改为通过不同分子量超滤膜等物理分离法，这些创新不仅可得到更高得率的鹿茸多肽，且能更好保持其天然构象和生物活性，而且还能保留其中更多细胞生长因子等与皮肤美容保健和延缓皮肤衰老相关生物活性物质。 

6、作为天然生物制剂在皮肤抗衰老和美容保健之中应用时，主要功效成分鹿茸多肽不仅需要较长时间保留其原有分子结构及其天然生物活性，而且，还需要复配其它保护剂和增效剂及其共济协同剂，以增强和提高其生物学作用和生理学功能的近期和远期效果。本发明的复合鹿茸多肽冻干粉正是按皮肤抗衰老和美容保健作用效果合理设计了相应的保护剂和增效剂及其共济协同成分， 而复合鹿茸多肽冻干粉中的整体配方与组合及其比例也与目前相关产品不同。 

7、本发明中复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳均适合于产业化、也易于大规模批量生产。按照本发明实施，相关领域的技术人员很容易实现。因此，有利于该发明的普及和推广应用。 

8、复合鹿茸多肽冻干粉为本发明重要功效成分和生物活性物质，将其设计为固态形式，不仅易于包装和运输，也不容易破碎和泄漏，还不容易受到污染、病原性微生物也难以滋生和繁殖；而且，复合鹿茸多肽冻干粉这种固态形式极易保存、低温和常温均可，大大延长该产品的保存期和使用期。同时，鹿茸多肽等功效成分和生物活性物质在固态时也不易分解或降解。因此，复合鹿茸多肽冻干粉这种固态形式既能够保留其功效成分的生物活性，又能够保持其生物学作用和生理学功能，且使其作用更好、效果更明显。 

9、复合鹿茸多肽冻干粉中除了鹿茸多肽之外，还有多种细胞生长因子等，以及保护、活化、协同和增效其生物学作用和生理学功能的辅佐成分，使生物活性更高、组成成分更全、生物利用度更好、生物学效应更强，从而，更加有利于共济协同和联合增效作用的发挥，也更加有利于多方位、多层次、多靶点的发挥皮肤抗衰老和美容保健作用。 

10、复合鹿茸多肽冻干粉作为本发明最重要的功效成分、以及其相应的保护剂和增效剂及其共济协同成分如无匹配、合适、稳定的溶媒系统包容和活化，将很难达到预期之目的、也很难最大限度发挥其高效生物学效应和最佳生理学作用。本发明的纳米级缓冲微乳不仅具有能快速溶解和良好保护鹿茸多肽天然生物活性的特点和实效，而且，这种纳米级缓冲微乳既能为原位皮肤组织细胞和新生细胞的生存、生长和增殖分化提供稳定和良好的生化微环境，而且，还能最大限度地促进复合鹿茸多肽及其保护剂、增效剂和共济协同成分不断渗透和透皮吸收，使本发明最重要的功效成分复合鹿茸多肽以及其相应保护剂、增 效剂和共济协同成分最大限度发挥其高效生物学效应和最佳生理学作用。 

11、复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素采用现用现配的方式，也是有别于常规美容精华素的不同之处。按照本发明实施，既能够保持组合精华素的品质，又能够防止鹿茸多肽等生物活性成分因在精华素基质及其溶媒中的水解或降解而失去其生物活性。特别是，采用纳米级缓冲微乳作为精华素基质及溶媒，能使复合鹿茸多肽冻干粉中各个成分更容易溶解和分散；而且，采用纳米级缓冲微乳作为精华素基质及溶媒所配制的组合精华素，颗粒微小、分布均匀、使用更加舒适和宜人；同时，采用纳米级缓冲微乳作为精华素基质及溶媒所配制的组合精华素，能携带复合鹿茸多肽冻干粉中更多生物活性物质，并有效促进这些生物活性物质和功效成分透皮吸收，使其生物利用度更好、使鹿茸多肽更加稳定，生物学作用和功能更强。 

12、本发明的纳米级微乳配方中的水相弃用蒸馏水而采用的0.01mol/LpH7.2磷酸盐缓冲生理盐水目前检索尚未发现有人在微乳制备时使用，也未见在美容精华素中直接应用。利用该磷酸盐缓冲生理盐水进行微乳配方及制备方法，不仅为皮肤细胞生长和增殖提供了良好的微环境，而且，还为其提供了较为稳定而合适的pH条件以及优越的离子浓度和渗透压；同时，还可缓冲或中和该产品在实际应用于面部皮肤之后因为面部皮肤的pH值较低而出现整个微乳系统pH值的波动或下降，从而更加有利于皮肤组织细胞的生长和增殖以及新生细胞生理功能的充分发挥。 

附图说明

图1.复合鹿茸多肽冻干粉的制备工艺流程及技术路线图。 

图2.纳米级缓冲微乳的制备工艺流程及技术路线图。 

图3.组合精华素的制备工艺流程及技术路线图。 

图4.实验例2中给药侧与对照侧含水量的对比示意图。 

图5.实验例3中自愿者自评与研究者对使用本发明产品后不同时间皮肤水分情况评分对比示意图。 

图6.实验例3中自愿者自评与研究者对使用本发明产品后不同时间皮肤弹性情况评分对比示意图。 

图7.实验例3中自愿者自评与研究者对使用本发明产品后不同时间皮肤肤色情况评分对比示意图。 

图8.实验例3中自愿者自评与研究者对使用本发明产品后不同时间皮肤细纹情况评分对比示意图。 

具体实施方式

实施举例1：复合鹿茸多肽冻干粉的制备： 

(1)准确称取刚从活体梅花鹿割据下来的含血新鲜鹿茸100g，使用锋利的菜刀或钢锯将其切成大小约为0.5cm³左右的小块，置于4℃冰箱中保存备用。 

(2)分别用已洁净干燥和消毒过的容量瓶配制0.2mol/L的醋酸钠溶液和0.2mol/L的醋酸溶液；然后，分别准确量取醋酸钠溶液80ml和醋酸溶液920ml，并置于同一容器中进行混合，调整该溶液pH值至4.0，再用蒸馏水定容至1000ml，使之成为pH4.0的醋酸-醋酸钠(HAc-NaAc)缓冲溶液，立即盖好容量瓶塞，并马上放置于4℃冰箱之中进行预冷备用。 

(3)立即将上述预冷的含血新鲜鹿茸小块全部放置于FSH-II型高速电动匀浆器的容器之中，并将已配制并预冷好的pH4.0的醋酸-醋酸钠(HAc-NaAc)缓冲溶液作为新鲜鹿茸酸解匀浆液；然后按新鲜鹿茸10倍的比例将上述1000ml预冷醋酸-醋酸钠(HAc-NaAc)缓冲溶液分两次添加到内有含血新鲜鹿茸小块的 高速电动匀浆器的容器之中，每次启动高速电动匀浆器20min进行酸解匀浆。 

(3)分次收集并合并鹿茸酸解匀浆液，并立即置于高速冷冻离心机中高速离心。高速冷冻离心机的离心温度为4℃，转速为8500rpm/min，离心时间20min。 

(4)离心完成后，留取离心后的上层清液(上清液)，并用量筒准确计量其体积。然后，将此上清液用超滤装置中连接的粗滤器先进行过滤后，再经过该超滤装置中分子量为10万道尔顿的聚砜中空纤维超滤膜进行首次超滤；小心收集分子量≤10万道尔顿的全部透过液(首次超滤透过液)，并计量体积(ml)。同时，弃除分子量≥10万道尔顿的截留液用于本发明之外的其它用途。 

(5)将上述分子量≤10万道尔顿的全部透过液(首次超滤透过液)再用超滤器和分子量为1万道尔顿的聚砜中空纤维超滤膜进行第二次超滤；小心收集分子量≤1万道尔顿的全部透过液(二次超滤透过液)，并计量体积(ml)。同时，弃除分子量≤10万道尔顿和≥1万道尔顿的截留液用于本发明之外的其它用途。 

(6)将收集分子量≤1万道尔顿的全部透过液(二次超滤透过液)再用纳滤器和分子量为300道尔顿的纳滤膜对上述体积过大的透过液进行浓缩，可得到被纳滤膜截留的浓缩液(三次纳滤截留液)，其中含有分子量在300-10000道尔顿之间的、与皮肤美容和抗衰老相关的鹿茸多肽及细胞因子。研究发现，从新鲜鹿茸中分离提取得到的分子量在10000道尔顿及其以下的蛋白质肽类物质中含有多种细胞生长因子，如胰岛素样生长因子、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、神经生长因子类物质、转化生长因子等；且经过该纳滤膜后，可除去皮肤美容禁用的性激素和皮质类固醇激素，如睾酮素(分子量在288.42)、皮质醇(分子量在362.46)、雌醇(分子量在270)、雌二醇(分子量在272.38)、雌三醇(分子量在288)、黄体酮(分子量在314.47)等。 

(7)检测经过纳滤器和300道尔顿纳滤膜截留液中鹿茸多肽含量，然后，通过浓缩或稀释的方式调整纳滤膜截留液中鹿茸多肽含量，使其达到2mg/ml。 

(8)准确吸取经过调整为2mg/ml的鹿茸多肽液100ml(鹿茸多肽总含量0.20g)；然后，各准确称取甘露醇5.0g、甘氨酸5.0g、脯氨酸5.0g、羟脯氨酸5.0g、白蛋白9.8g，分别将它们加入到100ml(鹿茸多肽总含量0.20g)鹿茸多肽液之中，最后用JB-3A型定时恒温磁力搅拌器进行充分混匀，转速200转/分，连续10-20min，直到其中的固形物完全被溶解为止。 

(9)将上述含有鹿茸多肽浓缩液及其保护剂和增效剂的复合液，经过规格为0.45μm滤菌膜进行超滤除菌后即可得到无菌鹿茸多肽复合液，立即按照无菌操作要求在超净工作台中将其分别分装至已消毒过的规格为10ml西林瓶之中。每支西林瓶中加入1.0ml，如此可分装100支西林瓶中；然后，再按照冷冻干燥的规范化程序，放置到冷冻干燥机中进行冷冻干燥；迅速加盖，并立即进行压盖密封，即可得到每个西林瓶中含鹿茸多肽2mg、甘露醇50mg、甘氨酸50mg、脯氨酸50mg、羟脯氨酸50mg、白蛋白98mg的复合鹿茸多肽冻干粉；然后，将其迅速置于-20℃冰箱之中冷冻保存备用。 

实施举例2：纳米级缓冲微乳的制备： 

(1)将肉豆蔻酸异丙酯(IPM)作为油相，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯(S)作为表面活性剂，聚甘油脂肪酸酯(C)为助表面活性剂，pH7.2磷酸盐缓冲生理盐水(0.01mol/L)作为水相。室温下将IPM与水相分别以9.8∶0.2、9∶1、8∶2、7∶3.....2∶8、1∶9、0.2∶9.8的比例混合，设定表面活性剂与助表面活性剂的质量比(S/C)即Km值分别为1、2、3、4并配制S/C滴定液，将配制的滴定液用来滴定IPM与水相组成二元液。滴定过程中，当二元液变为澄清时，通过肉眼观察有无乳光产生并结合Zeta粒径测定判断是否形成微乳，记录形成微乳时S/C滴定液的消耗量并计算出油相，水相，表面活性剂和助表面活性剂各成份在微乳体系中的百分比，通过软件计算分析即可知道形成微乳时各成分的比值。结果显 示Km＝3时，微乳区域最大，同时为了降低表明活性剂的用量等综合考虑，因此在Km＝3时我们选择纳米级缓冲微乳各成分比例为pH7.2磷酸盐缓冲生理盐水(0.01mol/L)∶肉豆蔻酸异丙酯(IPM)∶(S/C)为36％∶14％∶50％。 

(2)在无菌间之中，首先按照辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯∶聚甘油脂肪酸酯＝3∶1的比例，分别用已洁净、干燥、消毒过的量筒准确量取辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯375ml和聚甘油脂肪酸酯125ml；之后，在室温中，将它们再倒入到同一个洁净、干燥、消毒过的1000ml容器之中；然后，再用JB-3A型定时恒温磁力搅拌器进行充分搅拌，转速200转/分，连续10-20min，使之充分搅拌、完全混匀为辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯与聚甘油脂肪酸酯的混合液500ml。 

(3)分别量取360ml pH7.2磷酸盐缓冲生理盐水(0.01mol/L)和140ml肉豆蔻酸异丙酯，并将它们分别加到上述500ml辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯与聚甘油脂肪酸酯的混合液中；然后用JB-3A型定时恒温磁力搅拌器充分搅拌，转速200转/分，连续30min，即可得到液体总量为1000ml无色透明的纳米级缓冲微乳。 

(4)将此纳米级缓冲微乳经过规格为0.45μm滤菌膜进行超滤除菌后，立即按照无菌操作要求在超净工作台中将其分别分装至已消毒过的规格为10ml无色透明的西林瓶之中。每个西林瓶中加入该液10ml，如此分装可得到100支西林瓶装的无菌纳米级缓冲微乳；立即加盖，迅速进行压盖密封，并置于阴凉、干燥、通风、避光处保存备用。这样，装有纳米级缓冲微乳的西林瓶数量与含有复合鹿茸多肽冻干粉的西林瓶的数量相同。 

(5)而且，该纳米级缓冲微乳原料组成的优选重量百分比正好是：pH7.2磷酸盐缓冲生理盐水(0.01mol/L)36.0、肉豆蔻酸异丙酯14.0；辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯37.5、聚甘油脂肪酸酯12.5。 

实施举例3：组合精华素的制备与用法： 

(1)复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素的制备：各取1支装有复合鹿茸多肽冻干粉和纳米级缓冲微乳的西林瓶、并开启瓶盖。直接将纳米级缓冲微乳倒入至复合鹿茸多肽冻干粉中，加盖反复颠倒混匀，直到复合鹿茸多肽冻干粉完全溶解为止；再用无色透明滴瓶上的滴管将此溶解液全部转移到带滴管的无色透明滴瓶中混匀、加盖，即成为10毫升复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素。由于每支有复合鹿茸多肽冻干粉的西林瓶中含鹿茸多肽2mg、甘露醇50mg、甘氨酸50mg、脯氨酸50mg、羟脯氨酸50mg、白蛋白98mg，而每支冻干粉需要添加10ml纳米级缓冲微乳后才可配制成本发明组合精华素，亦即每10毫升组合精华素中含有鹿茸多肽2mg、甘露醇50mg、甘氨酸50mg、脯氨酸50mg、羟脯氨酸50mg、白蛋白98mg。如以配制100ml组合精华素计算，即将10ml组合精华素中各成分相应扩大10倍，则每100ml组合精华素中复合鹿茸多肽冻干粉中各物质的百分比含量正好是：鹿茸多肽：0.02；甘露醇：0.50；甘氨酸：0.50；脯氨酸：0.50；羟脯氨酸：0.50；白蛋白：0.98。而复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素组成的百分比(W/V)也正好是：复合鹿茸多肽冻干粉3.0、纳米级缓冲微乳97.0。 

(2)复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素的使用方法：正式使用前，先按照医学美容规范化要求去除面部皮肤老化的角质(仅在首次使用时)；以后使用时，则按照常规洁面法清洁面部皮肤；待皮肤完全干燥后，即可取本发明组合精华素10-20滴于手掌之中并使其均匀分散；然后，以此轻轻涂擦或拍打面部，直至其基本擦干和吸收干净即可；如皮肤仍然干燥，可按此法再重复一次；每天使用2-3次，连续使用30天为一个使用周期。如某些面部老化较为明显或严重者，可按照上述用法连续使用3个周期、直至获得明显效果为止。 

下面通过实验例进一步说明上述制备的本发明组合精华素的的有益效果。 

实验例1：鹿茸多肽因子组合精华素的透皮渗透率实验。 

本实验主要研究鹿茸多肽因子组合精华素(复合鹿茸多肽冻干粉与纳米级缓冲微乳组合精华素)与单纯复合鹿茸多肽冻干粉(用pH7.2磷酸盐缓冲生理盐水(0.01mol/L)稀释)通过Franz体外透皮扩散仪对这两个对象的透皮滤实验进行比较。结果显示鹿茸多肽因子组合精华素比单纯用磷酸盐缓冲生理盐水溶解的复合鹿茸多肽冻干粉单位面积累积透皮吸收量高，说明了采用纳米级缓冲微乳作为精华素基质及溶媒所配制的组合精华素，能更有效促进这些生物活性物质和功效成分透皮吸收。 

实验例2：鹿茸多肽因子组合精华素的皮肤修复效果： 

健康大鼠6只，雌雄各半，在大鼠背部皮肤备皮24h后，用50％甘醇酸在脱毛区2cm×2cm范围轻轻反复涂抹10分钟，用棉球吸除多余液体，即为皮肤角质剥脱损伤模型。然后在大鼠皮肤损伤处一侧涂抹鹿茸多肽因子组合精华素，另一侧涂抹生理盐水，每天涂抹两次，连续15天，在实验过程中观察动物皮肤以及动物整体，在使用后是否会出现刺激性和不良反应，并于15天时检测损伤皮肤的含水量。 

实验结果显示皮肤损伤后涂抹鹿茸多肽能明显改善大鼠剥脱损伤的皮肤，本实验涂抹15天后，给药侧伤痕明显少于对照侧，且检测出给药侧含水量明显高于对照侧(如图4)，两组差异有统计学意义(P＜0.05)。 

实验例3：鹿茸多肽因子组合精华素的临床试验： 

随机招募符合入选标准和排除标准的健康志愿受试者30例健康中老年志愿者，均为女性，年龄范围为40～57岁，平均年龄(48.12±5.45)岁，职业为医 护人员26人、普通工人4人。按照美容医学试验及临床观察设计，每天面部涂搽两次，每次使用10滴(大约0.5ml左右)，连续不间断使用天然鹿茸活性多肽因子冻干粉与活化剂(液)配制的组合精华素，使用周期为4周。并且，在美容医学及临床试验前、使用过程中、使用后的4周内，每周进行随访、并采用数码照相拍照，然后，自愿者自己和研究者再应用相关评价量表和photoshop cs5软件进行临床疗效观察和客观评价。量表按1～4分进行评分。其中，1为使用后皮肤状况最好，4为使用后皮肤状况最差。 

结果：如图天然鹿茸活性多肽因子冻干粉组合精华素对中老年健康志愿受试者面部皮肤水分、弹性、肤色、细纹等有明显改善(如图5～8)。图5～8中＊表示与试验前相比，评分均值差异有统计学意义(P＜0.05)，＊＊表示与试验前相比评分均值有显著性差异(P＜0.01)。 

本发明所述的实施举例仅仅是对本发明的优选实施方式所进行的具体描述，并非对本发明构思和范围进行限定，在不脱离本发明设计思想的前提下，本领域中技术人员对本发明的技术方案做出的各种变型和改进，均应落入本发明的保护范围，本发明请求保护的技术内容，已经全部记载在权利要求书中。