用于改善/预防类固醇治疗中的不利副作用的组合物

摘要

公开了用于改善/预防类固醇治疗中可能发生的不利副作用的组合物，或用于抑制肌萎缩相关基因的组合物，所述组合物包含异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸作为活性成分。组合物可改善或预防在类固醇治疗中可能发生的不利副作用，例如肌萎缩、肌痛、关节痛、葡萄糖耐量降低、骨代谢减少、免疫性受损、食欲缺乏、体重减轻和易疲劳性，且也可预防与各种疾病伴随的肌萎缩。组合物也可预防与肌萎缩相关基因增强的表达相关的肌萎缩，所述增强的表达由糖皮质激素过量、肾衰竭状况等诱导。因此，组合物对于改善患者的QOL是有效的。

说明书

本申请是国际申请日为2007年12月12日、国际申请号为 PCT/JP2007/073954、进入国家阶段的申请号为200780051135.9、发明名 称为“用于改善/预防类固醇治疗中的不利副作用的组合物”的PCT申 请的分案申请。

技术领域

本发明涉及用于改善或抑制类固醇治疗中的副作用的组合物、用于 抑制肌萎缩相关基因表达的组合物，以及组合物和类固醇药物的组合使 用。更具体而言，本发明涉及支链氨基酸的新用途。

背景技术

类固醇治疗中的副作用的对症疗法目前包括(1)感染：抗细菌剂 的施用，(2)糖尿病：胰岛素和口服抗糖尿病药的施用，(3)胃肠道 症状：抗酸剂和H2阻滞剂的施用，(4)骨质疏松症：维生素D和钙的 施用，(5)青光眼：眼降血压剂的施用，和(6)精神障碍和抑郁状态： 抗精神病药的施用等。然而，改善或抑制肌病——严重副作用之一的唯 一方法是类固醇的剂量减少。此外，当多重副作用出现时，应采取关于 每种症状的对症药物以抑制症状。此外，其中类固醇副作用受其他类固 醇抑制的类固醇依赖等也造成问题。

尽管已提出在慢性类风湿性关节炎的治疗中通过支链氨基酸的类 固醇剂量减少的可能性(专利文件1)，但其未描述支链氨基酸自身抑 制类固醇药物的副作用。对于类固醇药物，即使剂量可以减少，少量类 固醇的长期使用也被认为引起与由其高剂量引起的那些相同水平的副 作用。因此，认为仅通过剂量减少来减轻类固醇药物的副作用是困难的。

相反，由于害怕副作用而使用少量类固醇药物可能无法提供足够的 治疗作用。它的具体例子是使用大量类固醇药物的脉冲式疗法(pulse therapy)。这种方法需要大量类固醇药物，以快速抑制症状，例如致命 症状、严重器官病症、活动性疾病期中的症状等，其中判断不当的剂量 减少涉及危险。换言之，类固醇的剂量减少对于患者可能是危及生命的。 因此，存在关于能够抑制类固醇药物的副作用而不需要剂量减少的方法 的需要。

类固醇治疗的已知副作用之一是肌萎缩作用。近期报告已证明此种 肌萎缩作用由atrogin-1基因和myostatin基因促进的转录表达引起，所 述促进的转录表达是由于这些基因通过转录因子Foxo的去磷酸化引起 的转录活化，所述Foxo的去磷酸化起因于Akt1(蛋白激酶B)的活性 受类固醇(糖皮质激素)的抑制(非专利文件1-3)。atrogin-1基因和 MuRF-1基因是编码遍在蛋白连接酶的基因，即蛋白酶体降解诱导基因， 其也称为肌萎缩基因(Atrogene)。此外，myostatin基因属于TGFβ家 族，并且已知是关于肌肉生长的负调节物(非专利文件4)。此外，当 肌萎缩发生时，FOXO基因被报告显示促进的表达(非专利文件5和6)。 此外，KLF15和REDD1基因已知是“代谢·营养调节相关基因”，其涉及 被认为与肌萎缩同时或随同肌萎缩一起发生的代谢或营养不良(非专利 文件7和8)。

存在其中病理学由除类固醇的副作用外增加的肌萎缩基因表达加 重(肌萎缩和癌症恶病质)的已知的一些疾病(非专利文件9)。此种 疾病的例子包括糖尿病、癌症、肾衰竭、心力衰竭、AIDS、肝硬化、各 种炎性疾病、营养不良疾病等。肌萎缩是降低患者的QOL的严重问题。 因此，存在关于能够抑制由类固醇药物的施用引起的肌萎缩或上述疾病 的药物的需要。

已知IGF-1(胰岛素样生长因子)/PI3K(磷酸肌醇3-激酶) /AKT/mTOR(雷帕霉素的哺乳动物靶)途径在肌萎缩基因的表达中起重 要作用。当这个途径由于一些原因被抑制时，肌萎缩基因的表达被认为 增加且引起肌萎缩(非专利文件10和11)。据报告地塞米松给大鼠的 施用减少食物摄入和体重，引起肌萎缩，并且它们由IGF-1抑制(非专 利文件12)。另一方面，据报告IGF-1抑制肌肉细胞中由地塞米松诱导 的atrogin-1和MuRF-1的表达(非专利文件10和13)。此外，显示肌 萎缩基因(atrogin-1或MuRF-1)敲除小鼠没有肌萎缩(非专利文件2)。

同时，支链氨基酸(异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸)和对肌萎缩的抑 制作用之间的关联已得到报告(非专利文件14和15)。然而，报告鉴 于对蛋白质降解率和合成率的作用讨论了肌萎缩。另一方面，一些描述 了单独的支链氨基酸仅提供了关于抑制肌萎缩特别是肌肉中的蛋白质 降解的不充足作用，并且测定其效率和作用的方法仍未解决(非专利文 件15、16、17和18)。已知支链氨基酸包括亮氨酸通过激活mTOR促 进蛋白质合成(非专利文件19)。然而，它对肌萎缩基因的表达的作用 是未知的。此外，其在成肌细胞细胞系C2C 12中的表达由于IGF-1而改 变的基因倾向于受mTOR抑制剂雷帕霉素的共同存在的反向调节，并且 已知在它们中有MuRF-1，肌萎缩基因之一(非专利文件20)。然而， 未知支链氨基酸(例如，亮氨酸等)抑制肌萎缩基因(atrogin-1和MuRF-1) 的表达，所述肌萎缩基因的表达由于诱导肌萎缩的刺激而增加。

专利文件1：WO2005/055997

非专利文件1：Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，98：14440-14445(2001)

非专利文件2：Science，294：1704-1708(2001)

非专利文件3：Nature Med.，第10卷，(6)：584-585(2004)

非专利文件4：Curr Opin Pharmacol.，7(3)：310-5(2007)

非专利文件5：J.Biol.Chem.，第279卷，(39)：4114-41123(2004)

非专利文件6：J.Biol.Chem.，第282卷，(29)：21176-21186(2007)

非专利文件7：BBRC第327卷：920-926(2005)

非专利文件8：J.Biol.Chem.，第281卷，(51)：39128-39134(2006)

非专利文件9：FASEB J.，18：39-51(2004)

非专利文件10：Molecular Cell，第14卷，395-403(2004)

非专利文件11：Cell，第117卷，399-412(2004)

非专利文件12：Endocrinology 146：1789-1797(2005)

非专利文件13：Am.J.Physiol.Endocrinol Metab.，287：E591-E601 (2004)

非专利文件14：J.Nutr.，136(1 Suppl)：234S-6S(2006)

非专利文件15：J.Nutr.，136(1 Suppl)：237S-42S(2006)

非专利文件16：J.Nutr.，136(1 Suppl)：264S-68S(2006)

非专利文件17：J.Nutr.，136(1 Suppl)：308S-13S(2006)

非专利文件18：J.Nutr.，；136(1 Suppl)：314S-18S(2006)

非专利文件19：J.Nutr.，2006 Jan；136(1 Suppl)：269S-73S

非专利文件20：J.Biol.Chem.，第280卷，No.4：2737-2744(2005)

发明内容

由本发明解决的问题

类固醇药物是用于各种症状例如胶原性疾病等的非常有效的药物 产品。然而，类固醇药物以高剂量或长时间的使用引起有时可能是致命 的严重副作用。本发明的目的是提供改善或抑制由类固醇治疗引起的副 作用的方法。

本发明的另一个目的是提供能够抑制与各种疾病的进展相关发生 且对患者减少的QOL有高度影响的肌萎缩的方法。

解决问题的方法

本发明人已在解决前述问题的尝试中进行了广泛的研究，并且发现 3种支链氨基酸异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸(在下文中也称为BCAA) 对于改善由类固醇药物的施用引起的副作用有效，所述副作用例如肌萎 缩、肌肉功能减弱、肌痛、关节痛、葡萄糖耐量降低、骨代谢减少、免 疫性受损、食欲缺乏、易疲劳性、体重减轻等，对于抑制与肌萎缩相关 基因促进的表达相关的肌萎缩有效等，这导致本发明的完成。

因此，本发明提供了下述。

[1]用于改善或抑制类固醇治疗中的副作用的组合物，其包含异亮氨 酸、亮氨酸和缬氨酸作为活性成分。

[2][1]的组合物，其中副作用是选自下述的至少一种：肌萎缩、肌 肉功能减弱、肌痛、关节痛、葡萄糖耐量降低、食欲缺乏、体重减轻、 骨代谢减少、免疫性受损和易疲劳性。

[3][2]的组合物，其中肌萎缩显示肌萎缩相关基因促进的表达。

[4]用于抑制肌萎缩相关基因表达的组合物，其包含异亮氨酸、亮氨 酸和缬氨酸作为活性成分。

[5][4]的组合物，其抑制与肌萎缩相关基因促进的表达相关的肌萎 缩。

[6][5]的组合物，其中促进的表达与糖皮质激素过量相关。

[7][5]的组合物，其中促进的表达与肾衰竭相关。

[8][3]-[7]中任何一个的组合物，其中肌萎缩相关基因是选自下述 的至少一种：atrogin-1基因、MuRF-1基因、myostatin基因、FOXO1基 因、FOXO3a基因、FOXO4基因、REDD1基因和KLF15基因。

[9][1]-[8]中任何一个的组合物，其在一次摄入中包含不少于1g 异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸。

[10][1]-[9]中任何一个的组合物，其中异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸 的重量比是1∶1.5-2.5∶0.8-1.7。

[11][1]-[10]中任何一个的组合物，其与类固醇药物组合使用。

[12][1]-[11]中任何一个的组合物，其是药物。

[13][1]-[11]中任何一个的组合物，其是食物。

[14][13]的组合物，其中所述食物是具有保健功能的食物或饮食补 充剂。

[15][14]的组合物，其中所述具有保健功能的食物是用于特定保健 的食物或具有营养功能要求的食物。

[16][13]-[15]中任何一个的组合物，其中所述食物是浓缩液态饮 食。

[17]异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸用于生产[1]-[16]中任何一个的组 合物的用途。

[18][17]的用途，其中异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的重量比是1∶1.5 -2.5∶0.8-1.7。

[19]用于改善或抑制类固醇治疗中的副作用的方法，其包括给施用 受试者施用有效量的异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸。

[20]抑制肌萎缩基因表达的方法，其包括给施用受试者施用有效量 的异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸。

[21][19]或[20]的方法，其在一次摄入中包含不少于1g异亮氨酸、 亮氨酸和缬氨酸。

[22][19]-[21]中任何一个的方法，其中异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸 的重量比是1∶1.5-2.5∶0.8-1.7。

[23]商业包装，其包含[1]-[16]中任何一个的组合物和书面物质， 所述书面物质阐述组合物可以或应该用于改善或抑制类固醇治疗中的 副作用，或抑制与肌萎缩相关基因促进的表达相关的肌萎缩。

发明效果

由本发明提供的包含3种支链氨基酸异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸作 为活性成分的组合物，用于改善一般而言由类固醇治疗引起的副作用。 具体地，本发明的组合物有效用于改善或抑制类固醇治疗的副作用，例 如肌萎缩、肌肉功能减弱、肌痛、关节痛、葡萄糖耐量降低、骨代谢减 少、免疫性受损、食欲缺乏、易疲劳性、体重减轻等。

本发明的用于抑制肌萎缩相关基因表达的组合物可以通过抑制肌 萎缩相关基因的表达而直接且有效地改善肌萎缩状态。具体地，本发明 的组合物用于预防或治疗其为类固醇治疗的副作用的肌萎缩，和与肾衰 竭相关的肌萎缩，且用于预防或治疗与各种其他疾病相关的肌萎缩，所 述各种其他疾病的特征在于Atrogin-1和MuRF-1基因增加的表达。

此外，本发明的用于抑制肌萎缩相关基因表达的组合物可以用于预 防或治疗各种慢性或急性疾病，其病理学通过由肌萎缩相关基因促进的 表达引起的肌萎缩加重。此种疾病的特征在于不希望有的体重下降，特 别是与骨骼肌萎缩相关的减少的运动能力。使用本发明的组合物，可以 预防或治疗由于减少量的肌肉而减少的运动能力。因此，可以预防患者 的衰退和卧床不起的患者，并且预期缩短住院治疗期和治疗期。

此外，因为本发明的药物包含支链氨基酸作为活性成分，所以它是 高度安全的且难以引起副作用。因此，药物用作药学产品用于治疗或预 防作为类固醇治疗的副作用的肌萎缩、和与各种其他疾病相关的肌萎 缩。此外，因为在本发明的组合物中包含的3种支链氨基酸异亮氨酸、 亮氨酸和缬氨酸具有确定的安全性，所以本发明的组合物是高度安全 的，并且不仅可以用于药学用途还可以用于食物。

附图说明

图1显示在BCAA施用组和媒介物施用组中的体重概况和在食物摄 入中的改变。

图2显示在BCAA施用组、媒介物施用组和对照(正常组)中腓肠 肌和比目鱼肌的肌肉重量的比较。

图3显示在BCAA施用组、媒介物施用组和对照(正常组)中握力 测量值的比较。斯氏t检验^*p＜0.05

图4显示在BCAA施用组、媒介物施用组和对照(正常组)中血糖 水平的比较。

图5显示在BCAA施用组、媒介物施用组和对照(正常组)中血浆 胰岛素水平的比较。

图6显示在BCAA施用组和媒介物施用组之间在恢复期(恢复；R) 的第1天和第2天时，腓肠肌和比目鱼肌的肌肉重量的比较。

图7显示在BCAA施用组和媒介物施用组之间血浆ALP水平的比 较。斯氏t检验^*p＜0.05

图8显示在大鼠中的体重概况和食物摄入的改变。

图9显示腓肠肌和比目鱼肌的肌肉重量的比较。

图10显示在atrogin-1基因、MuRF-1基因和Myostatin基因中的表 达的比较，其中每个组的值相对于作为1的对照组的一个值。

图11显示在FOXO1、FOXO3a和FOXO4基因中的表达的比较，其 中每个组的值相对于作为1的对照组的一个值。

图12显示REDD1基因的表达的比较，其中每个组的值相对于作为 1的对照组的一个值。

图13显示KLF15基因的表达的比较，其中每个组的值相对于作为 1的对照组的一个值。

图14显示在恢复期(恢复；R)的第1天和第2天时，体重和食物 摄入概况的比较。

图15显示在恢复期(恢复；R)的第1天和第2天时，腓肠肌和比 目鱼肌的肌肉重量的比较。

图16显示在恢复期(恢复；R)的第1天和第2天时，atrogin-1基 因和MuRF-1基因的表达的比较，其中每个组的值相对于作为1的对照 组的一个值。

图17显示在肾衰竭模型大鼠中atrogin-1基因和MuRF-1基因的表 达的比较，其中每个组的值相对于作为1的对照组的一个值。

具体实施方式

在本发明的类固醇治疗中用于改善或抑制副作用的组合物和用于 抑制肌萎缩相关基因表达的组合物的特征在于，在其中包含的作为活性 成分的异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸(在下文中有时一般称为本发明的组 合物)。

本发明的组合物用于改善或抑制与类固醇治疗相关的副作用等。在 本发明说明书中，“改善”包括“预防、减轻和治疗”，并且意指与类固醇 治疗相关的副作用，即“肌萎缩”、“肌肉功能减弱”、“肌痛”、“关节痛”、 “葡萄糖耐量降低”、“骨代谢减少”、“免疫性受损”、“食欲缺乏”、“体重 减轻”、“易疲劳性”等朝正常化的方向移动，并且进一步意指副作用的发 展被预先预防或抑制。

在严重情况下，由于类固醇药物的副作用，“与类固醇治疗相关的 副作用的发展”有时显著损害QOL，即使药物用于治疗疾病。在有些情 况下，它是危及生命的。在住院患者的情况下，例如，症状可能未改善 至允许出院的水平。在需要护理或照料的患者的情况下，症状可能未足 够充分地改善，以缩短护理或照料帮助的时间，这是患者的护理或照料 所必需的。然而，本发明的组合物对于2种情况都有效。

类固醇治疗的副作用的例子包括(1)感染加重、诱导和症状隐伏、 免疫性受损，(2)肾上腺皮质机能减退症，(3)葡萄糖耐量降低例如 糖尿病诱导或加重、血糖水平升高等，(4)胃肠道溃疡、胃肠出血、 胃肠穿孔、出血性胰腺炎，(5)痉挛、颅内高压，(6)精神障碍、抑 郁状态，(7)骨代谢减少例如骨质疏松症(特别地，脊柱受压骨折) 等，(8)无菌性骨头坏死(股骨、肱骨骨折)，(9)肌病(与肌萎缩 伴随的肌肉强度丧失，特别地，肌肉重量减少和近端肌肉的肌肉强度丧 失，肌肉功能减弱)、体重减轻，(10)青光眼、高眼压、后囊白内障， (11)血栓(过高血液凝固性)，(12)由于心肌梗死的心脏破裂，(13) 哮喘发作加重，(14)由于注射的过敏反应，(15)月样圆面容、水牛 背，(16)由于矿物质作用的血压升高，(17)钠-水滞留(水肿)体重 增加、低钾血症性碱中毒，(18)儿童期中的发育病症，(19)月经紊 乱，(20)精子活力和数目中的减少，(21)痤疮、多毛症、脱发、色 素沉积，(22)皮肤变薄、虚弱、皮下充血、线性紫癜、面部红斑、脂 膜炎，(23)伤口愈合病症，(24)刺激(疹)痒觉症状、呃逆，(25) 欣快、失眠、头痛、眩晕，(26)出汗障碍、过度排尿、白细胞增多， (27)脂肪肝、氮失衡，(28)GOT、GPT、ALP增加，(29)高脂血 症、高胆固醇血症、胆固醇肾病(steroidnephropathy)，(30)恶心、 呕吐、胃痛、胃灼热、腹胀感、口干燥、腹泻、食欲过盛，(31)由于 中心性浆液性脉络膜视网膜病变的视网膜病症或突眼症 (eyophthalmos)，(32)肌痛、关节痛、发烧、疲劳感，(33)由于 肌肉、皮内或皮下注射在局部组织中的萎缩、抑郁、体重减轻，(34) 血栓、静脉炎、疼痛、肿胀、在静脉内注射过程中的触痛加重，(35) 戒断综合征；全身性症状：发烧、头痛、易疲劳性、泛发性易疲劳性、 虚弱感、体克/消化器官：厌食症、食欲缺乏、恶心和呕吐、腹泻/神经 系统：头痛、焦虑、兴奋/痉挛、意识障碍、肌痛、关节痛等。本发明对 于副作用特别有效，所述副作用例如“肌萎缩”、“肌肉功能减弱”、“肌痛”、 “关节痛”、“葡萄糖耐量降低”、“骨代谢减少”、“免疫性受损”、“食欲缺 乏”、“体重减轻”、“易疲劳性”等。

类固醇治疗的靶疾病的例子包括(1)内分泌疾病：慢性肾上腺皮 质机能减退症(原发性、继发性、垂体性、医源性)、急性肾上腺皮质 机能减退症(肾上腺危象)、肾上腺生殖器综合征、亚急性甲状腺炎、 甲状腺毒症[甲状腺性(毒性)危象]、与甲状腺性疾病相关的恶性突眼 症、单一性ACTH缺乏症，(2)风湿性疾病：慢性类风湿性关节炎、 青少年类风湿性关节炎(包括Still氏病)、风湿热(包括风湿性全心炎)、 风湿性多肌病，(3)胶原性疾病：狼疮(全身性和慢性盘状红斑)、 系统性脉管炎(包括主动脉炎综合征、结节性动脉外膜炎、多动脉炎、 韦格纳肉芽肿病)、多肌炎(皮肌炎)、硬皮病，(4)肾脏病：肾病 和肾病综合征，(5)心脏病：充血性心力衰竭，(6)变应性疾病：支 气管哮喘、喘息性支气管炎(包括儿童期喘息性支气管炎)、由药物和 其他化学物质引起的变态反应或中毒(包括药疹、中毒性疹)、血清病 (7)严重感染：严重感染(与化学治疗组合)，(8)血液疾病：溶血 性贫血(伴随疑似免疫性或免疫机制)、白血病(急性白血病、慢性髓 细胞性白血病的急性母细胞危象、慢性淋巴性白血病)(包括皮肤白血 病)、粒细胞缺乏症(原发性、继发性)、紫癜(血小板减少性和非血 小板减少性)、再生障碍性贫血、由于凝血因子紊乱的出血素质，(9) 胃肠疾病：局限性肠炎、溃疡性结肠炎，(10)严重虚弱疾病：严重虚 弱疾病的一般状况的改善(包括癌症晚期、口炎性腹泻)，(11)肝病： 暴发性肝炎(包括临床严重病例)、淤胆型急性肝炎、慢性肝炎(活动 型、复发性急型、淤胆型)(局限于对一般治疗无应答和伴随肝功能中 持续的显著异常的顽固性肝病)、肝硬化(活动型、伴随顽固性腹水的 状况、伴随胆汁郁积的状况)，(12)肺病：肉瘤样病(除具有单独的 双侧肺门腺病的状况外)、弥漫性间质性肺炎(肺纤维化)(包括放射 性肺炎)，(13)结核性疾病(与抗结核药物组合)、肺结核(局限于 粟粒性结核、严重结核)、结核性脑膜炎、结核性胸膜炎、腹膜结核、 结核性心包炎，(14)神经性疾病：脑脊髓炎(包括脑炎、脊髓炎)(当 观察到颅内高压症状和其他药物提供不足够的作用时，短时间段用于原 发性脑炎)、周围神经炎(包括Guillain-Barre综合征)、肌强直、重症 肌无力、多发性硬化(包括眼脊髓炎)、小舞蹈病、面瘫、脊髓蛛网膜 炎，(15)恶性肿瘤：恶性淋巴瘤(淋巴肉瘤病、网状细胞肉瘤病 (reticulosarcomatosis)、Hodgkin氏病、皮肤网状细胞增多症、蕈样真 菌病)和相似疾病(相关疾病)、嗜酸性肉芽肿、乳腺癌的复发性转移， (16)其他医学疾病：特发性低血糖症、不明原因发烧，(17)感染： SARS等。此外，还包括类固醇治疗等，其用于抑制器官移植例如肝移 植、肾移植等过程中的排斥的目的。

用于类固醇治疗的类固醇药物的例子包括hydrocortin、可的松、泼 尼松龙、甲基泼尼松龙、去炎松、醋酸去炎松、帕拉米松、地塞米松、 倍他米松、己烷雌酚、甲巯咪唑、氟轻松、醋酸氟轻松、氟氢缩松 (fluorometholon)、倍氯美松双丙酸酯、雌三醇、双醋二氟松、戊酸二 氟米松、醋丁二氟龙等。

在本发明中，“肌萎缩相关基因”一般意指“肌萎缩基因”和“代谢· 营养调节相关基因”，其涉及被认为与肌萎缩同时或随同肌萎缩一起发 生的代谢或营养不良。

“肌萎缩基因”指与萎缩前的表达相比较，当肌肉萎缩时，在细胞中 显示不同表达的基因，并且包括显示促进的表达的基因和显示抑制的表 达的基因。优选的是显示促进的表达的基因。它的优选的具体例子包括 已知在与糖皮质激素过量相关的肌萎缩过程中显示促进的表达的遍在 蛋白连接酶，特别是atrogin-1基因、MuRF-1基因和myostatin基因。此 外，代谢·营养调节相关基因的优选例子也包括FOXO基因，例如FOXO1 基因、FOXO3a基因、FOXO4基因等，REDD1基因和KLF15基因。

在本发明中，肌萎缩的病原学并不限于糖皮质激素过量，并且诱导 肌萎缩相关基因的表达变化的任何原因都包括在病原学中。此外，糖皮 质激素过量可以为内源性的或外源性的。

在本发明中，“肌萎缩相关基因表达的抑制”意指当肌肉萎缩时，分 别减少或增加促进的或抑制的基因表达。它优选意指减少肌萎缩相关基 因的促进的表达。

本发明的组合物优选经由肌萎缩相关基因的表达抑制作用来抑制 与肌萎缩相关基因促进的表达相关的肌萎缩。

作为其促进的表达受本发明的组合物抑制的肌萎缩相关基因，上述 atrogin-1基因、MuRF-1基因、myostatin基因、FOXO1基因、FOXO3a 基因、FOXO4基因、REDD1基因、KLF15基因等是优选的，并且atrogin-1 基因、MuRF-1基因、myostatin基因等是更优选的。

atrogin-1基因、MuRF-1基因、myostatin基因、FOXO1基因、FOXO3a 基因、FOXO4基因、REDD1基因和KLF15是已知的，并且其序列公开 于NCBI数据库中。例如，在NCBI基因转录物数据库UniGene(http: //www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi？db＝unigene)中，atrogin-1基因 是其在小鼠、大鼠和人中的转录物分别可由Mm292042、Rn.72619、 Hs.403933等的IDs限定的基因，并且特别是在人中，它限定为在Online Mendelian Inheritance in Man^TM(OMIM^TM)中的^*606604F-BOX ONLY PROTEIN 32；FBXO32。

MuRF-1基因是其在小鼠、大鼠和人中的转录物可由在UniGene中 的Mm261690或Mm 331961、Rn.40636、Hs.279709等的IDs限定的基 因，并且特别是在人中，它限定为在OMIM^TM中的^*606131RING FINGER PROTEIN 28；RNF28。

Myostatin基因是其在小鼠、大鼠和人中的转录物可由在UniGene 中的Mrm.3514、Rn.44460、Hs.41565等的IDs限定的基因，并且特别是 在人中，它限定为在OMIM^TM中的^*603936 GROWTH/DIFFERENTIATION FACTOR 11；GDF11。

FOXO 1基因是其在小鼠、大鼠和人中的转录物可由在UniGene中 的Mm.29891、Mm.395558、Rn.116108、Hs.370666等的IDs限定的基 因，并且特别是在人中，它限定为在OMIM^TM中的^*136533FORKHEAD BOX O1A；FOXO1A。FOXO3a基因是其在小鼠、大鼠和人中的转录物 可由在UniGene中的Mm.296425、Rn.24593、Hs.220950等的IDs限定 的基因，并且特别是在人中，它限定为在OMIM^TM中的^*602681 FORKHEAD BOX O3A；FOXO3A。

FOXO4基因是其在小鼠、大鼠和人中的转录物可由在UniGene中 的Mm.371606、Rn.19646、Hs.584654等的IDs限定的基因，并且特别 是在人中，它限定为在OMIM^TM中的^**300033 MYELOID/LYMPHOID OR MIXED LINEAGE LEUKEMIA，TRANSLOCATED TO，7；MLLT7。 REDD1基因是其在小鼠、大鼠和人中的转录物可由在UniGene中的 Mrm.21697、Rn.9775、Hs.523012等的IDs限定的基因，并且特别是在人 中，它限定为在OMIM^TM中的^*607729REGULATED IN DEVELOPMENT AND DNA DAMAGE RESPONSES1。

KLF15基因是其在小鼠、大鼠和人中的转录物可由在UniGene中的 Mm.41389、Rn.22556、Hs.272215等的IDs限定的基因，并且特别是在 人中，它限定为在OMIM^TM中的^*606465KRUPPEL-LIKE FACTOR 15； KLF15。

在本发明中，“肌萎缩”意指其中肌肉变细和肌肉强度变弱的状况。

在一个实施方案中，“肌萎缩”和与内源性或外源性糖皮质激素过量 结合的肌萎缩基因促进的表达相关。具体地，(1)由类固醇药物施用 引起的肌萎缩的例子，其是外源性糖皮质激素过量的一般例子，包括由 作为药物产品为了减轻症状的目的施用的类固醇药物诱导的肌萎缩，所 述症状例如各种恶性肿瘤、癌症；呼吸性疾病例如肺炎、慢性阻塞性肺 病、肉瘤样病、肺纤维化等；与虚弱炎症相关的感染例如AIDS(获得 性免疫缺陷综合征)、病毒性肝炎、流感等；与感染相关的脓毒症；自 身免疫疾病例如慢性类风湿性关节炎、IBD(炎性肠病)、胶原性疾病 等；糖尿病、肾衰竭、肺衰竭、肝衰竭、心力衰竭等，(2)内源性糖 皮质激素过量的例子包括与下述相关的肌萎缩：具有由一些不明原因包 括肾上腺肿瘤引起的特有的临床症状(例如具有促进的肾上腺功能的高 氢化可的松血症(hypercortisolemia))的Cushing氏综合征，或作为由 于其他慢性炎症的生物应答的结果诱导的高氢化可的松血症等，和(3) 由于一般而言的末期症状的过度应激等，与厌食症、分解代谢过度等相 关的肌肉量减少或肌肉强度减少；由于住院治疗、运动不能、卧床不起 状态或失重飞行的肌萎缩等。

在另一个实施方案中，“肌萎缩”仅需要与肌萎缩基因促进的表达相 关，即使与糖皮质激素过量的因果联系未直接明了。具体例子包括与下 述相关的肌萎缩：各种恶性肿瘤、癌症；呼吸性疾病例如肺炎、慢性阻 塞性肺病、肉瘤样病、肺纤维化等；与虚弱炎症相关的感染例如AIDS (获得性免疫缺陷综合征)、病毒性肝炎、流感等；与感染相关的脓毒 症；自身免疫疾病例如慢性类风湿性关节炎、IBD(炎性肠病)、胶原 性疾病等；与下述病症或疾病相关的肌萎缩：例如糖尿病、肾衰竭、肺 衰竭、肝衰竭、心力衰竭等；与一般而言的末期症状等中的厌食症、分 解代谢过度等相关的肌肉量减少或肌肉强度减少；由于住院治疗、运动 不能、卧床不起状态或失重飞行的肌萎缩等。

作为与除糖皮质激素过量外的病症或疾病相关的肌萎缩，与肾衰竭 相关的肌萎缩是有效的。

在本说明书中，肌萎缩的“抑制”包括“预防肌萎缩发生，减轻或治疗” 肌萎缩，并且特别意指通过预防上述肌萎缩发生，减轻或治疗“肌萎缩” 使肌肉达到发展肌萎缩前的状态。当通过应用本发明回复到发展肌萎缩 前的状态后，肌肉过度生长时，此种情况也包含在本发明的背景中。

肌萎缩基因的表达是否得到促进可以通过本身已知的方法进行检 查。例如，可以提及包括下述的方法：通过活组织检查等收获预期表达 肌萎缩基因的细胞，优选肌细胞(例如，骨骼肌细胞、平滑肌细胞、心 肌细胞等)，通过PCR扩增atrogin-1基因或MuRF-1基因，并且检测基 因。

外源性糖皮质激素(类固醇药物)的例子包括hydrocortin、可的松、 泼尼松龙、甲基泼尼松龙、去炎松、醋酸去炎松、帕拉米松、地塞米松、 倍他米松、己烷雌酚、甲巯咪唑、氟轻松、醋酸氟轻松、氟氢缩松 (fluorometholon)、倍氯美松丙酸酯、雌三醇、双醋二氟松、戊酸二氟 米松、醋丁二氟龙等。

如上所述，已报告atrogin-1基因和MuRF-1基因激活的转录起因于 转录因子Foxo的去磷酸化，所述Foxo的去磷酸化由Akt1(蛋白激酶B) 的活性受糖皮质激素抑制引起。

在本发明中，由于除糖皮质激素过量外的病原学的“肌萎缩相关基 因促进的表达”意指，在与下述相关的肌萎缩中上述“肌萎缩相关基因” 促进的表达：各种恶性肿瘤、癌症；呼吸性疾病例如肺炎、慢性阻塞性 肺病、肉瘤样病、肺纤维化等；与虚弱炎症相关的感染例如AIDS(获得 性免疫缺陷综合征)、病毒性肝炎、流感等；与感染相关的脓毒症；自 身免疫疾病例如慢性类风湿性关节炎、IBD(炎性肠病)、胶原性疾病 等；病症或疾病例如糖尿病、肾衰竭、肺衰竭、肝衰竭、心力衰竭等； 与一般而言的末期症状等中的厌食症、分解代谢过度等相关的肌肉量减 少或肌肉强度减少；由于住院治疗、运动不能、卧床不起状态或失重飞 行的肌萎缩等。

其为本发明的组合物的活性成分的异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸，当 使用时，各自可以是L型、D型和DL型中任何一种的形式，优选L型 或DL型，更优选L型。

此外，当使用时，在本发明中的异亮氨酸、亮氨酸和/或缬氨酸各自 不仅可以是游离形式，还可以是盐形式。此种盐形式的异亮氨酸、亮氨 酸和/或缬氨酸也包含在本发明中。盐形式的例子包括与酸形成的盐(酸 加成盐)、与碱形成的盐(碱加成盐)等。优选选择药学上可接受的盐。

待加入异亮氨酸、亮氨酸和/或缬氨酸中以形成药学上可接受的酸加 成盐的酸的例子包括无机酸，例如氯化氢、溴化氢、硫酸、磷酸等；有 机酸例如乙酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、马来酸、延胡索酸、单甲基硫 酸等。

待加入异亮氨酸、亮氨酸和/或缬氨酸中以形成药学上可接受的碱加 成盐的碱的例子包括金属氢氧化物或金属碳酸盐，例如钠、钾、钙等， 或无机碱例如氨等；有机碱例如乙二胺、丙二胺、丙二胺、乙醇胺、单 烷基乙醇胺、二烷基乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺等。

在应用于人的本发明组合物中的3种支链氨基酸异亮氨酸、亮氨酸 和缬氨酸的含量对于一次摄入总共不少于0.1g、优选不少于1g。根据 易于摄入的方面，上述一次摄入量优选不超过100g、更优选不超过10g。

在本说明书中，“一次摄入量”是当本发明的组合物是药物时，一次 施用的活性成分量，以及当本发明的组合物是食物时，一次摄入的活性 成分量。特别地，在食物的情况下，待摄入的食物总量在个体中不同， 并且一般无法容易地限定组合物中的活性成分的含量。因此，推荐将该 量限定为关于活性成分的一次摄入量。用于一次摄入的此种量依赖于年 龄、体重、性别、肌萎缩严重性等而变。

本发明的组合物包含3种支链氨基酸异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸作 为活性成分。3种氨基酸以重量比的混合比一般在1∶1.5-2.5∶0.8-1.7 的范围内，特别优选1∶1.9-2.2∶1.1-1.3。在这些范围外，难以达到 有效作用和效应。

本发明的组合物也可以与类固醇药物组合使用。此处，“组合使用” 意指在类固醇治疗前，与类固醇治疗同时或在类固醇治疗后使用，包括 通过与类固醇药物掺合使用，如在下文提及的掺合物中。

对于与类固醇药物的组合使用，药物无具体限制，只要它一般用于 靶疾病，并且它的具体例子包括上文描述的类固醇药物。

本发明的组合物也用作药物、食物等，并且应用受试者包括哺乳动 物(例如，人、小鼠、大鼠、仓鼠、兔、猫、犬、牛、羊、猴等)。对 于应用于除人外的哺乳动物，本发明的组合物的摄入量可以根据动物的 体重或大小适当地进行调整。

尽管本发明的组合物作为药物的施用方法无具体限制，但可以采用 一般的施用途径例如经口施用，直肠施用，注射施用、输注等。

经口施用的剂型包括颗粒、细颗粒、撒布粉、糖衣片、片剂、栓剂、 粉末、(微型)胶囊、咀嚼剂(chewable)、糖浆、汁、液体、悬浮液、 乳剂等。作为通过注射的剂型，可以采用药物制剂的一般剂型，例如直 接静脉内注射、滴注施用、延长活性物质的释放的制剂等。

这些药物通过根据常规方法配制进行制备。当配制必需时，可以加 入用于配制的各种药学上可接受的物质。尽管用于制剂的物质可以根据 制剂的剂型进行适当地选择，但它包括例如赋形剂、稀释剂、添加剂、 崩解剂、粘合剂、包衣剂、润滑剂、助流剂、上光剂、香料、增甜剂、 增溶剂等。用于制剂的物质的具体例子包括碳酸镁、二氧化钛、乳糖、 甘露糖醇和其他糖、滑石、乳蛋白质、明胶、淀粉、纤维素及其衍生物、 动物和植物油、聚乙二醇、和溶剂，例如无菌水和单价或多价醇(例如 甘油等)。

尽管本发明的药物的剂量依赖于靶患者的年龄、体重或病理学，或 者药物的剂型、施用方法等而变，但它对于成体每天是0.005g/kg体重- 5g/kg体重的异亮氨酸、0.01g/kg体重-10g/kg体重的亮氨酸和0.005 g/kg体重-5g/kg体重的缬氨酸。

对于一般成体，剂量优选是对于成体每天0.01g/kg体重-1g/kg 体重的异亮氨酸、0.02g/kg体重-2g/kg体重的亮氨酸和0.01g/kg体重 -1g/kg体重的缬氨酸，并且更优选地，0.02g/kg体重-0.2g/kg体重的 异亮氨酸、0.04g/kg体重-0.4g/kg体重的亮氨酸和0.02g/kg体重-0.2 g/kg体重的缬氨酸。氨基酸的总量优选是约0.01g/kg体重-2g/kg体重 /天。上述目剂量可以一次或以几份进行施用。施用的时间选择无具体限 制，并且可以是例如在进餐前、进餐后或进餐之间。此外，给药时间段 无具体限制。

当计算支链氨基酸的剂量(被摄入的量)时，所述支链氨基酸是本 发明的药物的活性成分，在本发明中待用于靶疾病的治疗、预防等目的 的药物的活性成分量通过上述计算方法进行测定。当支链氨基酸被摄入 或施用用于不同目的时，例如以满足平常进餐习惯中的需要或治疗其他 疾病时，此种支链氨基酸无需包括在上述计算中。

例如，待从平常进餐习惯中摄入的支链氨基酸的每日量无需从本发 明中活性成分的上述日剂量的计算中排除。

其为本发明的药物的活性成分的异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸可以单 独或以任何组合包含在制剂中，或全部可以包含在一种制剂中。对于个 别加工成制剂后的施用，它的施用途径和施用剂型可以是相同或不同 的，并且施用的时间选择可以是同时或分开的。因此，剂型、施用的时 间选择、施用途径等可以基于同时使用的药物种类及其作用进行适当地 确定。即，本发明的药物可以是同时包含多种支链氨基酸的制剂，或采 取分开制备且组合使用的伴随药物的形式。本发明的药物包含所有这些 药物形式。具体地，在单个制剂中包含所有支链氨基酸的剂型是优选的， 因为它可以方便地施用。

在本发明中，“重量比”意指在制剂中分别的成分的重量比。例如， 当分别的活性成分异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸包含在单个制剂中时，它 意指个别含量的比，并且当单独的活性成分各自或其任何组合包含在多 个制剂中时，它意指在每个制剂中包含的每种活性成分的重量比。

在本发明中，实际剂量比显示每一个施用受试者(即，患者)的每 种活性成分的单次剂量或日剂量比。例如，当每种活性成分异亮氨酸、 亮氨酸和缬氨酸包含在单个制剂中，且施用于施用受试者时，重量比对 应于剂量比。当每种活性成分分别或以其任何组合包含在多个制剂中， 且进行施用时，重量比对应于一次或在一天中施用的每种制剂中的每种 活性成分的总量比。

此外，本发明的组合物也可以与类固醇药物掺合，以给出掺合物用 于预防或治疗与类固醇药物施用相关的肌萎缩。当本发明的组合物与类 固醇药物掺合时，本发明的组合物和类固醇药物的混合比一般在1∶0.1 -1,000,000的重量比范围内，特别优选1∶1-1,000的重量比。

此外，本发明的组合物也可以以食物形式方便地使用。当组合物作 为食物使用时，可以采用任何膳食形式，只要它是包含本发明的食物的 活性成分即支链氨基酸的一般形式。例如，可以加入合适的香料以产生 饮料，例如饮品和粉末饮料混合物。具体地，例如组合物可以加入汁、 乳、糖食、果冻、酸乳酪、糖果等中，且用于食用和饮用。

此外，此种食物也可以作为具有保健功能的食物或饮食补充剂提 供。具有保健功能的食物也包括用于特定保健功能的食物、具有营养功 能的食物等。用于特定保健功能的食物是这样的食物，其允许指出它预 期达到特定保健目的，例如抑制肌萎缩、改善或抑制与类固醇治疗相关 的副作用症状等。具有营养功能的食物也是这样的食物，当以适当的日 摄入量中包含的营养组分量满足由日本政府设定的标准水平的上限和 下限时，其允许指出营养组分的功能。饮食补充剂包括称为营养补充剂、 健康补充剂等的物质。在本发明中，用于特定保健用途的食物包括具有 其用于抑制肌萎缩、改善或抑制与类固醇治疗相关的副作用症状等的指 示的食物，和进一步地，在包装中附入描述该食物用于此种用途等的书 面说明(即，插页)的食物，等。

此外，本发明的组合物可以作为浓缩液态饮食或食物补充剂使用。 对于作为饮食补充剂的用途，例如，它可以形成片剂、胶囊、粉末、颗 粒、悬浮液、咀嚼剂、糖浆等。除作为食物获得的那些外，本说明书中 的食物补充剂包括为了补充营养的目的获得的那些，其包括营养补充 剂、补充剂等。本发明中的饮食补充剂还可以包括具有保健功能的食物 的子集。

在本说明书中，“食物补充剂”指除作为食物摄入的那些外，获取以 帮助营养的那些，并且包括营养补充剂、补充剂等。

在本发明中，“浓缩液态饮食”是基于每天的必需营养量设计且控制 为约1kcal/ml的浓度的总营养食物(液态食物)，其中充分考虑每种营 养的定性构成，从而使得食物的长期单独摄入将不引起营养的显著缺乏 或过量。

当组合物作为食物摄入时，摄入量依赖于摄入受试者的症状、年龄 或体重，或者食物的形式或摄入方法等而变。所需量是对于成体每天 0.005g/kg体重-5g/kg体重的异亮氨酸、0.01g/kg体重-10g/kg体重 的亮氨酸和0.005g/kg体重-5g/kg体重的缬氨酸。

对于一般成体，量优选是对于成体每天0.01g/kg体重-1g/kg体重 的异亮氨酸、0.02g/kg体重-2g/kg体重的亮氨酸和0.01g/kg体重-1 g/kg体重的缬氨酸，并且更优选地，0.02g/kg体重-0.2g/kg体重的异 亮氨酸、0.04g/kg体重-0.4g/kg体重的亮氨酸和0.02g/kg体重-0.2 g/kg体重的缬氨酸，并且氨基酸的总量优选是约0.01g/kg体重-2g/kg 体重/天。本发明的食物的上述每日量可以一次或以几份进行摄入。食物 的形式、摄入方法、摄入时间段等无具体限制。

异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸已广泛用于药物和食物领域中，并且它 们的安全性已得到确定。例如，即使当经口施用于小鼠时，包含以1∶2∶ 1.2重量比的这些氨基酸的药物制剂的急性毒性(LD₅₀)也至少为10 g/kg。

本发明的另一个实施方案是异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸在生产用于 抑制肌萎缩相关基因表达的组合物或用于改善或抑制本发明的类固醇 治疗中的副作用的组合物中的用途。组合物的优选范围与上文提及的那 些相同。

另一个实施方案是抑制肌萎缩相关基因表达的方法，或改善或抑制 类固醇治疗中的副作用的方法，其包括给施用受试者施用有效量的异亮 氨酸、亮氨酸和缬氨酸。活性成分的有效量的优选范围等与上文提及的 那些相同。

本发明的另外一个实施方案是包含书面物质的商业包装，所述书面 物质阐述包含3种支链氨基酸异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸作为活性成分 的组合物可以或应用于抑制肌萎缩、或改善或抑制类固醇治疗中的副作 用。

本说明书中引用的任何出版物包括专利和专利申请中公开的内容 在此整体引入作为参考，其程度与它们已在本文中公开相同。

本发明通过提及下述实施例更详细地进行解释，所述实施例仅提供 本发明的例证并且不限制本发明的范围。

【实施例】

(实施例1)BCAA在地塞米松施用的大鼠中的肌萎缩预防效果

地塞米松(600μg/kg)腹膜内施用于大鼠(SD；10-11周大)，进 行连续5天。异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸(重量比1∶2∶1.2)掺合物 (BCAA)施用组用0.75g/kg上述BCAA同时进行经口施用，进行连续 5天。媒介物组以相同方式用蒸馏水连续进行经口施用。

在第5天时，大鼠进行尸体解剖，并且就肌肉强度功能评估、血糖 水平和血浆胰岛素水平进行分析，其中使用食物摄入、体重概况、肌肉 重量、握力测量装置。

作为对照组，使用成对饲养的正常大鼠。

通过与媒介物组比较，BCAA施用组显示体重减轻和食物摄入中的 减少的抑制(图1)。肌肉重量中的减少也得到抑制(图2)。此外， 握力在BCAA施用组中明显是高的，并且观察到肌肉功能的改善(图3)。 尽管地塞米松施用增加血糖水平和胰岛素水平，但增加通过BCAA的施 用得到校正(图4和5)。

(实施例2)BCAA在地塞米松施用的大鼠中的肌萎缩治疗效果

地塞米松(600μg/kg)腹膜内施用于大鼠(SD；10-11周大)，进 行连续5天，以诱导肌萎缩。在距离地塞米松施用结束的第6天和第7 天，BCAA(0.75g/kg)进行经口施用，并且检查对肌萎缩的治疗效果。 媒介物组以相同方式用蒸馏水连续进行经口施用。

在第6天和第7天，大鼠进行尸体解剖，并且就肌肉重量进行分析。 R1和R2分别是恢复期(恢复；R)的第1天和第2天，并且对应于距 离地塞米松施用结束的第6天和第7天。

通过与媒介物组比较，BCAA施用组显示肌肉重量的早期恢复(图 6)。

(实施例3)BCAA在地塞米松施用的大鼠中的骨质疏松症预防效 果

地塞米松(600μg/kg)腹膜内施用于大鼠(SD；10-11周大)，进 行连续1.5个月。异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸(重量比9∶7∶6)掺合 物(BCAA)施用组用0.75g/kg上述BCAA同时进行经口施用，进行连 续1.5个月。媒介物组以相同方式用蒸馏水连续进行经口施用。

在1.5个月时，大鼠进行尸体解剖，并且就血浆ALP水平进行分析。 已知当骨代谢周转高时，血浆ALP显示高的值。

通过与媒介物组比较，BCAA施用组显示低血浆ALP值(图7)。

(实施例4)支链氨基酸在地塞米松施用的大鼠中的肌萎缩预防效 果

地塞米松(600μg/kg)腹膜内施用于大鼠(SD；10-11周大)，进 行连续5天，以诱导肌萎缩。异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸(重量比1∶2∶ 1.2)掺合物(BCAA)施用组(在图中作为BCAA指出并且在下文作为 BCAA施用组指出)用0.75g/kg上述BCAA同时进行经口施用，进行连 续5天。媒介物组以相同方式用蒸馏水连续进行经口施用。在第5天， 大鼠进行尸体解剖，并且就食物摄入、体重概况和肌肉重量进行测量， 并且肌萎缩基因的表达量通过本身已知的方法进行分析。

为了特异，cDNA使用从骨骼肌中提取的RNA作为模板进行合成， 其中使用ISOGEN(NIPPON GENE)和SuperScript III(Invitrogen)。 使cDNA(2.5ng)、Atrogin-1和MuRF-1的引物(参见下表1)和粉末 cyber绿(Applied Biosystems)混合，并且通过实时RT-PCR方法相对 和定量分析测试样品中存在的肌萎缩相关基因(Atrogin-1、MuRF-1、 Myostatin、FOXO1、FOXO3a、FOXO4、REDD1和KLF15)的表达量， 使用对照组的那种作为1。

作为对照组，使用成对饲养的正常大鼠。

【表1】

已知地塞米松施用于大鼠减少体重和食物摄入，并且其为蛋白酶体 降解诱导基因的atrogin-1、MuRF-1和Myostatin的表达被诱导以发展肌 萎缩，这减少肌肉量(参见Endocrinology 146：1789-1797(2005)， Am.J.Physiol.Endocrinol.Metab.287：E591-E601(2004))。

在媒介物组中，观察到体重和食物摄入中的减少。然而，此种减少 在BCAA施用组中得到抑制(图8)。在BCAA施用组中，与媒介物组 相比较，肌肉重量中的减少得到抑制(图9)。此外，在BCAA施用组 中，肌萎缩相关基因atrogin-1和MuRF-1和Myostatin——肌肉的负生长 因子，以及其为萎缩相关基因的FOXO1、FOXO3a、FOXO4、REDD1 和KLF15基因的表达也得到抑制(图10-13)。

(实施例5)BCAA在地塞米松施用的大鼠中的肌萎缩治疗效果

地塞米松(600μg/kg)腹膜内施用于大鼠(SD；10-11周大)，进 行连续5天，以诱导肌萎缩。在距离地塞米松施用结束的第6天和第7 天，异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸(重量比1∶2∶1.2)掺合物(0.75g/kg) 进行经口施用，并且检查对肌萎缩的治疗效果。媒介物组以相同方式用 蒸馏水连续进行经口施用。在第6天和第7天，大鼠进行尸体解剖，并 且就食物摄入、体重、肌肉重量、肌萎缩基因表达量进行分析。R1和 R2分别是恢复期(恢复；R)的第1天和第2天，并且对应于距离地塞 米松施用结束的第6天和第7天。

通过与媒介物组比较，尽管BCAA施用组显示体重减轻和食物摄入 中的减少的低恢复水平(图14)，但它显示肌肉重量的高恢复水平(图 15)。此外，肌萎缩基因的表达量通过上述实时PCR方法进行定量分析。 结果，BCAA施用组也显著抑制肌萎缩基因atrogin-1和MuRF-1的表达 (图16)。

根据上述结果，已阐明肌肉重量经由BCAA施用的恢复可归于起因 于肌萎缩基因表达的抑制的肌萎缩的抑制，而不是食物摄入中的增加。

(实施例6)BCAA在5/6肾切除术大鼠中抑制肌萎缩基因表达

对大鼠(WKY；7-9周大)实施5/6肾切除术，以制备肾衰竭模型 大鼠。肌萎缩基因的表达通过上述实时PCR方法在上述模型大鼠的3 个组中进行分析：具有BCAA施用或不具有BCAA施用的组以及具有单 独的假手术的组(假)。在不含BCAA施用的肾衰竭模型大鼠组中，与 假组相比较，肌萎缩基因atrogin-1和MuRF-1的表达增加。相比之下， BCAA施用组抑制atrogin-1和MuRF-1的表达几乎至假组的水平(图 17)。在图17中，每个组的相对值的平均值用假组中的一个病例的值 作为1.0进行绘图。

根据上述结果，已阐明BCAA即使对由于肾衰竭的肌萎缩基因表达 中的增加也具有抑制作用。

尽管本发明的一些实施方案已在上文得到详细描述，然而，本领域 普通技术人员可以在基本上不背离本发明的教导和优点的情况下对所 示具体实施方案进行各种修饰和改变。此种修饰和改变包含在如附加权 利要求中所述的本发明的精神和范围中。

本申请基于在日本提交的专利申请号2006-335057和2006-335059， 所述专利申请的内容全部引入本文作为参考。

序列表

 

<110>  AJINOMOTO CO., INC.

 

<120>  用于改善/预防类固醇治疗中的不利副作用的组合物

 

<130>  091142

 

<150>  JP 2006-335057 

<151>  2006-12-12

 

<150>  JP 2006-335059

<151>  2006-12-12

 

<160>  16  

 

<170>  PatentIn version 3.3

 

<210>  1

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工的

 

<220>

<223>  atrogin-1的5'-引物

 

<400>  1

agcgcttctt ggatgagaaa                                                 20

 

 

<210>  2

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工的

 

<220>

<223>  atrogin-1的3'-引物

 

<400>  2

tcttggctgc aacatcgtag                                                 20

 

 

<210>  3

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工的

 

<220>

<223>   MuRF-1的5'-引物

 

<400>  3

ccaggtgaag gaggaactga                                                 20

 

 

<210>  4

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工的

 

<220>

<223>  MuRF-1的3'-引物

 

<400>  4

ctcctgctcc tgagtgatcc                                                 20

 

 

<210>  5

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工的

 

<220>

<223>  Myostatin的5'-引物

 

 

<400>  5

acgctaccac ggaaacaatc                                                 20

 

 

<210>  6

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工的

 

<220>

<223>  Myostatin的3'-引物

 

<400>  6

ggagtcttga cggctctcag                                                 20

 

 

<210>  7

<211>  21

<212>  DNA

<213>  人工的

 

<220>

<223>  Foxo 1的5'-引物

 

<400>  7

cggccaatcc agcatgagcc c                                               21

 

 

<210>  8

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工的

 

<220>

<223>  Foxo 1的3'-引物

 

<400>  8

gtggggagga gagtcagaag tc                                              22

 

 

<210>  9

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工的

 

<220>

<223>  Foxo 3a的5'-引物

 

<400>  9

gctccaccac cagcaccaaa cc                                              22

 

 

<210>  10

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工的

 

<220>

<223>  Foxo 3a的3'-引物

 

<400>  10

cgagagggtt tgcatagact ggc                                             23

 

 

<210>  11

<211>  24

<212>  DNA

<213>  人工的

 

<220>

<223>  Foxo 4的5'-引物

 

<400>  11

gccatgacag aatgcctcag gatc                                            24

 

 

<210>  12

<211>  24

<212>  DNA

<213>  人工的

 

<220>

<223>  Foxo 4的3'-引物

 

<400>  12

ggctcaaagt tgaagtccag tccc                                            24

 

 

<210>  13

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工的

 

<220>

<223>  REDD1的5'-引物

 

<400>  13

tagtgcccac ctttcagttg                                                 20

 

 

<210>  14

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工的

 

<220>

<223>  REDD1的3'-引物

 

<400>  14

gtcagggact ggctgtaacc                                                 20

 

 

<210>  15

<211>  21

<212>  DNA

<213>  人工的

 

<220>

<223>  KLF15的5'-引物

 

<400>  15

ctgcagcaag atgtacacca a                                               21

 

 

<210>  16

<211>  21

<212>  DNA

<213>  人工的

 

<220>

<223>  KLF15的3'-引物

 

<400>  16

tcatctgagc gtgaaaacct c                                               21