一种具有流感病毒神经氨酸酶抑制活性的环己烯化合物及其制备方法以及其应用

摘要

本发明提供了一种由以下通式I表示的化合物，或其药学上可接受的盐，以及解析的对映异构体与纯化的非对映体，其中：R1是H或C1-12烷基；R2是H，-C(O)R1a，-C(O)OR1a或-S(O)2R1b，其中R1a是H或C1-6烷基，R1b是选自H或C1-6烷基，卤代烷烃，苯基或芳基的基团；R3是可选被C1-4烷基取代的氨基，卤素，羟基，巯基，胍基，硝基或氰基；以及R4是-(CH2)nCO2H，-(CH2)nP(O)(OH)2，-(CH2)nCO2R1a，-(CH2)nP(O)(OR1a)2，其中R1a是H或C1-6烷基，n是0到4的整数，或以上基团的盐。本发明还提供了新的通式I表示的环己烯化合物的制备方法，以及它们作为流感病毒神经氨酸酶抑制剂在用于制备预防或治疗流感疾病的药物中的应用。式I

说明书

技术领域

本发明涉及一类新的环己烯化合物，或此类化合物药学上可接受的盐，它们的制备方法，以及它们作为流感病毒神经氨酸酶抑制剂预防或治疗流感疾病的应用。 

背景技术

流行性感冒是由流感病毒引起的一种全球性的感染性疾病，一直严重影响着人类的正常生活，给人类社会的安定带来了极大的威胁。 

目前，流感病毒预防与治疗的主要手段是使用神经氨酸酶抑制剂药物，该药物是以流感病毒表面的神经氨酸酶(NA)为靶点。神经氨酸酶是一种呈蘑菇型的四聚体糖蛋白，在流感病毒完成复制脱离宿主细胞的过程中，神经氨酸酶起着重要的作用。当流感病毒通过血凝素进入宿主细胞并复制后，成熟的病毒细胞表面的血凝素通过唾液酸与宿主的细胞膜联系，由于神经氨酸酶具有酶活性，能水解唾液酸残基，最终促使病毒细胞脱离宿主。因此，有效地抑制神经氨酸酶，即可阻止流感病毒在体内的传播。 

Von Itzstein，M.等人在专利WO9116320中，及Colman，P.M.等人在WO9206691中公开了与神经氨酸酶结合的化合物，并表明其具有体内抗病毒活性。Babu，S.Y.等人在美国专利US5602277中公开了某些苯衍生物可作为流感病毒神经氨酸酶抑制剂。美国Gilead sciences公司在专利WO9626933中公开了可作为神经氨酸酶抑制剂的六元环化合物。Chand，P.等人在WO9933781中公开了具有神经氨酸酶抑制活性的五元环化合物。此外，Xu等对近年来发展的神经氨酸酶抑制剂做了综述(Curr.Med.Chem.2007，14，2872-2891；J.Int.Pharm.Res.2010，37，241-248)。 

然而，在公开的报道中，未见有合成C-4’位含有烷基与酰胺基取代的环己烯化合物，以及该类新化合物流感病毒神经氨酸酶抑制活性的研究。 

为了避免流感病毒的变异，需要开发新的化合物作为流感病毒神经氨酸酶抑制剂，以用于制备治疗或预防流感病毒的药物。 

发明内容

针对现有技术的不足，本发明为寻找更多具有流感病毒神经氨酸酶抑制活性的新抑制剂，提供了一类新的C-4’位含有烷基与酰胺基取代的环己烯化合物及其合成方法，同时对其进行了初步的流感病毒神经氨酸酶抑制活性测试。 

本发明的第一方面提供了通式I表示的化合物： 

式I 

或其药学上可接受的盐，以及解析的对映异构体与纯化的非对映体，其中： 

R¹是H或C_1-12烷基； 

R²是H，-C(O)R^1a，-C(O)OR^1a或-S(O)₂R^1b，其中R^1a是H或C_1-6烷基，R^1b是选自H或C_1-6烷基，C_1-6卤代烷烃，苯基或芳基的基团； 

R³是氨基，C_1-4烷基取代的氨基，卤素，羟基，巯基，胍基，硝基或氰基； 

R⁴是-(CH₂)_nCO₂H，-(CH₂)_nP(O)(OH)₂，-(CH₂)_nCO₂R^1a，-(CH₂)_nP(O)(OR^1a)₂，其中R^1a是H或C_1-6烷基，n是0到4的整数，或以上羧酸与膦酸基团的盐。 

本发明通式I的化合物对流感病毒神经氨酸酶有一定的抑制作用。 

本发明的另一方面提供了制备通式I化合物的具有通式5的中间体化合物： 

式5 

或其药学上可接受的盐，以及解析的对映异构体与纯化的非对映体，其中： 

R¹是H或C_1-12烷基； 

Boc是叔丁氧羰基；以及 

R⁴是-(CH₂)_nCO₂H，-(CH₂)_nP(O)(OH)₂，-(CH₂)_nCO₂R^1a，或-(CH₂)_nP(O)(OR^1a)₂，其中R^1a是H或C_1-6烷基，n是0到4的整数，或以上基团的盐。 

本发明的另一方面提供了制备通式I化合物的具有通式6的中间体化合物： 

式6 

或药学上可接受的盐，以及解析的对映异构体与纯化的非对映体，其中 

R¹是H或C_1-12烷基； 

R²是H，-C(O)R^1a，-C(O)OR^1a或-S(O)₂R^1b，其中R^1a是H或C_1-6烷基，R^1b是选自H或C_1-6烷基，卤代烷烃，苯基或芳基的基团；以及 

R⁴是-(CH₂)_nCO₂H，-(CH₂)_nP(O)(OH)₂，-(CH₂)_nCO₂R^1a，-(CH₂)_nP(O)(OR^1a)₂，其中R^1a是H或C_1-6烷基，n是0到4的整数，或以上羧酸与膦酸基团的盐。 

本发明的又一方面提供了一种制备通式I化合物的制备方法，包括： 

式I 

步骤A：将以下式1的取代的氨基醇与Boc酸酐反应，然后经Swern氧化或IBX氧化反应，再与Wittig试剂反应得到以下式2的经氨基保护的取代的丙烯醛； 

式1                     式2 

步骤B：将以下式3的膦酸酯与多聚甲醛在第一碱催化下反应，然后加入对甲苯磺酸回流脱水，接着与硝基甲烷在第二碱存在下发生加成反应，得到以下式4的中间体； 

式3                        式4 

步骤C：将式2的经氨基保护的取代的丙烯醛与式4的中间体在第三碱催化下发生串联Michael/Horner-Wadsworth-Emmons(HWE)反应，经分离可得到以下式5的取代的环己烯中间体； 

式5 

步骤D：式5的取代的环己烯中间体在酸性条件下脱去Boc保护基，可选地，然后与酰氯或磺酰氯在第四碱催化下生成以下式6的中间体；以及 

式6 

可选地，步骤E：式6的中间体中的硝基经一步或多步取代基转换，获得通式I的化合物，其中每个取代基R¹、R²、R³、R⁴的定义如上。 

本发明的另一方面提供了另外一种制备通式I化合物的制备方法，包括： 

式I 

步骤A’：将以下式1的取代的氨基醇与乙酰氯反应，然后经Swern氧化或IBX氧化反应，再与Wittig试剂反应得到以下式2’的氨基经乙酰基保护的取代的丙烯醛； 

式1                           式2’ 

步骤B’：将以下式3的膦酸酯与多聚甲醛在第一碱催化下反应，然后加入对甲苯磺酸回流脱水，接着与硝基甲烷在第二碱存在下发生加成反应，得到以下式4的中间体； 

式3                          式4 

步骤C’：将式2’的氨基经乙酰基保护的取代的丙烯醛与式4的中间体在第三碱催化下发生串联Michael/Horner-Wadsworth-Emmons(HWE)反应，经分离可得到以下式5’的取代的环己烯中间体； 

式5’ 

步骤D’：式5’的取代的环己烯中间体在酸性条件下脱去乙酰基保护基，可选地，然后与酰氯或磺酰氯在第四碱催化下生成以下式6的中间体；以及 

式6 

可选地，步骤E’：式6的中间体中的硝基经一步或多步取代基转换，获得通式I的化合物，其中每个取代基R¹、R²、R³、R⁴的定义如上。 

本发明的再一方面提供了一种通式I的化合物、或其药学上可接受的盐，以及解析的对映异构体与纯化的非对映体在制备用于治疗或预防流感病毒的药物中的应用。 

本发明的另一方面提供了一种通式I化合物、或其药学上可接受的盐，以及解析的对映异构体与纯化的非对映体作为流感病毒神经氨酸酶抑制剂的应用。 

本发明的又一方面提供了一种通式I化合物、或其药学上可接受的盐，以及解析的对映异构体与纯化的非对映体在制备用于抑制流感病毒神经氨酸酶的药物中的应用。 

本发明提供的是一类新的C-4’位含有烷基与酰胺基取代的环己烯化合物，其具有流感病毒神经氨酸酶抑制活性，可以用于制备治疗或预防流感病毒的药物，避免流感病毒的变异而引起的抗药性。 

具体实施方式

本发明的一个具体实施方式提供了通式I表示的化合物： 

式I 

或其药学上可接受的盐，以及解析的对映异构体与纯化的非对映体，其中： 

R¹是H或C_1-12烷基； 

R²是H，-C(O)R^1a，-C(O)OR^1a或-S(O)₂R^1b，其中R^1a是H或C_1-6烷基，R^1b是选自H或C_1-6烷基，卤代烷烃，苯基或芳基的基团； 

R³是氨基，C_1-4烷基取代的氨基，卤素，羟基，巯基，胍基，硝基或氰基； 

R⁴是-(CH₂)_nCO₂H，-(CH₂)_nP(O)(OH)₂，-(CH₂)_nCO₂R^1a，-(CH₂)_nP(O)(OR^1a)₂，其中R^1a是H或C_1-6烷基，n是0到4的整数，或以上羧酸与膦酸基团的盐。 

在一具体实施方式中，本发明的化合物、或其药学上可接受的盐，以及解析的对映异构体与纯化的非对映体，其中药学上可接受的盐可以是选自以下组中的酸所形成的盐：盐酸、磷酸、硫酸、硝酸、高氯酸、氢溴酸、乙酸、苯甲酸、和对甲苯磺酸。 

在一优选具体实施方式中，本发明的化合物、或其药学上可接受的盐，以及解析的对映异构体与纯化的非对映体，其中取代基R⁴的盐可以是钠盐、钾盐或铵盐。 

在一优选具体实施方式中，本发明的化合物、或其药学上可接受的盐，以及解析的对映异构体与纯化的非对映体，其中 

R¹可以是H或C_1-8烷基； 

R²可以是H，-C(O)R^1a，-C(O)OR^1a或-S(O)₂R^1b，其中R^1a是H或C_1-4烷基，R^1b是H、C_1-6烷基、卤代烷烃、或取代或未取代的苯基； 

R³可以是氨基，C_1-4烷基取代的氨基，Cl，Br，羟基，巯基，胍基，硝基或氰基；以及 

R⁴可以是-(CH₂)_nCO₂H，-(CH₂)_nP(O)(OH)₂，-(CH₂)_nCO₂R^1a，-(CH₂)_nP(O)(OR^1a)₂，其中R^1a可以是H或C_1-6烷基，n是0到2的整数，或以上羧酸与膦酸基团的铵盐、钠盐、钾盐。 

在一优选具体实施方式中，本发明的化合物、或其药学上可接受的盐，以及解析的对映异构体与纯化的非对映体，其中 

R¹是H、甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、2-甲基-1-乙基，1-丁基、2-丁基、2-甲基-1-丙基、叔丁基、1-戊基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、新戊基、2-戊基、3-戊基、1-己基、1-庚基、1-辛基或2-乙基己基； 

R²可以是H，-C(O)R^1a，-C(O)OR^1a或-S(O)₂R^1b，其中R^1a可以是H、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基，R^1b是H、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、2，2，2-三氯乙基、2，2，2-三氟乙基、三氯甲基、或对甲基苯基； 

R³可以是氨基，二乙基氨基，Cl，Br，羟基，巯基，胍基，硝基或氰基； 

R⁴可以是-(CH₂)₂CO₂H，-CH₂CO₂H，-CO₂H，-(CH₂)₄P(O)(OH)₂，-(CH₂)₃P(O)(OH)₂，-(CH₂)₂P(O)(OH)₂，-CH₂P(O)(OH)₂，-(CH₂)₄P(O)(OR^1a)₂，-(CH₂)₃P(O)(OR^1a)₂，-(CH₂)₂P(O)(OR^1a)₂，-CH₂P(O)(OR^1a)₂，其中R^1a可以是H、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基，或以上羧酸与膦酸基团的铵盐、钠盐、钾盐。 

本发明通式I的化合物对流感病毒神经氨酸酶有一定的抑制作用。 

另一具体实施方式，提供了制备通式I化合物的具有通式5的中间体化合物： 

式5 

或其药学上可接受的盐，以及解析的对映异构体与纯化的非对映体，其中： 

R¹可以是H或C_1-12烷基； 

Boc可以是叔丁氧羰基；以及 

R⁴可以是-(CH₂)_nCO₂H，-(CH₂)_nP(O)(OH)₂，-(CH₂)_nCO₂R^1a，或-(CH₂)_nP(O)(OR^1a)₂，其中R^1a可以是H或C_1-6烷基，n是0到4的整数，或以上基团的盐。本发明的另一具体实施方式提供了制备通式I化合物的具有通式6的中间体化合物： 

式6 

或药学上可接受的盐，以及解析的对映异构体与纯化的非对映体，其中 

R¹可以是H或C_1-12烷基； 

R²可以是H，-C(O)R^1a，-C(O)OR^1a或-S(O)₂R^1b，其中R^1a是H或C_1-6烷基，R^1b是H、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、2，2，2-三氯乙基、2，2，2-三氟乙基、三氯甲基、或对甲基苯基；以及 

R⁴可以是-(CH₂)_nCO₂H，-(CH₂)_nP(O)(OH)₂，-(CH₂)_nCO₂R^1a，-(CH₂)_nP(O)(OR^1a)₂，其中R^1a可以是H或C_1-6烷基，n是0到4的整数，或以上羧酸与膦酸基团的盐。 

本发明的另一具体实施方式还提供了一种制备通式I化合物的制备方法，包括： 

式I 

步骤A：将以下式1的取代的氨基醇与Boc酸酐反应，然后经Swern氧化或IBX氧化反应，再与Wittig试剂反应得到以下式2的经氨基保护的取代的丙烯醛； 

式1                   式2 

步骤B：将以下式3的膦酸酯与多聚甲醛在第一碱催化下反应，然后加入对甲苯磺酸回流脱水，接着与硝基甲烷在第二碱存在下发生加成反应，得到以下式4的中间体； 

式3                   式4 

步骤C：将式2的经氨基保护的取代的丙烯醛与式4的中间体在第三碱催化下发生串联Michael/Horner-Wadsworth-Emmons(HWE)反应，经分离可得到以下式5的取代的环己烯中间体； 

式5 

步骤D：式5的取代的环己烯中间体在酸性条件下脱去Boc保护基，可选地，然后与酰氯或磺酰氯在第四碱催化下生成以下式6的中间体；以及 

式6 

可选地，步骤E：式6的中间体中的硝基经一步或多步取代基转换，获得通式I的化合物，其中每个取代基R¹、R²、R³、R⁴的定义如上。 

在另外一种实施方式中，提供了另外一种制备通式I化合物的制备方法，包括： 

式I 

步骤A’：将以下式1的取代的氨基醇与乙酰氯反应，然后经Swern氧化或IBX氧化反应，再与Wittig试剂反应得到以下式2’的氨基经乙酰基保护的取代的丙烯醛； 

式1                     式2’ 

步骤B’：将以下式3的膦酸酯与多聚甲醛在第一碱催化下反应，然后加入对甲苯磺酸回流脱水，接着与硝基甲烷在第二碱存在下发生加成反应，得到以下式4的中间体； 

式3                    式4 

步骤C’：将式2’的氨基经乙酰基保护的取代的丙烯醛与式4的中间体在第三碱催化下发生串联Michael/Horner-Wadsworth-Emmons(HWE)反应，经分离可得到以下式5’的取代的环己烯中间体； 

式5’ 

步骤D’：式5’的取代的环己烯中间体在酸性条件下脱去乙酰基保护基，可选地，然后与酰氯或磺酰氯在第四碱催化下生成以下式6的中间体；以及 

式6 

可选地，步骤E’：式6的中间体中的硝基经一步或多步取代基转换，获得通式I的化合物，其中每个取代基R¹、R²、R³、R⁴的定义如上。 

在一具体实施方式中，本发明的化合物的合成方法，其中， 

步骤A或步骤A’：式1的取代的氨基醇可以是手性或非手性的； 

步骤B或步骤B’：第一碱可以选自二乙胺、三乙胺、二异丙基乙胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二异丙胺、二丙胺、三丙胺、哌啶、吡啶、吡咯烷，第二碱可以选自甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钠、碳酸铯、氢氧化铯、氢氧化钠、氢氧化钾、三乙胺、二异丙基乙胺、哌啶； 

步骤C或步骤C’：第三碱选自碳酸铯、碳酸钾、碳酸钠、氟化铯、氟化钾、氟化钠、1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)、三乙胺、二乙胺、哌啶、吡啶、吡咯烷，其中分离可以通过硅胶柱色谱或其他适宜的分离方法实现； 

步骤D或步骤D’：酸选自三氟乙酸、对甲苯磺酸、三氟甲磺酸、盐酸、硫酸、硝酸，可选地第四碱选自三乙胺、二乙胺、二异丙基乙胺、哌啶、吡啶、吡咯烷、碳酸钠、碳酸铯、碳酸钾； 

可选地，步骤E：硝基的一步或多步取代基转换为硝基的还原，其中每个取代基R¹、R²、R³、R⁴的定义如上所定义。 

在一优选的具体实施方式中，本发明的化合物的合成方法，其中： 

步骤E：硝基的一步或多步取代基转换为将硝基还原后获得的通式I的氨基化合物再次经取代基转换，可以选自氨基的烷基化、氨基的酰化、氨基的重氮化、氨基被羟基置换、氨基被巯基置换、氨基被卤素置换、氨基被胍基置换、获得的羟基进一步被酯化、重氮盐的水解、酯基的水解，以获得进一步转换的取代基R³或可选进一步转换的取代基R⁴，其中每个取代基R¹、R²、R³、R⁴的定义如上。 

本发明的再一具体实施方式提供了一种通式I化合物、或其药学上可接受的盐，以及解析的对映异构体与纯化的非对映体在制备用于治疗或预防流感病毒的药物中的应用。 

本发明的另一具体实施方式提供了一种通式I化合物、或其药学上可接受的盐，以及解析的对映异构体与纯化的非对映体作为流感病毒神经氨酸酶抑制剂的应用。 

本发明的又一方面提供了一种通式I化合物、或其药学上可接受的盐，以及解析的对映异构体与纯化的非对映体在制备用于抑制流感病毒神经氨酸酶的药物中的应用。 

本发明的进一步的具体实施方式提供了一种治疗或预防流感病毒的方法，包括给予对其有需要的个体预防或治疗有效量的通式I化合物、或其药学上可接受的盐，或解析的对映异构体与纯化的非对映体。 

下面将详细描述本发明的示例性实施方案。然而，这些实施方案仅为说明目的，并不旨在限制本发明的范围。 

如本文所使用的，如果为提供具体的限定，本发明的术语具有下述含义。 

“卤素”包括氟，氯，溴和碘。 

“烷基”是指直链或支链的饱和烃基团，如C_1-20烷基，优选为C_1-12烷基，更优选为C_1-6烷基，再优选为C_1-4烷基，尤其是例如甲基(Me)，乙基(Et)，丙基(例如，正丙基和异丙基)，丁基(例如，正丁基，异丁基，叔丁基)，戊基(例如，正戊基，异戊基，新戊基)，正己基等。其中，在各取代烷基或烷基取代的基团中，烷基定义同上。 

“可选地”意味着随后描述的事件或情况可以发生或可以不发生，所述描述包括其中所述事件或情况发生的例子和其中它不发生的例子。 

“治疗有效量”指的是在给予需要这样的治疗的哺乳动物时，足以有效治疗的通式化合物的量。治疗有效量将依赖于所用的治疗药剂的特定活性、患者的年龄、生理状况、其它疾病状态的存在、和营养状况而变化。此外，患者可能正接受的其它药物治疗将影响要给予的治疗药剂的治疗有效量的确定。 

“治疗”意味着对于哺乳动物体内疾病的任何治疗，包括： 

(i)防止疾病，即造成疾病的临床症状不发展； 

(ii)抑制疾病，即，阻止临床症状的发展；和/或 

(iii)减轻疾病，即，造成临床症状的消退。 

在许多情况下，本发明的化合物能够由于氨基和/或羧基基团、酸根、或与此类似的基团的存在而形成酸和/或碱性盐。本发明所述的“化合物”是指包括所有立体异构体，几何异构体，互变异构体，和同位素。 

本发明的化合物可以是不对称的，例如，具有一个或多个立体异构体。除非另有说明，所有立体异构体都包括，如对映体和非对映体。本发明的含有不对称取代碳原子的化合物可以以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来。光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。 

本发明的化合物还包括互变异构体形式。互变异构体形式来源于一个单键与相邻的双键交换并一起伴随一个质子的迁移。 

本发明的化合物还包括所有同位素的原子，无论是在中间体或最后的化合物。同位素的原子包括具有相同的原子数，但不同质量数。例如，氢的同位素包括氚和氘。 

本发明的化合物还包括药学上可接受的盐。药学上可接受的盐是指把母体化合物中的碱性基团转换成盐的形式。药学上可接受的盐包括，但不仅限于，碱性基团例如胺(氨)基的无机或有机酸盐类。本发明药学上可接受的盐可以由母体化合物合成，即母体化合物中的碱性基团与1-4当量的酸在一个溶剂系统中反应。合适的盐列举在Remington’s Pharmaceutical Sciences，17^th ed.，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，1985，p.1418和Journal of Pharmaceutical Science，66，2(1977)中。 

药学上可接受的酸加成盐可以由无机和有机酸制备。由衍生酸加成盐的无机酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。由衍生酸加成盐的有机酸包括乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬 酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、苯磺酸等。衍生酸加成盐的无机酸和有机酸尤其选自盐酸、磷酸、硫酸、硝酸、高氯酸、氢溴酸、乙酸、苯甲酸、和对甲苯磺酸。 

如本文所用的，“药学上可接受的载体”包括任何和全部的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌药剂、等渗和吸收延迟剂等。这样的介质和药剂用于药学活性物质在本领域是众所周知的。除非任何常规介质或药剂与活性成分不相容，其在治疗组合物中的应用是可预期的。补充的活性成分也可以并入组合物中。 

该组合物优选被配制成单位剂型。术语“单位剂型”指的是适于用作给予人类受试者和其他哺乳动物的单一剂量的物理离散单位，每一单位含有计算出用以产生所需要的治疗有效的活性物质的预定的量以及相关的合适的药用赋形剂(如片剂、胶囊、安瓿)。通式I的化合物在广泛的剂量范围内是有效的并且通常给予有效药物量。优选地，对于口服给药，每个剂量单位包含10mg至2g的通式I化合物，更优选为10至700mg，而对于肠胃外给药，优选为10至700mg的通式I化合物，更优选约50至200mg。然而，应当明了，实际给予的通式I化合物的量将由医师根据有关的情况来确定，包括要治疗的病症，选择的给药途径，给予的实际化合物以及其相对活性，各个患者的年龄、体重、以及反应，患者症状的严重性等。 

为了制备固体组合物如片剂，将主要的活性组分与药物赋形剂(或载体)进行混合以形成固体预配制组合物，其包含本发明的化合物的均匀混合物。当称这些预配制组合物为均匀的时候，它是指活性组分被均匀分散在整个组合物中，以致组合物可以容易地被细分成相同有效的单位剂型如片剂、丸剂以及胶囊剂。 

本发明的片剂或丸剂可以被涂布或用其它方式被复合以提供一种具有延长作用优点的剂型，或保护片剂或丸剂免受胃中酸性条件的作用。例如，片剂或丸剂可以包括内剂量和外剂量成分，后者具有在前者之上的外皮的形式。可以用肠溶层来分隔两种成分，其中肠溶层用来阻止在胃中的崩解以及允许内成分完整进入十二指肠或被延迟释放。各种材料可以用于这样的肠溶层或涂层，上述材料包括许多高分子酸以及高分子酸与这样的材料如虫胶、十六烷醇、以及醋酸纤维素的混合物。 

用于吸入法或吹入法的组合物包括在药学上可接受的含水溶剂或有机溶剂、或其混合物中的溶液和悬浮液，以及散剂。液体或固体组合物可以包含如上文所述的适宜的药用赋形剂。优选地，通过口服或鼻呼吸途径给予这些组合物以获得局部或全身效应。可以通过使用惰性气体来雾化在优选的药学可接受的溶剂中的组合物。可以直接从雾化装置吸入雾化溶液，或雾化装置可以连接于面罩帐状物、或间歇正压呼吸机。可以由以适当方式递送剂型的装置，优选口服或鼻途径，给予溶液、混悬剂、或散剂组合物。 

本发明的化合物和药学上可接受的盐还包括溶剂化物或水合物的形式。一般来说，溶剂化物或水合物的形式与非溶剂化的或非水合的形式等同，并涵盖在本发明的 范围内。本发明中的某些化合物有可能存在多晶体或无定形的形式。总的来说，所有的物理形式具有同等的用途，并且涵盖在本发明的范围内。 

本发明还包括所述化合物的前药。前药是一个药理物质(药物)，由母体药物衍生而来。一旦进入体内，前药就被代谢转变成母体药物。前药可通过对母体药物的一个或多个官能团进行取代而制备，其取代基团在体内将被降解而释放出母体化合物来。前药的制备和使用可以在T.Higuchi and V.Stella，“Pro-drugs as Novel Delivery Systems，”Vol.14 of the A.C.S.Symposium Series，和Bioreversible Carriers in Drug Design，ed.Edward B.Roche，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987中找到。 

本发明还提供包括通式I化合物或其药学可接受的盐或其前药以及至少一种药学上可接受的载体的药物组合物。本发明的药物组合物可口服，针剂注射，喷雾吸入，皮外用，直肠用，鼻腔用，阴道用，腹腔用，或通过植入储液囊或透皮贴剂等途径而使用。 

在另一个方面，本发明提供用通式I化合物抑制流感病毒神经氨酸酶活性的方法。此处的“抑制流感病毒神经氨酸酶活性”术语意味着，流感病毒神经氨酸酶一旦与本发明的取代的环己烯化合物接触，其活性相对于没有该化合物接触的情况下有所下降。因此，本发明提供了一种用取代的环己烯化合物与流感病毒神经氨酸酶接触来抑制流感病毒神经氨酸酶活性的方法。 

本发明的通式I化合物可用于抑制神经氨酸酶，如重组H1N1神经氨酸酶，甲型流感病毒、乙型流感病毒，如甲型流感病毒汉防95-359(H3N2)，粤防72-243(H3N2)，济防90-15(H3N2)，江西东湖2006-312(H3N2)，山东93-9(H3N2)，浙防98-10(H3N2)，悉尼97-5(H3N2)，广东罗湖2006-219(H1N1)，北京97-53(H1N1)，北京96-25(H1N1)，桂防95-10(H1N1)，乙型流感病毒济防97-13，北京97-172，北京93-184，深圳97-12，深圳2005-155等。 

本发明的另一方面涉及制备通式I化合物的合成方法。 

本发明的化合物可以使用以下的方法和程序(合成方案1)制备： 

合成方案1 

具体实验步骤描述如下： 

步骤A：式1的氨基醇1(可以是手性或非手性的)与Boc酸酐反应，然后经Swern氧化或IBX氧化羟基变为醛基，再与Wittig试剂反应得到式2的化合物醛2。 

步骤B：将式3的膦酸酯3首先与多聚甲醛在碱(如二乙胺、三乙胺、哌啶)催化下反应，然后加入对甲苯磺酸回流脱水，最后与硝基甲烷在碱性条件下(如甲醇钠、碳酸铯、三乙胺)发生加成反应，得到式4的中间体化合物4。 

步骤C：将式2的化合物醛2与式4的中间体化合物4在碱(如碳酸铯、1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)、三乙胺)催化下发生串联Michael/Horner-Wadsworth-Emmons(HWE)反应，经硅胶柱色谱分离可得到式5的环己烯中间体化合物5。 

步骤D：将式5的环己烯中间体5在酸性条件下(如三氟乙酸、盐酸、对甲苯磺酸)脱去Boc保护基，可选地，然后与酰氯或磺酰氯在碱(如三乙胺、二乙胺、二异丙基乙胺)催化下生成式6的中间体化合物6。 

可选地，步骤E：将式6的中间体化合物6经简单的取代基转换(如硝基的还原、以及可选地进一步的取代基转换，选自氨基的酰化、氨基的烷基化、氨基的重氮化、氨基被羟基置换、氨基被巯基置换、氨基被卤素置换、氨基被胍基置换、羟基的酯化、重氮盐的水解、酯基的水解，以获得具有进一步转换的取代基R³的通式I的目标化合物。 

本发明的化合物还可以利用以下的方法和程序(合成方案2)制备： 

合成方案2 

具体实验步骤描述如下： 

步骤A’：将式1的取代的氨基醇1(可以是手性或非手性的)与乙酰氯反应，然后经Swern氧化或IBX氧化反应，再与Wittig试剂反应得到以下式2’的氨基经乙酰基保护的取代的丙烯醛2’； 

步骤B’：将式3的膦酸酯3首先与多聚甲醛在第一碱(如二乙胺、三乙胺、哌啶)催化下反应，然后加入对甲苯磺酸回流脱水，接着与硝基甲烷在在碱性条件下(如甲醇钠、碳酸铯、三乙胺)发生加成反应，得到式4的中间体化合物4； 

步骤C’：将式2’的氨基经乙酰基保护的取代的丙烯醛2’与式4的中间体化合物4在碱(如碳酸铯、1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)、三乙胺)催化下发生串联Michael/Horner-Wadsworth-Emmons(HWE)反应，经分离可得到式5’的取代的环己烯中间体化合物5’； 

步骤D’：式5’的取代的环己烯中间体5’在酸性条件下(如三氟乙酸、盐酸、对甲苯磺酸)脱去乙酰基保护基，可选地，然后与酰氯或磺酰氯在碱(如三乙胺、二乙胺、二异丙基乙胺)催化下生成式6的中间体化合物6； 

可选地，步骤E’：将式6的中间体化合物6中的硝基经简单的取代基转换(如硝基的还原、以及可选地进一步的取代基转换，选自氨基的酰化、氨基的烷基化、氨基的重氮化、氨基被羟基置换、氨基被巯基置换、氨基被卤素置换、氨基被胍基置换、羟基的酯化、重氮盐的水解、酯基的水解，以获得具有进一步转换的取代基R3的通式I的目标化合物。 

作为对映体的混合物，中间体式5和式6的化合物的对映体可以通过手性高效液相色谱法或通过手性拆分剂进行拆分。 

作为对映体的混合物，中间体式5’和式6’的化合物的对映体可以通过手性高效液相色谱法或通过手性拆分剂进行拆分。 

作为对映体的混合物，通式I的化合物的对映体也可以通过手性高效液相色谱法或通过手性拆分剂进行拆分。 

合成实施例： 

实施例1 

化合物(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯羧酸的制备 

步骤A：(S，E)-6-甲基-4-叔丁氧羰基氨基-2-庚烯醛 

将L-亮氨醇(1.29克，11.0毫摩尔)溶于甲醇(50毫升)中，在室温下逐滴加入Boc酸酐(或二碳酸二叔丁酯，2.64克，12.1毫摩尔)的甲醇(10毫升)溶液中，常温搅拌14小时。减压下旋转蒸发至溶剂蒸干，加入二氯甲烷(30毫升)后用饱和碳酸氢钠溶液(3×20毫升)洗涤，合并有机相并用无水硫酸钠干燥后，减压除去溶剂得无色透明液体(2.27克)。氮气保护下，将草酰氯(2.00克，15.7毫摩尔)溶于二氯甲烷(25毫升)中，冷却到-78℃后逐滴加入DMSO(2.45克，31.4毫摩尔)的二氯甲烷(5毫升)溶液，25分钟加完。将上述所得的无色液体产物(2.27克)溶于二氯甲烷(20毫升)后缓慢滴入反应体系中，50分钟加完。在-70℃下反应10分钟，将三乙胺(11毫升)与二氯甲烷(5毫升)的混合溶液缓慢滴入反应体系中。自然升温到0℃，加入1N HCl(40毫升)，分液得有机相，水层用二氯甲烷(3×10毫升)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥后减压除去溶剂，得到黄色液体2.03克。将该黄色液体(2.03克)溶于甲苯(15毫升)中，在0℃下加入氯化甲酰亚甲基三苯基膦(3.12克，10.3毫摩尔)反应10分钟，缓慢滴入三乙胺(1.7毫升)，溶液颜色由黄色变成暗红，转到室温下搅拌4小时。减压除去甲苯，加入二氯甲烷(25毫升)，用40％的甲醇水溶液(3×25毫升)洗涤，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，浓缩后经硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶20)得黄色油状标题产物1.88克(产率71％)。 ¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)δ：9.57(d，J＝7.7Hz，1H)，6.87-6.59(m，1H)，6.19(dd，J＝7.7，15.7Hz，1H)，4.65(s，1H)，4.45(s，1H)，1.96-1.56(m，2H)，1.44(s，10H)，0.96(d，J＝6.6Hz，6H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，ppm)δ：193.3，158.5，155.2，130.6，79.2，49.9，42.9，28.2，24.6，22.6，21.7。 

步骤B：2-膦酰基-4-硝基正丁酸三乙酯 

将多聚甲醛(0.62克，20.6毫摩尔)和哌啶(0.1毫升，1.0毫摩尔)溶于甲醇(50毫升)中，常温下逐滴加入膦酰基乙酸三乙酯(2.31克，10.3毫摩尔)，30分钟加完。经回流24小时后，减压蒸干溶剂得到无色液体2.49克。将该液体(2.49克)溶于甲苯(50毫升)中，加入对甲苯磺酸(0.17克，1.0毫摩尔)，于分水器中加热回流16小时，减压除去溶剂，得黄色液体1.97克。氮气保护下，将该黄色液体(1.97克)溶于硝基甲烷(30毫升)中，置于冰浴下，用恒压滴液漏斗逐滴加入甲醇钠(0.65克，12.0毫摩尔)的甲醇(15毫升)溶液。滴加完毕后缓慢升温到室温，搅拌36小时后加水(10毫升)淬灭反应，分液取有机相，水层用二氯甲烷(3×10毫升)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂，经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶5)得红棕色油状标题产物2.1克(产率73％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)δ：4.54(ddd，J＝7.1，13.9，30.5Hz，2H)，4.32-4.07(m，6H)，3.12(dt，J＝7.3，24.1Hz，1H)，2.59(dq，J＝6.9，14.1Hz，2H)，1.42-1.25(m，9H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，ppm)δ：167.8(d，²J_P-C＝5.6Hz)，73.0(d，³J_P-C＝12.6Hz)，63.1(d，²J_P-C＝6.7Hz)，62.0，42.1(d，¹J_P-C＝131.7Hz)，24.5(d，²J_P-C＝4.2Hz)，16.2(dd，³J_P-C＝2.6，6.0Hz)，14.0。 

步骤C：(4R，5S)-4-((S)-1-叔丁氧羰基氨基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯 

将(S，E)-6-甲基-4-叔丁氧羰基氨基-2-庚烯醛(121毫克，0.5毫摩尔)和2-膦酰基-4-硝基正丁酸三乙酯(149毫克，0.5毫摩尔)溶于二氯甲烷(2毫升)中，在0℃下逐滴加入有机强碱1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)(152毫克，1毫摩尔)，室温下搅拌8小时后，加入饱和氯化铵(2毫升)，分液取有机相，水层用二氯甲烷(3×2毫升)萃取，合并有机相并使用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂，经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶16)得标题化合物35毫克(产率18％)。 ¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)δ：6.96(s，1H)，4.75-4.54(m，1H)，4.27(d，J＝8.3Hz，1H)，4.21(q，J＝7.1Hz，2H)，3.97-3.77(m，1H)，3.21-2.98(m，1H)，2.75(d，J＝15.4Hz，1H)，2.58-2.24(m，2H)，2.16(s，1H)，1.70-1.47(m，2H)，1.43(s，10H)，1.29(t，J＝7.1Hz，3H)，0.98-0.87(m，6H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，ppm)δ：165.4，155.5，137.0，126.9，83.1，79.7，60.8，48.2，41.5，39.6，29.8，28.2，25.0，24.8，23.0，21.9，14.2；HRMS(ESI)：m/z[M+Na]⁺，对于[C₁₉H₃₂N₂O₆Na]⁺计算值为：407.2158，实测值为：407.2156。 

步骤D：(4R，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯 

将(4R，5S)-4-((S)-1-叔丁氧羰基氨基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯(140毫克，0.36毫摩尔)溶于二氯甲烷(2毫升)中，在0℃下加入三氟乙酸(0.3毫升，0.4毫摩尔)后逐渐升温到室温并搅拌3小时，加入饱和碳酸氢钠(5毫升)淬灭反应，水层用二氯甲烷(3×5毫升)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后加入二氯甲烷(2毫升)溶解，在0℃下依次加入二异丙基乙胺(93毫克，0.72毫摩尔)和乙酰氯(37毫克，0.47毫摩尔)，室温搅拌3小时后加入饱和氯化铵(5毫升)淬灭反应，水层用二氯甲烷(3×5毫升)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2)得标题化合物86毫克(产率73％)。 ¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)δ：6.95(s，1H)，5.28(d，J＝8.6Hz，1H)，4.63(td，J＝5.6，9.8Hz，1H)，4.21(q，J＝7.1Hz，2H)，4.15-4.10(m，1H)，3.06-3.01(m，1H)，2.81-2.75(m，1H)，2.66-2.39(m，2H)，2.22-2.05(m，1H)，1.95(s，3H)，1.70-1.37(m，3H)，1.29(t，J＝7.1Hz，3H)，1.39-1.12(m，6H)，0.93(dd，J＝18.6，6.5Hz，6H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，ppm)δ：170.1，165.4，136.8，126.8，83.0，60.9，47.6，40.3，39.6，29.7，25.6，25.1，23.2，23.1，21.8，14.2.HRMS(ESI)：m/z[M+Na]⁺，对于[C₁₆H₂₆N₂O₅Na]⁺计算值为：349.1739，实测值为：349.1724。 

步骤E：(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯羧酸 

将(4R，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯(43毫克，0.13mmol)溶于乙醇(3毫升)中，在0℃下加入锌粉(425毫克，6.5毫摩尔)，缓慢滴加三甲基氯硅烷(0.49毫升，3.9毫摩尔)，搅拌2小时后，减压抽滤除去锌粉，加入氨水(2毫升)，水层用三氯甲烷(3×5毫升)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后经柱层析纯化(甲醇∶二氯甲烷＝1∶30)得淡黄色液体20毫克。将该淡黄色液体(20毫克)溶于四氢呋喃(1毫升)中，加入1N氢氧化钾溶液(1毫升)，常温搅拌3小时。旋转蒸发除去四氢呋喃后加入阳离子交换树脂Amberlite IR-120调节pH＝3-4，抽滤除去树脂，减压下旋转蒸发蒸干溶剂后经C18反相柱层析(流动相为纯水)得标题化合物9.3毫克(产率26％)。 ¹H NMR(400MHz，D₂O，ppm)δ：6.84(s，1H)，4.01(d，J＝9.2Hz，1H)，3.12(td，J＝5.2，10.5Hz，1H)，2.77-2.58(m，1H)，2.43(d，J＝19.0Hz，1H)，2.31-2.17(m，1H)，2.10-1.83(m，5H)，1.62-1.47(m，2H)，1.21(dd，J＝5.5，9.8Hz，1H)，0.81(dd，J＝6.3，17.6Hz，6H)；¹³C NMR(100MHz，D₂O，ppm)δ：175.5，171.4，138.4，127.3，48.4，46.3，40.6，39.9，28.9，24.6，24.3，22.2，21.4，20.9.HRMS(ESI)：m/z[M+Na]⁺，对于[C₁₄H₂₄N₂O₃Na]⁺计算值为：291.1685，实测值为：291.1681。 

实施例2 

化合物(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二铵的制备 

步骤A：(S，E)-6-甲基-4-叔丁氧羰基氨基-2-庚烯醛 

标题化合物根据实施例1步骤A所述的方法制备。 

步骤B：3-硝基丙基-1，1-二膦酸四乙酯 

将亚甲基二膦酸四乙酯(11.7克，40.7毫摩尔)溶于无水甲醇(100毫升)中，依次加入多聚甲醛(6.1克，203.5毫摩尔)和二乙胺(4.2毫升，40.7毫摩尔)，加热回流24小时，减压下旋转蒸发蒸干溶剂得黄色液体12.3克。将该黄色液体(12.3克)溶于甲苯(100毫升)中，加入对甲苯磺酸(344毫克，2.0毫摩尔)，于分水器中加热回流24小时。减压除去溶剂，进一步减压蒸馏取沸点105-125℃/20毫米汞柱馏分，得淡黄色液体9.3克。向硝基甲烷(90毫升)和四氢呋喃(60毫升)的混合溶液中加入甲醇钠(167.0毫克，3.1毫摩尔)，室温搅拌1小时后加入上述得到的淡黄色液体(9.3克)的四氢呋喃(30毫升)溶液，室温搅拌12小时后旋转蒸发蒸干溶剂，加入纯水(60毫升)，用二氯甲烷(3×50毫升)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后经柱层析(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2)得标题化合物9.6克(产率65％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)δ：4.72(t，J＝6.8Hz，2H)，4.27-4.17(m，8H)，2.66-2.44(m，3H)，1.37(t，J＝7.1Hz，12H)；¹³P NMR(162MHz，CDCl₃，ppm)δ：21.79。 

步骤C：(4S，5R)-4-((S)-1-叔丁氧羰基氨基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸二乙酯 

将(S，E)-6-甲基-4-叔丁氧羰基氨基-2-庚烯醛(121毫克，0.5毫摩尔)和3-硝基丙基-1，1-二膦酸四乙酯(181毫克，0.5毫摩尔)溶于二氯甲烷(2毫升)中，在0℃下逐滴加入强碱DBU(152毫克，1毫摩尔)，室温搅拌8小时后加入饱和氯化铵(2毫升)淬灭反应，分液取有机相，水层用二氯甲烷(3×2毫升)萃取，合并有机相并使用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂，经硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2)得标题化合物47毫克(产率21％)。 ¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)δ：6.66(d，J＝21.2Hz，1H)，4.73-4.67(m，2H)，4.08-3.94(m，4H)，3.60-3.44(m，1H)，2.77(s，2H)，2.49-2.10(m，3H)，1.71-1.43(m，2H)，1.36(s，9H)，1.27(t，J＝7.1Hz，6H)， 1.23-1.19(m，1H)，0.81(dd，J＝6.6，20.1Hz，6H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，ppm)δ：153.2，137.9(d，²J_P-C＝7.3Hz)，122.0(d，¹J_P-C＝187.1Hz)，80.2(d，²J_P-C＝11.7Hz)，77.2，59.4(t，²J_P-C＝4.6Hz)，47.4，39.3，38.2，25.7，24.6(d，²J_P-C＝13.9Hz)，22.4，20.9，18.8，13.8(dd，³J_P-C＝2.5，6.2Hz)；¹³P NMR(162MHz，CDCl₃，ppm)δ：17.26.HRMS(ESI)：m/z[M+Na]⁺对于[C₂₀H₃₇N₂O₇PNa]⁺计算值为：471.2236，实测值为：471.2231。 

步骤D：(4S，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸二乙酯 

室温下在(4S，5R)-4-((S)-1-叔丁氧羰基氨基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸二乙酯(224毫克，0.5毫摩尔)中加入2N盐酸乙醚溶液(10毫升)，搅拌3小时后加入饱和碳酸氢钠溶液(25毫升)淬灭反应，水层用二氯甲烷(3×15毫升)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后加入二氯甲烷(2毫升)溶解，在0℃下依次加入二异丙基乙胺(129毫克，1毫摩尔)和乙酰氯(51毫克，0.65毫摩尔)，升到室温搅拌3小时，加入饱和氯化铵(10毫升)淬灭反应，水层用二氯甲烷(3×10毫升)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后经柱层析纯化(甲醇∶二氯甲烷＝1∶30)得标题化合物103毫克(产率53％)。 ¹HNMR(400MHz，CDCl₃，ppm)δ：6.69(d，J＝21.1Hz，1H)，5.96(d，J＝9.4Hz，1H)，4.69(dd，J＝6.3，13.3Hz，1H)，4.21-3.91(m，5H)，2.82(s，2H)，2.59-2.20(m，3H)，1.97(s，3H)，1.60-1.54(m，1H)，1.46-1.18(m，8H)，0.85(dd，J＝6.6，21.4Hz，6H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，ppm)δ：170.5，140.2(d，²J_P-C＝9.0Hz)，124.6(d，¹J_P-C＝187.0Hz)，82.7(d，³J_P-C＝11.7Hz)，62.0(d，²J_P-C＝4.9Hz)，48.4，41.7，40.6，27.9(d，³J_P-C＝11.7Hz)，27.0(d，²J _P-C＝18.2Hz)，24.9，23.5，23.1，21.3，16.3(dd，³J_P-C＝3.4，6.3Hz)；¹³P NMR(162MHz，CDCl₃，ppm)δ：17.10.HRMS(ESI)：m/z[M+Na]⁺对于[C₁₇H₃₁N₂O₆PNa]⁺计算值为：413.1817，实测值为：413.1811。 

步骤E：(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二铵 

将(4S，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸二乙酯(39毫克，0.1毫摩尔)溶于乙醇(3毫升)中，在0℃下加入锌粉(327毫克，5毫摩尔)，缓慢滴加三甲基氯硅烷(0.5毫升，4毫摩尔)，搅拌2小时后，减压抽滤除去锌粉，加入氨水(2毫升)，水层用三氯甲烷(3×5毫升)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后经柱层析纯化(甲醇∶二氯甲烷＝1∶20)得淡黄色液体19毫克。氮气保护下，将该淡黄色液体(19毫克)溶于二氯甲烷(1毫升)中，在0℃下缓慢滴加三甲基溴硅烷(0.13毫升，1毫摩尔)，升到室温搅拌18小时，减压蒸干溶剂，加入超纯水(1.5毫升)搅拌2小时，再减压除去水分，经C18反相柱层析(流动相为0.1N 碳酸氢铵溶液)得标题化合物9.0毫克(产率25％)。 ¹H NMR(400MHz，D₂O，ppm)δ：6.48(d，J＝20.8Hz，1H)，3.96-3.92(m，J＝6.7Hz，1H)，3.23-2.97(m，1H)，2.65-2.46(m，1H)，2.46-2.14(m，2H)，2.10-1.73(m，5H)，1.56-1.39(m，2H)，1.20-1.10(m，1H)，0.89-0.63(m，6H)；¹³C NMR(100MHz，D₂O，ppm)δ：175.5，139.8(d，²J_P-C＝8.5Hz)，125.3(d，¹J_P-C＝184.1Hz)，48.2(d，³J_P-C＝13.4Hz)，46.4，40.5，39.8，28.7(d，³J_P-C＝12.0Hz)，24.9(d，²J_P-C＝19.6Hz)，24.5，22.2，21.5，20.8；¹³P NMR(162MHz，D₂O，ppm)δ：12.46.HRMS(ESI)：m/z[M+Na]⁺对于[C₁₃H₃₁N₄O₄PNa]⁺计算值为：361.1981，实测值为：361.1979。 

实施例3 

化合物(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯的制备 

步骤A：(S，E)-6-甲基-4-乙酰胺基-2-庚烯醛 

将L-亮氨醇(3.52克，30.0毫摩尔)溶于THF(15毫升)中，在零度下加入4NNaOH 15毫升，再加入乙酰氯(2.2毫升，34.0毫摩尔)，零度搅拌过夜。减压下旋转蒸发至溶剂蒸干，加入二氯甲烷(90毫升)后用饱和碳酸氢钠溶液(3×60毫升)洗涤，合并有机相并用无水硫酸钠干燥后，浓缩后用硅胶柱层析纯化得油状液体(S)-2-乙酰胺基-4-甲基戊醇(3.20克，产率67％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)δ：6.22(d，J＝8.1Hz，1H)，4.06-3.98(m，1H)，3.67-3.49(m，2H)，2.00(s，3H)，1.68-1.58(m，1H)，1.41-1.30(m，2H)，0.92(dd，J＝4.1，6.5Hz，6H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，ppm)δ：171.1，65.6，49.9，40.1，24.8，23.2，22.9，22.2。 

将2-碘酰基苯甲酸(1.68克，6.0毫摩尔)加入到(S)-2-乙酰胺基-4-甲基戊醇(582毫克，2.0毫摩尔)的乙酸乙酯(30毫升)溶液中，搅拌回流3小时。冷却至室温后抽滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液(20毫升)和饱和食盐水(20毫升)洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩得无色油状(S)-2-乙酰胺基-4-甲基戊醛283毫克(产率90％)。化合物可不用纯化，直接进行下一步反应。¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)δ：9.47(s，1H)，6.85(d，J＝6.8Hz，1H)，4.41-4.36(m，1H)，1.98(s，4H)，1.70-1.56(m，4H)，0.89-0.87(m，12H)； ¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，ppm)δ：200.2，170.9，57.3，37.3，24.5，22.9，22.6，21.6。 

将(S)-2-乙酰胺基-4-甲基戊醛(283毫克，1.8毫摩尔)溶于甲苯(3毫升)中，在0℃下加入氯化甲酰亚甲基三苯基膦(608毫克，2.0毫摩尔)反应10分钟，缓慢滴入三乙胺(0.34毫升)，溶液颜色由黄色变成暗红，转到室温下搅拌4小时。减压除去甲苯，加入二氯甲烷(5毫升)，用40％的甲醇水溶液(3×5毫升)洗涤，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，浓缩后经硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3)得黄色油状 标题化合物(S，E)-6-甲基-4-乙酰胺基-2-庚烯醛264毫克(产率80％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)δ：9.53-9.44(m，1H)，6.77-6.65(m，1H)，6.19-6.05(m，1H)，5.31-5.22(m，1H)，4.78-4.67(m，1H)，2.01(s，3H)，1.67-1.32(m，3H)，0.93-0.84(m，6H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，ppm)δ：193.5，169.9，157.8，130.8，48.6，42.8，24.7，22.9，22.7，21.9。 

步骤B：2-膦酰基-4-硝基正丁酸三乙酯 

标题化合物根据实施例1步骤B所述的方法制备。 

步骤C：(4R，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯 

将(S，E)-6-甲基-4-乙酰胺基-2-庚烯醛(92毫克，0.5毫摩尔)和2-膦酰基-4-硝基正丁酸三乙酯(149毫克，0.5毫摩尔)溶于二氯甲烷(2毫升)中，在0℃下逐滴加入有机强碱1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)(152毫克，1毫摩尔)，室温下搅拌8小时后，加入饱和氯化铵(2毫升)，分液取有机相，水层用二氯甲烷(3×2毫升)萃取，合并有机相并使用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂，经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2)得标题化合物29毫克(产率18％)。 ¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)δ：6.95(s，1H)，5.28(d，J＝8.6Hz，1H)，4.63(td，J＝5.6，9.8Hz，1H)，4.21(q，J＝7.1Hz，2H)，4.15-4.10(m，1H)，3.06-3.01(m，1H)，2.81-2.75(m，1H)，2.66-2.39(m，2H)，2.22-2.05(m，1H)，1.95(s，3H)，1.70-1.37(m，3H)，1.29(t，J＝7.1Hz，3H)，1.39-1.12(m，6H)，0.93(dd，J＝18.6，6.5Hz，6H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，ppm)δ：170.1，165.4，136.8，126.8，83.0，60.9，47.6，40.3，39.6，29.7，25.6，25.1，23.2，23.1，21.8，14.2.HRMS(ESI)：m/z[M+Na]⁺，对于[C₁₆H₂₆N₂O₅Na]⁺计算值为：349.1739，实测值为：349.1724。 

实施例4 

化合物(4S，5R)-4-((S)-1-(4-甲基苯基磺酰胺基)-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯的制备 

步骤A：(S，E)-6-甲基-4-叔丁氧羰基氨基-2-庚烯醛 

标题化合物根据实施例1步骤A所述的方法制备。 

步骤B：2-膦酰基-4-硝基正丁酸三乙酯 

标题化合物根据实施例1步骤B所述的方法制备。 

步骤C：(4S，5R)-4-((S)-1-叔丁氧羰基氨基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯 

将(S，E)-6-甲基-4-叔丁氧羰基氨基-2-庚烯醛(121毫克，0.5毫摩尔)和2-膦酰基-4-硝基正丁酸三乙酯(149毫克，0.5毫摩尔)溶于二氯甲烷(2毫升)中，在0℃下逐滴加入有机强碱1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)(152毫克，1毫摩尔)，室温下搅拌8小时后，加入饱和氯化铵(2毫升)，分液取有机相，水层用二氯甲烷(3×2毫升)萃取，合并有机相并使用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂，经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶16)得标题化合物31毫克(产率16％)。 ¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)δ：6.94(s，1H)，4.76(dd，J＝6.5，13.7Hz，1H)，4.63(d，J＝9.4Hz，1H)，4.21(q，J＝7.1Hz，2H)，3.74-3.47(m，1H)，3.02-2.91(m，2H)，2.51-2.21(m，3H)，1.73-1.49(m，2H)，1.43(s，10H)，1.30(t，J＝7.1Hz，4H)，0.89(dd，J＝6.5，16.5Hz，6H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，ppm)δ：165.5，155.7，136.4，126.6，82.9，79.5，60.7，49.8，41.7，40.8，28.2，27.8，26.7，24.9，23.4，21.3，14.1.HRMS(ESI)：m/z[M+Na]⁺对于[C₁₉H₃₂N₂O₆Na]⁺计算值为：407.2158，实测值为：407.2153。 

步骤D：(4S，5R)-4-((S)-1-对甲基苯磺酰氨基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯 

将化合物(4S，5R)-4-((S)-1-叔丁氧羰基氨基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯(140毫克，0.36毫摩尔)溶于二氯甲烷(2毫升)中，在0℃下加入三氟乙酸(0.3毫升，0.4毫摩尔)后逐渐升到室温，搅拌5小时后，加入饱和碳酸氢钠(5毫升)淬灭反应，水层用二氯甲烷(3×5毫升)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后加入二氯甲烷(2毫升)溶解，在0℃下依次加入三乙胺(73毫克，0.72毫摩尔)和对甲苯磺酰氯(89毫克，0.47毫摩尔)，室温搅拌5小时后，加入饱和氯化铵(5毫升)淬灭反应，水层用二氯甲烷(3×5毫升)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1)得标题化合物(82毫克，产率52％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)δ：7.65-7.63(m，2H)，7.25-7.21(m，2H)，6.86(s，1H)，4.90-4.68(m，1H)，4.62(d，J＝8.4Hz，1H)，4.25-4.06(m，2H)，3.69-3.65(m， 1H)，3.50-3.30(m，1H)，3.17-3.11(m，1H)，2.55-2.51(m，1H)，2.36(s，3H)，2.30-2.06(m，2H)，1.36-1.22(m，9H)，0.72-0.52(m，6H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，ppm)δ：164.3，142.9，135.9，135.8，128.8，126.3，126.2，125.9，81.5，59.9，49.9，41.5，36.9，29.9，28.7，23.5，23.1，21.5，20.7，20.5，13.2。 

实施例5 

化合物(4S，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯的制备 

步骤A：(S，E)-6-甲基-4-叔丁氧羰基氨基-2-庚烯醛 

标题化合物根据实施例1步骤A所述的方法制备。 

步骤B：2-膦酰基-4-硝基正丁酸三乙酯 

标题化合物根据实施例1步骤B所述的方法制备。 

步骤C：(4R，5S)-4-((S)-1-叔丁氧羰基氨基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯 

标题化合物根据实施例3步骤C所述的方法制备。 

步骤D：(4S，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯 

将化合物(4S，5R)-4-((S)-1-叔丁氧羰基氨基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯(140毫克，0.36毫摩尔)溶于二氯甲烷(2毫升)中，在0℃下加入三氟乙酸(0.3毫升，0.4毫摩尔)，升到室温搅拌3小时后，加入饱和碳酸氢钠(5毫升)淬灭反应，水层用二氯甲烷(3×5毫升)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后加入二氯甲烷(2毫升)溶解，在0℃下依次加入二异丙基乙胺(93毫克，0.72毫摩尔)和乙酰氯(37毫克，0.47毫摩尔)，室温搅拌3小时后加入饱和氯化铵(5毫升)淬灭反应，水层用二氯甲烷(3×5毫升)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压 除去溶剂后经柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3)得标题化合物(85毫克，产率73％)。 ¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)δ：6.92(s，1H)，5.38(d，J＝9.5Hz，1H)，4.69(td，J＝5.6，8.3，Hz，1H)，4.21(q，J＝7.1Hz，2H)，4.14-4.00(m，1H)，3.15-2.82(m，2H)，2.62-2.24(m，3H)，2.00(s，3H)，1.57(qd，J＝6.6，13.2，Hz，1H)，1.33-1.25(m，5H)，0.89(dd，J＝6.6，13.5Hz，6H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，ppm)δ：170.3，165.5，136.5，126.7，83.3，60.9，49.0，42.2，41.1，28.6，28.0，25.1，23.4，23.2，21.5，14.2.HRMS(ESI)：m/z[M+Na]⁺对于[C₁₆H₂₆N₂O₅Na]⁺计算值为：349.1739，实测值为：349.1733. 

实施例6 

化合物(4R，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸二乙酯的制备 

步骤A：(S，E)-6-甲基-4-叔丁氧羰基氨基-2-庚烯醛 

标题化合物根据实施例1步骤A所述的方法制备。 

步骤B：3-硝基丙基-1，1-二膦酸四乙酯 

标题化合物根据实施例2步骤B所述的方法制备。 

步骤C：(±)-4-(1-叔丁氧羰基胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸二乙酯非对映异构体 

将(S，E)-6-甲基-4-叔丁氧羰基氨基-2-庚烯醛(121毫克，0.5毫摩尔)和3-硝基丙基-1，1-二膦酸四乙酯(181毫克，0.5毫摩尔)溶于二氯甲烷(2毫升)中，在0℃下逐滴加入强碱DBU(152毫克，1毫摩尔)，室温搅拌8小时后加入饱和氯化铵(2毫升)淬灭反应，分液取有机相，水层用二氯甲烷(3×2毫升)萃取，合并有机相并使用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂，经硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2)得标题化合物61毫克(产率27％)。 

步骤D：(4R，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸二乙酯 

室温下，在4-((S)-1-叔丁氧羰基氨基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸二乙酯非对映异构体(224毫克，0.5毫摩尔)中加入2N盐酸乙醚溶液(10毫升)，搅拌3小时后，加入饱和碳酸氢钠(25毫升)淬灭反应，水层用二氯甲烷(3×15毫升)萃取，合并有机相然后用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后加入二氯甲烷(2毫升)溶解，在0℃下加入二异丙基乙胺(129毫克，1毫摩尔)，再加入乙酰氯(51毫克，0.65毫摩尔)，升到室温搅拌3小时，加入饱和氯化铵(10毫升)淬灭反应，水层用二氯甲烷(3×10毫升)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后经柱层析纯化(甲醇∶二氯甲烷＝1∶30)得标题化合物45毫克(产率23％)。 ¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)δ：6.74(d，J＝21.4Hz，1H)，6.40-6.37(m，1H)，4.63(td，J＝5.6，9.6Hz，1H)，4.23-3.99(m，5H)，2.92-2.59(m，2H)，2.56-2.47(m，2H)，2.31-2.16(m，1H)，1.96(s，3H)，1.68-1.43(m，2H)，1.36(dt，J＝4.9，14.1Hz，6H)，1.27-1.21(m，1H)，0.92(dd，J＝6.5，15.3Hz，6H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，ppm)δ：170.6，141.3(d，²J_P-C＝9.0Hz)，124.3(d，¹J_P-C＝188.6Hz)，82.8(d，³J_P-C＝11.8Hz)，62.0(dd，²J_P-C＝5.8，8.5Hz)，46.6，41.0，39.2，30.0(d，³J_P-C＝11.4Hz)，25.3(d，²J_P-C＝18.4Hz)，25.0，22.9，21.9，16.3(dd，³J_P-C＝3.4，6.3Hz)；¹³P NMR(162MHz，CDCl₃，ppm)δ：16.82.HRMS(ESI)：m/z[M+Na]⁺对于[C₁₇H₃₁N₂O₆PNa]⁺计算值为：413.1817，实测值为：413.1811. 

实施例7 

化合物(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸二乙酯的制备 

步骤A：(S，E)-6-甲基-4-叔丁氧羰基氨基-2-庚烯醛 

标题化合物根据实施例1步骤A所述的方法制备。 

步骤B：3-硝基丙基-1，1-二膦酸四乙酯 

标题化合物根据实施例2步骤B所述的方法制备。 

步骤C：(±)-4-(1-叔丁氧羰基氨基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸二乙酯非对映异构体 

标题化合物根据实施例5步骤C所述的方法制备。 

步骤D：(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸二乙酯 

室温下，在4-((S)-1-叔丁氧羰基氨基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸二乙酯非对映异构体(224毫克，0.5毫摩尔)中加入2N盐酸乙醚溶液(10毫升)，搅拌3小时后，加入饱和碳酸氢钠(25毫升)淬灭反应，水层用二氯甲烷(3×15毫升)萃取，合并有机相然后用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后加入二氯甲烷(2毫升)溶解，在0℃下加入二异丙基乙胺(129毫克，1毫摩尔)，再加入乙酰氯(51毫克，0.65毫摩尔)，升到室温搅拌3小时，加入饱和氯化铵(10毫升)淬灭反应，水层用二氯甲烷(3×10毫升)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后经柱层析纯化(甲醇∶二氯甲烷＝1∶30)得标题化合物61毫克(产率31％)。 ¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)δ：6.74(d，J＝21.3Hz，1H)，5.49(d，J＝9.1Hz，1H)，4.86(s，1H)，4.11-3.90(m，5H)，2.90-2.53(m，2H)，2.43-2.10(m，3H)，1.87(s，3H)，1.64-1.47(m，2H)，1.29-1.23(m，7H)，0.85(dd，J＝6.5，16.3Hz，6H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃，ppm)δ：170.4，141.4(d，²J_P-C＝9.0Hz)，123.9(d，¹J_P-C＝186.3Hz)，79.7(d，³J_P-C＝11.1Hz)，62.1(d，²J_P-C＝5.0Hz)，61.8(d，²J_P-C＝5.9Hz)，48.5，41.5，40.1，28.4(d，³J_P-C＝11.9Hz)，27.0(d，²J_P-C＝18.2Hz)，24.9，23.6，23.2，21.5，16.3(t，³J_P-C＝6.7Hz)；¹³PNMR(162MHz，CDCl₃，ppm)δ：17.66.HRMS(ESI)：m/z[M+Na]⁺对于[C₁₇H₃₁N₂O₆PNa]⁺计算值为：413.1817，实测值为：413.1811. 

实施例8 

化合物(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯羧酸的制备 

同实施例1步骤A-E，得到中间体(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯羧酸乙酯。取0.25毫摩尔中间体(74毫克)，溶于乙腈(8毫升)中，加入三乙胺(30毫克，0.25毫摩尔)，无水碳酸钾(240毫克)，碘乙烷(270毫克，1.74 毫摩尔)，80度反应24小时，加水5毫升分层，取有机层。有机层再用水洗后，无水硫酸钠干燥，减压除溶剂，柱层析得到液体45毫克，产率51％。将该浅色液体(45毫克)溶于四氢呋喃(2毫升)中，加入1N氢氧化钾溶液(2毫升)，常温搅拌4小时。旋转蒸发除去四氢呋喃后加入阳离子交换树脂Amberlite IR-120调节pH＝4-5，过滤，树脂使用10％氨水洗涤，收集洗液减压脱除溶剂，40度真空干燥后得标题化合物产物，产率55％。HRMS(ESI)：m/z[M-H]^-对于[C₁₈H₃₁N₂O₃]^-计算值为：323.2340，实测值为：323.2347。 

实施例9 

化合物(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯羧酸的制备 

同实施例1步骤A-E，得到中间体(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯羧酸乙酯。取0.25毫摩尔中间体(74毫克)，溶于二甲基甲酰胺(8毫升)中，加入三乙胺(0.1克，0.99毫摩尔)，N，N′-二-Boc-S-甲基异硫脲(92毫克，0.31毫摩尔)及HgCl₂(80毫克，0.25毫摩尔)，室温反应40小时后，加水4毫升，使用乙酸乙酯萃取(15毫升×3)，有机层合并后使用饱和食盐水洗(10毫升×2)，再经无水硫酸钠干燥，减压除溶剂，硅胶柱层析纯化得固体(67mg，产率50％)。将固体(67毫克，0.12毫摩尔)溶于二氯甲烷(8毫升)中，加入三氟乙酸0.3毫升，室温搅拌16小时，减压除溶剂。所得固体乙醚洗除杂质后，溶于2毫升四氢呋喃中，加入氢氧化钠溶液(2N)2毫升，室温搅拌4小时，减压除四氢呋喃，使用钠型阳离子交换树脂Amberlite-IR 120调节pH到4-5，过滤，滤液弃掉。阳离子交换树脂使用10％的氨水洗脱，收集洗脱液，减压除水，真空干燥，得标题化合物产物(17毫克，两步产率45％)。HRMS(ESI)：m/z[M+Na]⁺对于[C₁₅H₂₆N₄NaO₃]⁺计算值为：333.1903，实测值为：333.1907。 

实施例10 

化合物(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸二铵的制备 

同实施例2步骤A-E，得到中间体(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二乙酯，同实施例7，得中间体(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5- 二乙基氨基-1-环己烯膦酸二乙酯，同实施例2步骤E，得标题化合物。HRMS(ESI)：m/z[M+Na]⁺对于[C₁₇H₃₉N₄NaO₄P]⁺计算值为：417.2607，实测值为：417.2611。 

实施例11 

化合物(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二铵的制备 

同实施例2步骤A-E，得到中间体(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二乙酯，同实施例8，得中间体(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二乙酯，同实施例2步骤E，得标题化合物。HRMS(ESI)：m/z[M+Na]⁺对于[C₁₄H₃₃N₆NaO₄P]⁺计算值为：403.2199，实测值为：403.2197。 

依照实施例1-11的方法，改变其中的反应原料，还可以制备以下的化合物： 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯羧酸， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯羧酸钠， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯羧酸盐酸盐， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯羧酸， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯羧酸钠， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯羧酸盐酸盐， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯羧酸， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯羧酸钠， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯羧酸盐酸盐， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯羧酸盐酸盐， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-羟基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯羧酸钠， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯羧酸盐酸盐， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯羧酸钠， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯羧酸盐酸盐， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氰基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-巯基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯羧酸对甲苯磺酸盐， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯羧酸对甲苯磺酸盐， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯羧酸对甲苯磺酸盐， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-2-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-2-乙基丁基)-5-氨基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-2-甲基丙基)-5-氨基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基乙基)-5-氨基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基丙基)-5-氨基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基丁基)-5-氨基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-2-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-2-乙基丁基)-5-胍基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-2-甲基丙基)-5-胍基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基乙基)-5-胍基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基丙基)-5-胍基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基丁基)-5-胍基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-2-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-2-乙基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-2-甲基丙基)-5-二乙基氨基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基乙基)-5-二乙基氨基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基丙基)-5-二乙基氨基-1-环己烯羧酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯羧酸， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯羧酸， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯羧酸钠， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯羧酸盐酸盐， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯羧酸对甲苯磺酸盐， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯羧酸， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯羧酸钠， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯羧酸盐酸盐， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯羧酸对甲苯磺酸盐， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯羧酸， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯羧酸钠， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯羧酸盐酸盐， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯羧酸对甲苯磺酸盐， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-羟基-1-环己烯羧酸， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氰基-1-环己烯羧酸， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-巯基-1-环己烯羧酸， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二铵， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二钠， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二铵盐酸盐， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二铵， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二钠， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二铵盐酸盐， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸二铵， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸二钠， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸二铵盐酸盐， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二钠， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二铵盐酸盐， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二钠盐酸盐， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二铵对甲苯磺酸盐， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二钠对甲苯磺酸盐， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二钠， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二铵盐酸盐， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二钠盐酸盐， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二铵对甲苯磺酸盐， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二钠对甲苯磺酸盐， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸二钠， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸二铵盐酸盐， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸二钠盐酸盐， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸二铵对甲苯磺酸盐， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸二钠对甲苯磺酸盐， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-巯基-1-环己烯膦酸， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-羟基-1-环己烯膦酸， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氰基-1-环己烯膦酸， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-巯基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-羟基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氰基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二钠， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二铵盐酸盐， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二钠盐酸盐， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二铵对甲苯磺酸盐， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二钠对甲苯磺酸盐， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二钠， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二铵盐酸盐， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二钠盐酸盐， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二铵对甲苯磺酸盐， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二钠对甲苯磺酸盐， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸二钠， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5二乙基-氨基-1-环己烯膦酸二铵盐酸盐， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸二钠盐酸盐， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸二铵对甲苯磺酸盐， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸二钠对甲苯磺酸盐， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-巯基-1-环己烯膦酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-羟基-1-环己烯膦酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氰基-1-环己烯膦酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-巯基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-羟基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氰基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-2-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-2-乙基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-2-甲基丙基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基乙基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基丙基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-2-甲基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-2-乙基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-2-甲基丙基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基乙基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基丙基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基丁基)-5-胍基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-2-甲基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-2-乙基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-2-甲基丙基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基乙基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基丙基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基丁基)-5-二乙基氨基-1-环己烯膦酸二铵， 

(4R，5S)-4-((S)-1-叔丁氧羰基氨基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯， 

(4S，5R)-4-((S)-1-叔丁氧羰基氨基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯， 

(±)-4-(1-叔丁氧羰基氨基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯， 

(4R，5S)-4-((S)-1-(4-甲基苯基磺酰胺基)-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯， 

(4S，5R)-4-((S)-1-(4-甲基苯基磺酰胺基)-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯， 

(±)-4-(1-(4-甲基苯基磺酰胺基)-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯 

(4R，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯， 

(4S，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯羧酸乙酯， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯羧酸乙酯， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯羧酸乙酯， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯羧酸乙酯， 

(4S，5R)-4-((S)-1-叔丁氧羰基氨基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸二乙酯， 

(4R，5S)-4-((S)-1-叔丁氧羰基氨基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸二乙酯， 

(±)-4-(1-叔丁氧羰基氨基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸二乙酯， 

(4S，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸二乙酯， 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-硝基-1-环己烯膦酸二乙酯， 

(4R，5R)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二乙酯， 

(4S，5S)-4-((S)-1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二乙酯，以及 

(±)-4-(1-乙酰胺基-3-甲基丁基)-5-氨基-1-环己烯膦酸二乙酯。本发明的化合物对神经氨酸酶的抑制和细胞中流感病毒的抑制是使用以下描述的程序进行测试的。 

测试实施例 

测试实施例A：神经氨酸酶抑制活性的测试 

将测试化合物溶解在DMSO中。将重组H1N1神经氨酸酶(rH1N1 Neuraminidase，R&D Systems，Catalog # 4858-NM)以缓冲溶液(50mM Tris，5mM CaCl₂，200mMNaCl，pH＝7.5)稀释至0.10ng/μL。将底物2’-(4-甲基伞形酮基)-α-D-N-乙酰基神经氨酸(2’-(4-Methylumbelliferyl)-α-D-N-acetylneuraminic acid)(Sigma，Catalog#M8639)以缓冲溶液稀释至400μM。在适用于荧光检测的96孔板中加入上述神经氨酸酶溶液50μL(0.10ng/μL)，再加入10μL待测化合物溶液、15μL缓冲液，混匀后37℃孵育20min。加入25μL底物，混匀后以酶标仪(Tecan M1000型)检测荧光强度(激发光365nm、发射光445nm、带宽5nm)。抑制百分比值是根据化合物的平均荧光强度相对于没有测定化合物(空白)情况下的平均荧光强度计算得出的。表1给出了每个化合物要达到50％抑制率所需要的浓度(IC₅₀，μM)。同时，利用奥斯他韦(Oseltamivir)进行了对照试验。 

实施例B：MDCK细胞中甲型流感病毒(汉防95-359，H3N2)抑制活性的测试 

将测试化合物溶解在DMSO中。将MDCK(狗肾)细胞接种至96孔培养板中，置于5％CO₂，37℃培养24小时。在MDCK细胞中加入流感甲型病毒(汉防95-359，H3N2)10^-5，37℃吸附2小时后倾去病毒液，分别加入不同稀释度的测试化合物的维持液。同时进行病毒对照和细胞对照实验，37℃培养至病毒对照组病变程度(CPE)达4+时观察各组细胞病变的程度(CPE)(约36小时)。表1给出了每个化合物要达到50％抑制率所需要的浓度(IC₅₀，μg/mL)。同时，利用奥斯他韦(Oseltamivir)进行了对照试验。 

实施例C：MDCK细胞中乙型流感病毒(济防97-13)抑制活性的测试 

将测试化合物溶解在DMSO中。将MDCK(狗肾)细胞接种至96孔培养板中，置于5％CO₂，37℃培养24小时。再MDCK细胞中加入乙型流感病毒(济防97-13)1/310^-2，37℃吸附2小时后倾去病毒液，分别加入不同稀释度的测试化合物的维持液。 同时进行病毒对照和细胞对照实验，37℃培养待病毒对照组病变程度(CPE)达4+时观察各组细胞病变程度(CPE)(约36小时)。表1给出了每个化合物要达到50％抑制率所需要的浓度(IC₅₀，μg/mL)。同时，利用奥斯他韦(Oseltamivir)进行了对照试验。 

表1 

从表1的结果可以看出，实施例1和2的化合物对神经氨酸酶达到50％抑制率所需的浓度高于奥斯他韦(Oseltamivir)，但也能达到μM级别，有不错的神经氨酸酶抑制活性。类似地，实施例1和2的化合物对MDCK细胞中的甲型流感病毒(汉防95-359)和乙型流感病毒(济防97-13)达到50％抑制率所需的浓度高于奥斯他韦(Oseltamivir)，但也显示了一定的抑制活性。 

本发明的通式I化合物可用于抑制神经氨酸酶，如重组H1N1神经氨酸酶，甲型流感病毒、乙型流感病毒，如甲型流感病毒汉防95-359(H3N2)，粤防72-243(H3N2)，济防90-15(H3N2)，江西东湖2006-312(H3N2)，山东93-9(H3N2)，浙防98-10(H3N2)，悉尼97-5(H3N2)，广东罗湖2006-219(H1N1)，北京97-53(H1N1)，北京96-25(H1N1)，桂防95-10(H1N1)，乙型流感病毒济防97-13，北京97-172，北京93-184，深圳97-12，深圳2005-155等。 

本发明提供的是一类新的C-4’位含有烷基与酰胺基取代的环己烯化合物，其具有流感病毒神经氨酸酶抑制活性，可以用于制备治疗或预防流感病毒的药物，避免流感病毒的变异而引起的抗药性。 

尽管已经结合当前考虑的示例性实施方式对本发明作了描述，但是应当理解，本发明并不局限于所披露的实施方式，包含在本发明的精神和所附权利要求范围内的各种修改和等同替换都应包括在本申请的保护范围之内。