抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物及其制备方法

摘要

本发明涉及医药技术领域，是一种抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物及其制备方法，其按下述步骤得到：第一步，将阿育魏实种子粉碎成阿育魏实碎料并过10目筛至50目筛，向阿育魏实碎料中加入重量是阿育魏实种子6倍重量份至20倍重量份的70%至95%乙醇水溶液进行乙醇提取，浸泡至透心，在温度为80℃至90℃下加热回流提取1次至3次。本发明方法过程简单，提高了阿育魏实资源的利用率，阿育魏实乙酸乙酯提取物具有较好的激活酪氨酸酶的作用，并且通过使用比目前临床上治疗白癜风药物较少的剂量，便能达到与使用现有临床上治疗白癜风药物同样的药效，在提高疗效的同时，大大节约了阿育魏实资源、降低了成本。

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，是一种抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物及其制备方法。

背景技术

阿育魏实（Trachyspermum ammi L. Sprague）为伞形科糙果芹属植物阿育魏的成熟果实，是传统的维吾尔药材。主产我国新疆喀什、和田地区。国外埃及、伊朗、印度和阿富汗等地亦有栽培。史料记载，阿育魏实为味辛性热，具有散寒祛湿，理气开胃，行气宽中，软坚消炎的功能。所制成的复方制剂消白软膏，在维医中用来清除局部异常粘液质，散寒利湿，治疗白癜风。目前，还没有关于阿育魏实的新药应用于临床，阿育魏实这一良好的药用资源尚未得到充分利用。

白癜风是一种与自身免疫有关的皮肤色素脱失症，好发于暴露部位而影响美观，症状为皮肤出现局限性或泛发性色素脱失斑，是由皮肤和毛囊的黑色素细胞内酪氨酸酶系统的功能减退或丧失而引起。中医称之为白癜、白驳风。白癜风症状虽无痛痒，却影响美容，常给患者造成心理压力，对大部分患者的生活、学习、工作、社交等方面都带来了许多负面因素。白癜风在全世界患病率为0.5%～4.0%，是世界皮肤病三大顽症之一。我国患病率约0.1%～2.7%，且呈逐年上升的趋势。可发生于任何年龄，10～30岁为发病高峰，无性别差异。白癜风的发病原因到目前为止还不十分清楚，因此，治疗起来存在一定困难，无法从病因上去寻找解决方法。治疗白癜风的良药极少，疗效不满意，有的患者病急乱投医，盲目用药的后果可能会导致病情的进一步恶化，所以研究寻找有效治疗白癜风的新型药物是非常迫切需要的。现代医学认为治疗白癜风应从色素生成的关键酶一一酪氨酸酶入手，用离体酶学方法从治疗白癜风的药物中筛选出对酪氨酸酶有激活作用的药，并对所筛选出的药物进行致色素作用的动物实验，以找出在活体中能促进皮肤色素生成和黑色素细胞增生的药物，使皮肤重新出现色素沉着，从而来达到治疗白癜风的目的。

目前中国还没有与阿育魏实提取物有关的专利文献公开。与阿育魏实有关的文献报道也相对较少，主要涉及其种子挥发油化学成分分析以及不同溶剂提取物的化学成分分离，例如刘力等《阿育魏实化学成分的GC-MS分析》（分析测试学报[J]2004,23（3）100-102）；吴霞等《阿育魏实的化学成分研究》（中国中药杂志[J]2005,30（13）1028-1029）；马庆东等《维吾尔药阿育魏实化学成分的分离与鉴定》（沈阳药科大学学报[J]2011，（7）526-529）等文献。

但是，上述已经公开的各种研究主要针对其化学成分的分离，而药理及药理活性基础方面的研究主要是针对水提取物对抑菌及杀真菌的作用研究，但水提物纯度低，成分复杂，且使大量无效成分包含其中，使服用量大，导致资源严重浪费。

发明内容

本发明提供了一种抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物及其制备方法，克服了上述现有技术之不足，其能有效解决育魏实未被充分利用的问题。本发明方法使提取物的成分更加集中，提高了阿育魏实资源的利用率，特别是本发明阿育魏实提取物在用于制备白癜风药物方面的应用。

本发明的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物按下述步骤得到：第一步，将阿育魏实种子粉碎成阿育魏实碎料并过10目筛至50目筛，向阿育魏实碎料中加入重量是阿育魏实种子6倍重量份至20倍重量份的70%至95%乙醇水溶液进行乙醇提取，浸泡至透心，在温度为80℃至90℃下加热回流提取1次至3次，每次提取0.5小时至2小时，过滤得到第一滤液和滤渣，滤渣取出晾干后得到干滤渣，向干滤渣中加入重量是干滤渣6倍重量份至20倍重量份的30%至70%的乙醇水溶液进行乙醇提取，在温度为80℃至90℃下加热回流提取1次至3次，每次提取0.5小时至2小时，过滤得到第二滤液，合并第一滤液和第二滤液后减压回收乙醇进行浓缩干燥得到的提取物Ⅰ；

第二步，向提取物Ⅰ中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的水，在常温下搅拌或振摇5分钟至30分钟使其溶解或混悬后得到悬溶液，在常温下向悬溶液中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的石油醚进行石油醚萃取，搅拌或振摇5分钟至30分钟，静置2小时至12小时，弃去石油醚层后得到初次石油醚萃取剩余部分，然后向初次石油醚萃取剩余部分中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的石油醚接着进行再次石油醚萃取，石油醚萃取操作重复3次至5次后得到石油醚萃取剩余部分；

第三步，在常温下向石油醚萃取剩余部分中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的三氯甲烷进行三氯甲烷萃取，搅拌或振摇5分钟至30分钟，静置2小时至12小时，弃去三氯甲烷层后得到初次三氯甲烷萃取剩余部分，然后向初次三氯甲烷萃取剩余部分中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的三氯甲烷接着进行再次三氯甲烷萃取，三氯甲烷萃取操作重复3次至5次后得到三氯甲烷萃取剩余部分；

第四步，在常温下向三氯甲烷萃取剩余部分中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的乙酸乙酯进行乙酸乙酯萃取，搅拌或振摇5分钟至30分钟，静置2小时至12小时，收集乙酸乙酯层，收集乙酸乙酯层后得到乙酸乙酯萃取剩余部分，再向乙酸乙酯萃取剩余部分中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的乙酸乙酯进行再次乙酸乙酯萃取，该操作重复3次至5次，合并3次至5次乙酸乙酯萃取所得到的乙酸乙酯层，并对合并的乙酸乙酯层进行干燥得到乙酸乙酯提取物。

本发明的技术方案之二是通过以下措施来实现的：一种抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物的制备方法，按下述步骤进行：第一步，将阿育魏实种子粉碎成阿育魏实碎料并过10目筛至50目筛，向阿育魏实碎料中加入重量是阿育魏实种子6倍重量份至20倍重量份的70%至95%乙醇水溶液进行乙醇提取，浸泡至透心，在温度为80℃至90℃下加热回流提取1次至3次，每次提取0.5小时至2小时，过滤得到第一滤液和滤渣，滤渣取出晾干后得到干滤渣，向干滤渣中加入重量是干滤渣6倍重量份至20倍重量份的30%至70%的乙醇水溶液进行乙醇提取，在温度为80℃至90℃下加热回流提取1次至3次，每次提取0.5小时至2小时，过滤得到第二滤液，合并第一滤液和第二滤液后减压回收乙醇进行浓缩干燥得到的提取物Ⅰ；

第二步，向提取物Ⅰ中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的水，在常温下搅拌或振摇5分钟至30分钟使其溶解或混悬后得到悬溶液，在常温下向悬溶液中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的石油醚进行石油醚萃取，搅拌或振摇5分钟至30分钟，静置2小时至12小时，弃去石油醚层后得到初次石油醚萃取剩余部分，然后向初次石油醚萃取剩余部分中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的石油醚接着进行再次石油醚萃取，石油醚萃取操作重复3次至5次后得到石油醚萃取剩余部分；

第三步，在常温下向石油醚萃取剩余部分中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的三氯甲烷进行三氯甲烷萃取，搅拌或振摇5分钟至30分钟，静置2小时至12小时，弃去三氯甲烷层后得到初次三氯甲烷萃取剩余部分，然后向初次三氯甲烷萃取剩余部分中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的三氯甲烷接着进行再次三氯甲烷萃取，三氯甲烷萃取操作重复3次至5次后得到三氯甲烷萃取剩余部分；

第四步，在常温下向三氯甲烷萃取剩余部分中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的乙酸乙酯进行乙酸乙酯萃取，搅拌或振摇5分钟至30分钟，静置2小时至12小时，收集乙酸乙酯层，收集乙酸乙酯层后得到乙酸乙酯萃取剩余部分，再向乙酸乙酯萃取剩余部分中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的乙酸乙酯进行再次乙酸乙酯萃取，该操作重复3次至5次，合并3次至5次乙酸乙酯萃取所得到的乙酸乙酯层，并对合并的乙酸乙酯层进行干燥得到乙酸乙酯提取物。

下面是对上述发明技术方案的进一步优化或/和改进：

上述第一步中，加完70%至95%乙醇水溶液进行乙醇提取时，在温度为86℃下进行加热回流提取，加完30%至70%乙醇水溶液进行乙醇提取时，在温度为86℃下进行加热回流提取，加热回流提取的加热方式均为水浴加热。

上述第一步中减压回收乙醇进行浓缩干燥是在温度为50℃至70℃、压力为-0.06Mpa至-0.1Mpa条件下进行的。

上述第四步中对合并后的乙酸乙酯层进行干燥,干燥是在50℃至80℃下的鼓风干燥箱内进行或者是在进风温度130℃至190℃、出风温度30℃至90℃的喷雾干燥下进行的。

本发明方法过程简单，提高了阿育魏实资源的利用率，阿育魏实乙酸乙酯提取物具有较好的激活酪氨酸酶的作用，并且通过使用比目前临床上治疗白癜风药物较少的剂量，便能达到与使用现有临床上治疗白癜风药物同样的药效，在提高疗效的同时，大大节约了阿育魏实资源、降低了成本。

具体实施方式

本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。

下面结合实施例对本发明作进一步描述：

实施例1，该抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物按下述制备方法得到：第一步，将阿育魏实种子粉碎成阿育魏实碎料并过10目筛至50目筛，向阿育魏实碎料中加入重量是阿育魏实种子6倍重量份至20倍重量份的70%至95%乙醇水溶液进行乙醇提取，浸泡至透心，在温度为80℃至90℃下加热回流提取1次至3次，每次提取0.5小时至2小时，过滤得到第一滤液和滤渣，滤渣取出晾干后得到干滤渣，向干滤渣中加入重量是干滤渣6倍重量份至20倍重量份的30%至70%的乙醇水溶液进行乙醇提取，在温度为80℃至90℃下加热回流提取1次至3次，每次提取0.5小时至2小时，过滤得到第二滤液，合并第一滤液和第二滤液后减压回收乙醇进行浓缩干燥得到的提取物Ⅰ；

第二步，向提取物Ⅰ中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的水，在常温下搅拌或振摇5分钟至30分钟使其溶解或混悬后得到悬溶液，在常温下向悬溶液中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的石油醚进行石油醚萃取，搅拌或振摇5分钟至30分钟，静置2小时至12小时，弃去石油醚层后得到初次石油醚萃取剩余部分，然后向初次石油醚萃取剩余部分中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的石油醚接着进行再次石油醚萃取，石油醚萃取操作重复3次至5次后得到石油醚萃取剩余部分；

第三步，在常温下向石油醚萃取剩余部分中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的三氯甲烷进行三氯甲烷萃取，搅拌或振摇5分钟至30分钟，静置2小时至12小时，弃去三氯甲烷层后得到初次三氯甲烷萃取剩余部分，然后向初次三氯甲烷萃取剩余部分中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的三氯甲烷接着进行再次三氯甲烷萃取，三氯甲烷萃取操作重复3次至5次后得到三氯甲烷萃取剩余部分；

第四步，在常温下向三氯甲烷萃取剩余部分中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的乙酸乙酯进行乙酸乙酯萃取，搅拌或振摇5分钟至30分钟，静置2小时至12小时，收集乙酸乙酯层，收集乙酸乙酯层后得到乙酸乙酯萃取剩余部分，再向乙酸乙酯萃取剩余部分中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份至4倍重量份的乙酸乙酯进行再次乙酸乙酯萃取，该操作重复3次至5次，合并3次至5次乙酸乙酯萃取所得到的乙酸乙酯层，并对合并的乙酸乙酯层进行干燥得到乙酸乙酯提取物。

实施例2，该抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物按下述制备方法得到：第一步，将阿育魏实种子粉碎成阿育魏实碎料并过10目筛或50目筛，向阿育魏实碎料中加入重量是阿育魏实种子6倍重量份或20倍重量份的70%或95%乙醇水溶液进行乙醇提取，浸泡至透心，在温度为80℃或90℃下加热回流提取1次或3次，每次提取0.5小时或2小时，过滤得到第一滤液和滤渣，滤渣取出晾干后得到干滤渣，向干滤渣中加入重量是干滤渣6倍重量份或20倍重量份的30%或70%的乙醇水溶液进行乙醇提取，在温度为80℃或90℃下加热回流提取1次或3次，每次提取0.5小时或2小时，过滤得到第二滤液，合并第一滤液和第二滤液后减压回收乙醇进行浓缩干燥得到的提取物Ⅰ；

第二步，向提取物Ⅰ中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份或4倍重量份的水，在常温下搅拌或振摇5分钟或30分钟使其溶解或混悬后得到悬溶液，在常温下向悬溶液中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份或4倍重量份的石油醚进行石油醚萃取，搅拌或振摇5分钟或30分钟，静置2小时或12小时，弃去石油醚层后得到初次石油醚萃取剩余部分，然后向初次石油醚萃取剩余部分中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份或4倍重量份的石油醚接着进行再次石油醚萃取，石油醚萃取操作重复3次或5次后得到石油醚萃取剩余部分；

第三步，在常温下向石油醚萃取剩余部分中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份或4倍重量份的三氯甲烷进行三氯甲烷萃取，搅拌或振摇5分钟或30分钟，静置2小时或12小时，弃去三氯甲烷层后得到初次三氯甲烷萃取剩余部分，然后向初次三氯甲烷萃取剩余部分中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份或4倍重量份的三氯甲烷接着进行再次三氯甲烷萃取，三氯甲烷萃取操作重复3次或5次后得到三氯甲烷萃取剩余部分；

第四步，在常温下向三氯甲烷萃取剩余部分中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份或4倍重量份的乙酸乙酯进行乙酸乙酯萃取，搅拌或振摇5分钟或30分钟，静置2小时或12小时，收集乙酸乙酯层，收集乙酸乙酯层后得到乙酸乙酯萃取剩余部分，再向乙酸乙酯萃取剩余部分中加入重量是提取物Ⅰ1倍重量份或4倍重量份的乙酸乙酯进行再次乙酸乙酯萃取，该操作重复3次或5次，合并3次或5次乙酸乙酯萃取所得到的乙酸乙酯层，并对合并的乙酸乙酯层进行干燥得到乙酸乙酯提取物。

实施例3，作为上述实施例的优选，第一步中，加完70%至95%乙醇水溶液进行乙醇提取时，在温度为86℃下进行加热回流提取，加完30%至70%乙醇水溶液进行乙醇提取时，在温度为86℃下进行加热回流提取，加热回流提取的加热方式均为水浴加热。

实施例4，作为上述实施例的优选，第一步中减压回收乙醇进行浓缩干燥是在温度为50℃至70℃、压力为-0.06Mpa至-0.1Mpa条件下进行的。

实施例5，作为上述实施例的优选，第四步中对合并后的乙酸乙酯层进行干燥,干燥是在50℃至80℃下的鼓风干燥箱内进行或者是在进风温度130℃至190℃、出风温度30℃至90℃的喷雾干燥下进行的。

一、取上述实施例所得的抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物对酪氨酸酶激活作用实验：

白癜风作为一种常见的色素脱失性皮肤病，患病率较高，且呈上升趋势。尽管白癜风易诊断，但却难于治疗，因此其发病机理的研究受到广泛关注。尽管如此，早期研究已经认识到通过上调酪氨酸酶活性加速黑色素生成的药物可提高白癜风的治疗效果。

1、本实验的原理在于：酪氨酸酶是黑色素合成的主要限速酶，催化酪氨酸羟化为多巴并进而形成多巴醌的反应，该酶的活性大小决定着黑色素合成的数量，近年来的研究通过常用中药对黑色素生物合成过程中的关键酶——酪氨酸酶的激活作用，为临床中药治疗白癜风提供选药借鉴；此实验主要考察本发明获得的抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物对酪氨酸酶的激活作用以及多巴色素自动氧化生成黑色素含量的测定。

2、实验材料：（1）药品与试剂、本发明获得的抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物、补骨脂、驱虫斑鸠菊、蘑菇酪氨酸酶（比活力为1000U/mg）、3,4-二羟基苯氨酸（L-DOPA）、二甲基亚砜（DMSO）、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，蘑菇酪氨酸酶（比活力为1000U/mg）、3,4-二羟基苯氨酸（L-DOPA）、二甲基亚砜（DMSO）、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠均为国产分析纯；使用的蒸馏水为去离子蒸馏水。

（2）Lambda 17紫外可见分光光度计、旋转蒸发仪（上海亚荣仪器公司）、LD4-2离心机（北京医用离心机厂）、恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂）。

3、实验方法：本发明获得的抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物对酪氨酸酶激活作用的测定：将本发明获得的抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物溶于磷酸缓冲液（0.2mol/L，pH6.8），制成含抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物10mg/mL的溶液，以5mmol/L L-DOPA为底物，在0.05mol/L磷酸缓冲液（pH6.8）的3mL测活体系中，先加入0.1mL抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物溶液于比色杯中，再加入2.8mL预先在37℃恒温水浴保温的底物溶液，然后加入0.1mL蘑菇酪氨酸酶水溶液，立刻混匀，在37℃恒温条件下测定波长为475nm的光密度值随时间的增长曲线以及吸光度。

根据在475nm下的吸光度计算抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物对酪氨酸酶的激活率（%），并将酶活性激活率（%）达到50%时激活剂的浓度测定为IC₅₀值，另取的补骨脂、补骨脂素为阳性参比对照。抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物、补骨脂、补骨脂素的IC₅₀平均值如表2所示。激活率（%）可以根据下式进行：

激活率（%）=[(C-D)-(A-B)]/(A-B)×100，

上式中：A表示含有底物、酪氨酸酶、但不含抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物的测活体系的吸光度值；

B表示含有底物，但不含酪氨酸酶、抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物的测活体系的吸光度值；

C表示含有底物、抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物，但不含酪氨酸酶的测活体系的吸光度值；

D表示含有底物、酪氨酸酶、抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物的吸光度值。

抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物与补骨脂分别对酪氨酸酶激活率平均值如表1所示

4、结论

由表1可见，当抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物的浓度为10 mg/mL时，发现提取物具有酪氨酸酶激活性，当抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物的浓度为10 mg/mL时对酪氨酸酶的激活率为25.71%，而补骨脂的浓度为10 mg/mL时对酪氨酸酶的激活率为20.68%，可见相同浓度下，抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物对酪氨酸酶激活作用较显著，其中抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物优于对照品补骨脂提取物；而补骨脂作为临床广泛认可的治疗白癜风的化学药物，本实验以它作对照，具有说服力，补骨脂素为分析标准品。

由表2可见，当酪氨酸酶活性激活率（%）达到50%时，抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物的IC₅₀为13.64±7.78 mg/mL，补骨脂的IC₅₀为21.18±2.88 mg/mL，由此可见，若需达到相同的激活率，抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物的浓度低于补骨脂的浓度。

二、多巴色素自动氧化生成黑色素量的测定：

1、实验组：首先将蘑菇酪氨酸酶1 mL(100 U)与5mM L-DOPA反应液1 mL混合，37℃保温5 min，加入抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物1 mL，置37℃保温30 min最后用1 mol/L HCl 0.2 mL终止反应，将反应混合物于3000 r/min下离心15 min，弃上清，沉淀物用6 mol/L 盐酸洗1次，蒸馏水洗2次离心后的沉淀用1 mol/L NaOH 3 mL充分溶解，于400 nm 处测光吸收值A₄₀₀。

空白对照组：首先将蘑菇酪氨酸酶1 mL(100 U)与5mM L-DOPA反应液1 mL混合，于400 nm 处测光吸收值A₄₀₀。

黑色素生成上调率(%)=［A₁/A₂］×100，本实验提取物浓度均选取10 mg/ml。

A₁表示实验组于400 nm 处测光吸收值；

A₂表示空白对照组于400 nm 处测光吸收值。

表3为当抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物与补骨脂的浓度分别为10 mg/ml时，酪氨酸酶黑色素生成的上调率平均值。

2、结论

由表3可见，当抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物与补骨脂的浓度相同时，抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物对黑色素生成具有直接刺激作用，其黑色素生成上调率效果显著强于对照品补骨脂。

三、对酪氨酸酶激活的动力学分析：

本次实验在测活体系中，固定酪氨酸酶的质量浓度为5 μg/mL，改变底物(L-DOPA)的浓度，测定不同激活剂浓度下的反应初始速率(V₀)。

表4为抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物对酪氨酸酶的激活动力学参数平均值。

通过抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物动力学分析，结果表明：由表4可知，随着抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物的增大，Km值降低，表明抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物对酪氨酸酶催化氧化L-DOPA具有竞争性激活作用，这可能是由于抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物部位有效成分分子结构与L-DOPA相似，能结合在酶的活性中心上，被催化氧化成二醌，并进一步氧化得到色素，表现出与底物相互竞争酶的特征。

    综上，本实验主要两个方面验证了阿育魏实提取物对酪氨酸酶的活性作用，结果显示抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物对酪氨酸酶激活作用较明显，对黑色素生成具有直接刺激作用，与对照品补骨脂、补骨脂素相比，抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物对酪氨酸酶激活效果优于临床治疗白癜风药物补骨脂。以上实验结果提示此药材提取物具有较好的激活酪氨酸酶的作用，为临床治疗白癜风药物提供依据。

表1

序号样品名称浓度（mg/mL）激活率（%）4抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物1025.716补骨脂（乙醇提取物）1020.688补骨脂素（分析标准品，≥98%）0.546.84

表2

化合物IC₅₀（mg/mL）提抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物13.64±7.78补骨脂（乙醇提取物）21.18±2.88补骨脂素（分析标准品，≥98%）0.53±3.58

表3

序号样品名称浓度（mg/ml）黑色素生成上调率4抗白癜风用阿育魏实乙酸乙酯提取物10172.37%6补骨脂（乙醇提取物）10105.71%8补骨脂素（分析标准品，≥98%）0.5181.58%

表4 

浓度（mg/mL）Km(mmol/L)Vm(μmol/L·min)01.1134.4850.458.82100.2866.31150.1971.43