核酸酶蛋白Cas9的表达载体、构建方法及其表达纯化

摘要

本发明公开了一种核酸酶蛋白Cas9的表达载体、构建方法及其表达纯化。所述的核酸酶蛋白Cas9的表达载体以扩增的硫氧还原蛋白‑组氨酸标签‑烟草蚀纹病毒蛋白酶识别位点的cDNA替代pET32a中原有的硫氧还原蛋白序列，将密码子优化成易于在宿主中表达的、C端融合NLS核定位信号肽和3×FLAG标签序列的Cas9的基因序列整合到硫氧还原蛋白序列中。本发明利用密码子优化和硫氧还原蛋白融合表达获得大量的核酸酶Cas9蛋白，在仅使用LB培养基的情况下，每克大肠杆菌Tuner(DE3)湿菌最后能获得10mg高纯度的活性Cas9蛋白，实现了低成本下，高保真核酸酶蛋白Cas9的高表达。本发明对宿主要求不高，获得的蛋白可以用于大批量的生物体外组装、体内基因编辑实验。