一种利用酿酒酵母直接分泌表达成熟双链甘精胰岛素的方法

摘要

本发明公开了一种利用酿酒酵母直接分泌表达成熟双链甘精胰岛素的方法。该方法首先构建过表达Kex2的底盘细胞，然后将串联信号肽及密码子优化的甘精胰岛素DNA转入过表达Kex2的底盘细胞中，形成酿酒酵母共表达体系，进行蛋白表达纯化，即可得到甘精胰岛素。该方法极大降低了甘精胰岛素生产工艺难度，使传统工艺中下游多步繁琐复杂的加工流程得以简化，让酵母细胞在胞内直接完成修饰工作。同时，此法降低了纯化复杂性，可通过一步成本相对低的离子交换纯化直接从培养基中提取成熟的胰岛素蛋白。另外，由于避免使用胰蛋白酶等成分，避免了原有工艺中接近50％的副产物，提升了培养基中碳源等营养物质的发酵使用效率，具有很好的推广应用前景。