利用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除小菜蛾APN1基因及其应用

摘要

本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9实现非模式生物小菜蛾APN1基因的敲除及其在Bt Cry1Ac杀虫蛋白抗性机制分子研究中的应用。本发明方法设计并合成小菜蛾APN1基因特异性sgRNA靶标序列，将sgRNA与Cas9蛋白混合后显微注射到小菜蛾前胚盘期卵后极部位，利用CRISPR/Cas9基因编辑系统筛选出可稳定遗传的小菜蛾APN1基因纯合突变种群并用于Bt Cry1Ac杀虫蛋白毒力生物测定，证实小菜蛾APN1基因突变可以导致其对Bt Cry1Ac杀虫蛋白产生高抗性。本发明方法简单高效，省时省力，不仅为非模式生物体内功能基因的深入研究提供技术支撑，也为探索新的害虫防治策略奠定了基础。