一种柱前衍生-HPLC测定DXS酶催化活性的方法

摘要

本发明提出了一种柱前衍生‑HPLC测定1‑脱氧‑D‑木酮糖5‑磷酸合酶(DXS)催化活性的方法，明确了1,2‑邻氨基苯(OPDA)及其类似物为适宜的衍生化试剂。DXS催化的1‑脱氧‑D‑木酮糖5‑磷酸(DXP)合成反应结束后，加入1,2‑邻氨基苯或其类似物对反应中剩余的反应底物丙酮酸、D‑甘油醛‑3‑磷酸进行衍生化，再以HPLC利用甲醇‑水或乙腈‑水为流动相进行梯度洗脱，紫外检测仪检测，然后通过计算反应体系中丙酮酸和/或D‑甘油醛‑3‑磷酸的消耗量来确定DXS的催化活性。本发明限定的衍生化试剂，衍生化反应条件温和，反应迅速，操作简单，HPLC检测灵敏度高，重现性好，检测结果准确。