ESTANDARIZACIÓN DE PROTOCOLOS PARA LA EXTRACCIÓN DE ADN CROMOSÓMICO EN CEPAS DE colletotrichum gloeosporioides AISLADOS EN PLANTAS DE MANGO (Mangifera Indica L.)

摘要

Colletotrichum gloeosporioides (Penz) Penz & Sacc. es la especie responsable de la antracnosis en el mango; esta enfermedad afecta todala parte aérea de la planta, produciendo pérdidas hasta de 12% de la producción. La identificación y caracterización microbiana esimportante para la toma de medidas de prevención y control del patógeno en plantaciones. Esta investigación tuvo como objetivoestandarizar protocolos de aislamiento de ADN genómico en cepas de Colletotrichum gloeosporioides (Penz) Penz & Sacc., que garanticesu calidad y concentración para futuros trabajos moleculares en diferentes representantes de esta especie fúngica. El aislamiento deADN genómico se realizó por tres metodologías: CTAB Doyle y Doyle (1990); Kuramane-Izioka (1997), con modificaciones y CTABCalifornia modificado por Ramirez et al. (2004) conjugadas con juegos de reactivos comerciales NucleoSpin. La calidad del ADNobtenido fue comprobada por absorbancia medida a 260 y 280nm. El primero de los métodos no resultó efectivo mientras que conlos otros se obtuvo ADN genómico con la calidad y concentraciones adecuadas para investigaciones moleculares con la especie. Lasmodificaciones realizadas al método Kuramane-Izioka (1997), contribuyeron a la efectividad del mismo. El método CTAB Californiamodificado por Ramirez et al. (2004) constituye el primer informe de su uso para representantes del reino Fungi. // Colletotrichum gloeosporioides (Penz) Penz & Sacc. is responsible for anthracnose in mango, a disease that affects all aerial parts of theplant, causing losses of up to 12% of production. Microbial identification and characterization is important for determining preventionand pathogen control measure in plantations. This research aimed to standardize protocols for isolation of genomic DNA instrains of Colletotrichum gloeosporioides (Penz) Penz & Sacc., to ensure quality and concentration for future molecular studies in differentrepresentatives of this fungal species. Isolation of genomic DNA was performed by three methods: CTAB Doyle y Doyle (1990);Kuramane-Izioka (1997) with modifications and CTAB California modified by Ramirez et al., (2004) combined with NucleoSpin commercialreagent kits. The quality of the DNA obtained was tested by absorbance measurement at 260 and 280nm. The first methodwas not effective while the other methods yielded were obtained with genomic DNA with the appropriate concentrations for molecularresearch on the species. Modifications to the Kuramane-Izioka (1997) method, contributed to its effectiveness. The CaliforniaCTAB method modified by Ramirez et al. (2004) constitutes the first report of its use for representatives of the Fungi kingdom.