Ermittlung der Mindestanreicherungszeit fur den qualitativen Nachweis von Listeria monocytogenes in Schweinehackfleisch mittels Multiplex-PCR, Microarray und ELISA

摘要

In dotiertem Hackfleisch wurde der qualitative Nachweis von Listeria monocytogenes mittels ELISA, Multiplex-PCR, Microarray und kulturellem Referenzverfahren durchgeführt Hierzu wurde Schweinehackfleisch in Einheiten von 10 und 25 Gramm unter kontrollierten Bedingungen mit ca. 25 KbE Listeria monocytogenes pro Gramm beimpft. Die dotierten Proben wurden anschliessend in selektiven Anreicherungsmedien inkubiert. Wahrend der Anreicherung wurden regelmassig Teilproben entnommen und mittels Transia plateListeria monocyfogenes-ELISA, Multiplex-PCR (Listeria duplex) mit Agargel-Elektrophorese-Detektion und Multiplex-PCR mit Microarray-Detek-tion (NUTRIChip) untersucht. Der Zeitpunkt, zu dem jede Probe als positiv bewertet werden konnte, wurde als Mindestanreicherungszeit definiert. Mit der kulturellen Nachweismethode wurde Listeria monocytogenes mit einem Gesamtuntersuchungsaufwand von 5 Tagen in 100 % der Proben nachgewiesen. Mit dem verwendeten ELISA-Testsystem wurde dies nach einer Mindestanreicherungszeit von 24 h erreicht. Die Detektion mittels Multiplex-PCR führte bereits nach einer Anreicherungszeit von 16 h zum sicheren Nachweis. Als sensitivste Nachweismethode erwies sich die Microarray-Detektion, bei der eine Mindestanreicherungszeit von 10h erforderlich war, um eine Kontamination mit Listeria monocytogenes sicher nachzuweisen.