СТИМУЛЯЦИЯ ПРОЛИФЕРАЦИИ и подвижности КЛЕТОК РАКА МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ miR-294, ОПОСРЕДОВАННАЯ PI3K/AKT И JAK/STAT СИГНАЛЬНЫМИ ПУТЯМИ И ПОВЫШЕНИЕМ УРОВНЯ NRAS

摘要

Изучена роль m?R-294 в развитии рака мочевого пузыря и показан механизм ее действия. Для определения уровня экспрессии miR-294 использовали метод полимеразной реакции в реальном времени (RT-PCR). Экспрессию NRAS, основных факторов опосредованных PI3K/AKT и JAK/STAT сигнальных путей, определяли с помощью Вестерн-блоттинга. Для определения пролиферации, выживания, миграции, инвазии и апоптоза линии опухолевых клеток мочевого пузыря Т24 использовали набор цдя подсчета клеток (Cell Counting Kit-80), тест определения колониеобразующей способности, тест определения заживления ран, метод определения миграции (Transwell) и проточную цитометрию соответственно. Экспрессия miR-294 в опухолевых клетках мочевого пузыря, включая линии клеток J82, НТ1376, Т24 и SW780, была значительно повышена по сравнению с клетками нормального эпителия мочевого пузыря человека (HCV29 и SV-HUC-1). Скорость пролиферации, доля выживших клеток, миграция и инвазия клеток Т24 в группе клеток, трансфицированных мимической miR-294, были значительно повышены, в то время как при трансфекции клеток ингибирующей miR-294 эти показатели существенно снижены. Кроме того, супрессия miR-294 способствовала повышению скорости апоптоза клеток Т24. Показано, что устойчивость клеток Т24 к цисплатину повышается в группе клеток, обработанных мимической miR-294, и понижается в клетках, обработанных ингибирующей miR-294, в сравнении с пустым контролем. Повышенная экспрессия miR-294 может вызвать повышение экспрессии NRAS в клетках Т24 и активировать пути передачи сигнала, опосредованные PI3K/AKT и JAK/STAT. Выявлена положительная корреляция между экспрессией miR-294 и пролиферацией и подвижностью клеток Т24. Супрессия miR-294 может способствовать повышению чувствительности клеток Т24 к цисплатину. Обнаружено, что miR-294 вызывает повышение активности NRAS и активацию PI3K/AKT- и JAK/STAT-опосредованных сигнальных путей в клетках Т24.