Получение рекомбинантных рибосомных белков 83, 85, 810, 819 и 826 человека в препаративных коли честв ах

摘要

Клонированы кДНК рибосомных белков 33, 85, 510, 519 и 826 человека. Полученные конструкции трансформированы в штамм E. coli BL21 (DE3). С помощью вихревого биореактора "БИОК" проведена наработка соответствующих рекомбинантных белков в препаративных количествах. Выход белков составил 5-12 мг на 1 л среды. Рекомбинантные белки выделены с помощью аффинной хроматографии на Ni-NTA-агарозе. Рекомбинантный рибосомный белок 53 дополнительно очищен с помощью гель-фильтрации. Выделенные белки ренатурированы методом ступенчатого диализа и охарактеризованы с помощью двумерного гель-электрофореза. Чистота выделенных рекомбинантных белков составляла более 95%. Показано, что замена в кДНК белка 826 редко встречающегося в E. coli аргининового кодона АСА в тандеме с другим редким аргининовым кодоном AGG на более распространенный кодон CGC позволяет предотвратить сдвиг рамки считывания при трансляции этой кДНК в клетках E. coli.