PCR反応のためのイネいもち病菌DNAの簡易調整法

摘要

イネいもち病菌(Pyricularia oryzae)の個体識別解析ゃ耐 性菌の遺伝子診断などの場面では，polymerase chain reaction (PCR)をベースにした手法が主流となっており，使用する DNAは少量で十分なことが多い.さらに近年は遺伝子増幅 酵素の改良が進んだため，PCRの利用に限定すれば，DNA 調整において一定の収量と純度が確保できればよい.糸状 菌のDNA抽出には以前は多くの工程を要したが，その後よ り簡易な抽出キットの使用が普及した.さらに近ごろは， キットを用いることなく煮沸処理のみでテンプレート調整 するケースもある.既報の方法としては，熱界面活性剤処理， 凍結融解の繰り返し処理，ビーズ'ミル乳化処理（Kuskerf a/., 1998),マイクロ波を利用した方法（TendulkarWa/.,2003; 高垣'福原，2003), PEX法（Nakahara《"ん，1999; Saitoh al, 2006)などがある.イネいもち病菌においても，DNA 抽出作業の大幅な省力化が可能になってきている.しかし， 本病菌では，菌体ゃ培地成分から溶出されるPCR反応阻害 物質の影響などが不明であり，簡便さおよび安定性を備え， かつ，多検体処理に耐えうる調整方法の報告はない.そこで，simple sequence repeat (SSR)マーカー解析や薬剤耐性遺伝 子診断を目的としたPCR反応のための簡易で安定ないもち 病菌DNAの調整法を開発したので報告する.