ВЛИЯНИЕ СТРУКТУРЫ ХРОМАТИНА, АНТИБИОТИКОВ И ЭНДОГЕННОГО МЕТИЛИРОВАНИЯ ГИСТОНОВ НА ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ ГИСТОНОВ Н1 И Н3 В ПРИСУТСТВИИ ПРОТЕИНКИНАЗЫ А В ЯДРАХ ПЕЧЕНИ КРЫСЫ IN VITRO

摘要

Изучено фосфорилирование гистонов Н1 и Н3 ц-АМФ-зависимой протеинкиназой А и эндогенными фос- фокиназами в присутствии [?-32P]-ATP in vitro в изолированных ядрах печени крысы с разным уровнем структурной организации хроматина: конденсированным (диаметр фибрилл 100-200 нм; Я-1) и частично деконденсированным (диаметр фибрилл ~30 нм; Я-2). В Я-1 гистон Н1 фосфорилируется в ~2 раза больше гистона Н3. При разворачивании хроматина до Я-2 суммарное фосфорилирование Н1 уменьшается в 1,5 ра- за, а Н3 не меняется, хотя эндогенное фосфорилирование обоих гистонов снижается вдвое. Изменения в фосфорилировании гистонов под действием низких и высоких концентраций дистамицина и хромомици- на отличаются для Н1 и Н3 в Я-1 и Я-2. Обнаружено, что дистамицин увеличивает фосфорилирование прочносвязанной фракции Н1, не экстрагируемой полиглутаминовой кислотой, особенно в Я-1. Хромоми- цин увеличивает фосфорилирование обоих гистонов и в экстрактах полиглутаминовой кислоты, и в ядер- ных осадках (особенно сильно в Я-2). При этом в Я-1 фосфорилируется прочносвязанная фракция гисто- нов Н1, N-концы которых расположены на АТ-богатых сайтах, доступность к которым для протеинкиназы теряется при разворачивании хроматина до Я-2. В то же время, в Я-2 резко увеличивается доступность для протеинкиназы прочносвязанной фракции гистонов Н1, N-концы которых расположены на ГЦ-богатых сайтах. Высокие концентрации как хромомицина, так и дистамицина стимулируют фосфорилирование в Я-1 и Я-2 неэкстрагируемой полиглутаминовой кислотой фракции Н1, N-концы которых расположены на сайтах, где АТ≈ГЦ. Хромомицин в высокой концентрации увеличивает в 4-7 раз фосфорилирование не- большой фракции Н3, которая выходит в экстракт полиглутаминовой кислоты в обоих типах ядер. Обнару- жено влияние эндогенного метилирования гистонов Н1 и Н3 в ядрах на их последующее фосфорилирова- ние в зависимости от структуры хроматина, прочности связи гистонов и концентрации дистамицина.