Cloning and expression in Escherichia coli of the full-length and deletion variants of a human papillomavirus 18 L1 gene isolated from a Cuban patient

摘要

Introducci?3n: Las vacunas contra el virus del papiloma humano (VPH) se fundamentan en la prote?-na principal de la c??psida L1. Objetivo: Clonar el gen L1 del VPH-18 a partir de una paciente cubana infectada con VPH-18 y expresar las variantes de longitud completa y delecionadas del gen L1 del VPH-18 en Escherichia coli. M??todos: El gen L1 del VPH-18 de longitud completa se amplific?3 por PCR a partir de ADN total aislado de un paciente cubana, se clon?3 y finalmente se subclon?3 en el vector de expresi?3n de E. coli pET26b. Se construyeron tres mutantes de deleci?3n, que codifican para prote?-nas truncadas que carecen de 30 amino??cidos por el extremo carboxilo, en combinaci?3n con 5, 6 o ning?on residuo delecionado por el extremo amino. La producci?3n de las prote?-nas L1 en E. coli BL21(DE3) y E. coli SHuffle T7 se evalu?3 mediante SDS-PAGE y Western blot. Resultados: El gen L1 del VPH-18 clonado fue 99.9 % similar a la variante africana EF202152 y probablemente comparte un origen com?on con el linaje B del genotipo 18. Las tres variantes truncadas de la prote?-na L1 del VPH-18 se produjeron a mayores niveles que la prote?-na L1 del VPH-18 de longitud completa, alcanzando mayores niveles en E. coli BL21(DE3) y mayor solubilidad en E. coli SHuffle. La variante truncada solo por el extremo carboxilo, L1(C30, se produjo a niveles similares a las prote?-nas L1 del VPH-18 truncadas por ambos extremos. E. coli SHuffle produjo aproximadamente tres veces m??s cantidades de L1(C30 cuando creci?3 en condiciones de autoinducci?3n, con respecto a la inducci?3n convencional y, por ende, las cantidades fueron comparables a las obtenidas por E. coli BL21(DE3) bajo inducci?3n convencional. Conclusiones: La truncaci?3n de treinta residuos de amino??cidos por el extremo carboxilo de la prote?-na L1 del VPH-18 tuvo una importante contribuci?3n a la producci?3n y solubilidad de la prote?-na L1 nativa en E. coli. Este es el primer informe sobre la producci?3n soluble de la prote?-na L1 del VPH-18 en una cepa de E. coli SHuffle. Sin embargo, se necesitan mayores cantidades de la prote?-na L1 para escalar su producci?3n para desarrollar un candidato vacunal contra el VPH.