Detec??o de Mycoplasma hyopneumoniae em pulm?es e suabes nasais de suínos por nested PCR.

摘要

Foram coletadas 54 amostras de animais em fase de crescimento e termina??o para o diagnóstico molecular da pneumonia enzoótica suína. Dezenove fragmentos de pulm?o foram obtidos de suínos que apresentavam sinais de doen?a respiratória e 35 suabes nasais foram obtidas de suínos clinicamente saudáveis. Para a detec??o do genoma bacteriano nas amostras, foi utilizada a técnica de nested PCR que originou um fragmento de 706pb, o qual foi, posteriormente, clonado e sequenciado. A sequência de nucleotídeos obtida foi comparada com outras seis sequências de Mycoplasma hyopneumoniae e 11 sequências de outras bactérias disponíveis no Genbank. Para medir a sensibilidade da nested PCR, foram realizadas dilui??es seriadas (10-1 a 10-15) do fragmento clonado, partindo da concentra??o de 300ng. Dez fragmentos de pulm?es e oito suabes nasais apresentaram resultado positivo para M. hyopneumoniae e o limite de detec??o foi estimado em 0,3fg de DNA clonado. A sequência de nucleotídeos obtida foi de 99.1% de homologia com as outras sequências de M. hyopneumoniae, demonstrando que a nested PCR utilizada neste estudo pode ser uma importante ferramenta de diagnóstico para a detec??o desse agente.