益气活血通络方调控NR4A1/NF-κB减轻UUO大鼠炎性损伤的机制研究

摘要

目的观察益气活血通络方通过调控孤核受体4A1(Nuclear receptor subfamily 4 group A member 1,NR4A1)对单侧输尿管结扎(Unilateral uretera obstruction,UUO)大鼠炎性损伤的影响。方法健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham)、UUO组(UUO)、氯沙坦组(LOS)、益气活血通络方组(TCM),每组12只。UUO组、LOS组、TCM组采用单侧输尿管结扎建立肾纤维化模型。TCM组给予益气活血通络方1.92 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,LOS组给予氯沙坦溶液20 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,其余两组给予生理盐水灌胃,每日1次。术后第14天,处死大鼠,收集梗阻侧肾脏,检测各组大鼠肾功能,免疫组化、蛋白印迹法(Western BLOT)检测NR4A1、核因子κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)及炎症因子白介素-6(Interleukin-6,Il-6),单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)的表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测NR4A1、NF-κB mRNA的表达。结果与Sham组比较,UUO组大鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平显著升高(P<0.05);经治疗,LOS组、TCM组Scr、BUN水平较UUO组显著降低(P<0.05)。免疫组化结果显示,与Sham组比较,UUO组NF-κB、IL-6、MCP-1表达显著升高(P<0.05),NR4A1表达显著降低(P<0.05);与UUO组比较,LOS组、TCM组大鼠肾组织中NF-κB、IL-6、MCP-1表达显著降低(P<0.05),NR4A1表达明显升高(P<0.05)。Western blot结果显示,与Sham组比较,UUO组NF-κB、IL-6、MCP-1蛋白表达显著升高(P<0.05),NR4A1蛋白表达显著降低(P<0.05);与UUO组比较,LOS组、TCM组大鼠肾组织中NF-κB、IL-6、MCP-1表达显著降低(P<0.05),NR4A1表达显著升高(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,与Sham组比较,UUO组NR4A1 mRNA显著降低(P<0.05),NF-κB mRNA显著升高(P<0.05);与UUO组比较,LOS组、TCM组NR4A1 mRNA水平显著升高(P<0.05),NF-κB mRNA显著降低(P<0.05)。结论益气活血通络方可通过调控NR4A1,下调NF-κB、MCP-1与IL-6的表达,减轻UUO大鼠肾脏炎性损伤。