丹参注射液对兔软骨细胞增殖与凋亡的影响

摘要

目的：观察丹参注射液对兔软骨细胞增殖与凋亡的影响。方法：取健康4周龄新西兰大白兔24只,取膝关节软骨组织并建立兔膝软骨细胞体外培养体系,采用四甲基偶氮噻唑蓝比色法（MTT）检测软骨细胞2-5代的增长曲线;采用梯度时间法优化丹参注射液干预软骨细胞活性的时效及量效关系;采用RT-PCR法检测各组软骨细胞B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bax的表达。结果：第2-5代细胞的增殖曲线趋势：第1天各代细胞光密度值（OD值）没有显著差异（P〉0.05）,第2天增殖缓慢,第3天增殖逐渐加快,第4天进入生长期,第5、6天增殖变慢,第7、8天增殖进入平台期,第9、10天增殖抑制。OD值随细胞传代,呈减低趋势,第1、3代OD值高于第4、5代,但没有显著差异（P〉0.05）。时效关系：2组干预24小时OD值没有显著差异（P〉0.05）,干预48小时OD值中剂量组大于对照组（P〈0.05）,干预72、96小时OD值中剂量组大于对照组（P〈0.01）,中剂量组干预72小时OD值显著大于24、48、96小时（P〈0.05）,故选择细胞干预72小时作为以后实验检测时间点。量效关系：第3代软骨细胞用不同丹参注射液终浓度的10%FBS DMEM溶液干预,干预前细胞OD值没有明显差异（P〉0.05）;干预72小时后,400、200、100、50、25μg/L浓度细胞的OD值显著大于0μg/L浓度的OD值（P〈0.01）;50μg/L浓度的OD值显著大于400、200、100、25μg/L浓度的OD值（P〈0.01）;100μg/L浓度的OD值显著大于400、200、25μg/L浓度的OD值（P〈0.01）;100μg/L与50μg/L比较细胞OD值没有显著差异（P〉0.05）。Bcl-2、Bax表达：诱导凋亡的第3代软骨细胞,加丹参注射液干预24小时后,细胞Bax表达中、高剂量组小于模型组（P〈0.05）,高剂量组小于低剂量组（P〈0.05）;细胞Bcl-2表达中、高剂量组大于模型组（P〈0.05）,高剂量组大于低剂量组（P〈0.05）。结论：丹参注射液能抑制软骨细胞调亡;可能通过下调软骨细胞促凋亡因子Bax的基因表达,上调软骨细胞促凋亡因子Bcl-2的基因表达,抑制软骨细胞线粒体调亡通路的信号转导实现。