表达人CD40配体的重组腺病毒载体的构建

摘要

目的构建含有hCD40L基因的重组腺病毒载体,为其在动物模型体内表达和肿瘤基因治疗提供基础.方法用XhoⅠ、SwaⅠ双酶切质粒pORF-hCD40L,回收1 900bp基因片段并定向克隆插入穿梭质粒pShuttle中XhoⅠ、EcoRV双酶切位点,得到重组质粒pShuttle-hCD40L.经PmeI酶切与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化BJ5183细菌,同源重组后用选择培养基筛选阳性克隆,提取质粒PacI酶切线性化后用脂质体介导转染293细胞.酶切分析和PCR鉴定重组的腺病毒.结果酶切分析、KR验证表明,hCD40L基因成功克隆到腺病毒pAdEasy-1载体中.结论成功构建表达hCD40L基因的重组腺病毒载体,为进一步研究其在哺乳动物内表达及基因治疗提供了基础.