人Nanog基因重组腺病毒载体的构建及其在人脐带间充质干细胞中的表达

摘要

目的 构建重组人Nanog基因腺病毒栽体(Ad-Nanog),转染人脐带间充质干细胞(hucMSCs),用于后续研究.方法 设计含有Kpn Ⅰ及Xho Ⅰ酶切位点的引物,PCR扩增Nanog基因,将扩增产物亚克隆到pAdTrack-CMV穿梭质粒上,经双酶切和基因测序鉴定,重组穿梭质粒经Pine Ⅰ线性化后,在含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183中同源重组,筛选获得Ad-Nanog重组腺病毒质粒.经Pac Ⅰ酶切线性化,脂质体转染293A细胞,包装和扩增病毒,并感染hucMSCs.结果 重组腺病毒质粒经PCR和双酶切鉴定正确,测序结果 和设计片段的序列一致.荧光显微镜下观察在感染的hucMSCs中绿色荧光蛋白高效表达.结果 成功构建了Nanog腺病毒表达栽体,能高效转染hucMSCs,可用于后续转基因的研究.