小干扰RNA沉默YAP基因对人牙周膜干细胞增殖凋亡的影响

摘要

目的 本研究通过小干扰RNA(siRNA)沉默人牙周膜干细胞(hPDLSCs) YAP基因,观察YAP基因沉默后对细胞增殖凋亡的影响.方法 将化学合成siRNA序列以脂质体LipofectamineTM 2000介导瞬时转染hPDLSCs,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测转染后YAP表达水平,细胞增殖活性检测试剂盒(CCK-8)检测siRNA在体外对hPDLSCs增殖能力的影响,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率的变化.采用SPSS 19.0软件对数据进行处理,设P＜0.05为差异有统计学意义.结果 在转染48 h后hPDLSCs的YAP mRNA和蛋白水平明显降低(P＜0.001),YAP蛋白表达水平在细胞被转染48、72 h后无显著差异,表明siRNA可以持续有效地抑制YAP的表达;CCK-8增殖活性实验结果显示细胞增殖活性受到抑制;沉默YAP基因后细胞早期及晚期凋亡率均增加.细胞周期检测结果显示细胞周期发生改变,G1及S期细胞比例增多(P＜0.01),G2期细胞比例明显减少(P＜0.05).结论 siRNA沉默YAP基因后hPDLSCs增殖活性降低,细胞凋亡率明显增加,细胞的周期分布发生改变;YAP基因可以调控hPDLSCs的增殖与凋亡.