视黄酸信号通路调控咽弓神经嵴影响斑马鱼牙齿发育的研究

摘要

目的 研究视黄酸(RA)信号通路在斑马鱼颅神经嵴迁移至咽弓神经嵴对牙齿发育的影响.方法 将野生型斑马鱼胚胎与转基因斑马鱼胚胎各分为3组,分别采用1 ×10-7～6×10-7 mol·L-1梯度浓度的RA(RA处理组)、l×10-7 mol·L-1的4-二乙氨基苯甲醛(DEAB)(DEAB处理组)、与RA处理组相应浓度的二甲基亚砜(DMSO对照组)处理24 hpf胚胎9h.制备dlx2a、barxl、dlx2b基因的反义探针,运用整胚原位杂交技术检测野生型斑马鱼48～72 hpf胚胎的dlx2a、dlx2b、barx1基因表达,荧光显微镜观察转基因斑马鱼4 dpt胚胎.结果 获得3个基因的反义mRNA探针.与DMSO对照组相比,1×10-7 mol·L-1RA处理组barx1、dlx2a在咽弓神经嵴的表达明显增强,并有由咽弓神经嵴向后段咽弓牙齿萌出位点迁移的趋势,绿色荧光向周边咽弓扩散;4×10-7 mol·L-1 RA处理组胚胎致畸率和死亡率极高,3× 10-7 mol·L-1RA处理组1/3胚胎发育迟缓.DEAB处理组神经嵴发育不良,barxl、dlx2a表达降低,dlx2b在牙齿位点的表达有所延迟.结论 RA能够通过调控咽弓神经嵴发育过程,进而调控牙齿发育前体细胞,最终达到调控牙齿发育的过程.