靶向ABCG2基因的RNA干扰提高K562细胞的化疗敏感性

摘要

目的:研究靶向人白血病K562细胞内高表达的三磷酸腺苷结合盒转运体G2(ATP binding cassette transporter G2,ABCG2)基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)对K562细胞化疗敏感性的影响.方法:构建靶向ABCG2基因的RNAi重组腺病毒Ad-siABCG2,以其感染K562细胞后,采用RT-PCR、免疫细胞化学和Western印迹法检测K562细胞中ABCG2 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测K562细胞对药物的敏感性变化,FCM检测细胞内多柔比星(adriamycin,ADM)和柔红霉素(daunorubicin, DNR)的平均荧光强度.结果:成功构建靶向ABCG2的RNAi重组腺病毒Ad-siABCG2,经感染K562细胞后可有效沉默ABCG2基因表达;MTT检测发现,感染Ad-siABCG2的K562细胞对ADM和DNR的敏感性是未感染时的2～6倍(P＜0.01);FCM检测显示,感染Ad-siABCG2的K562细胞内DNR和ADM平均荧光强度(86.19和180.26)分别高于未感染的K562细胞(63.65和141.60),差异有统计学意义(P＜0.05).结论:重组腺病毒Ad-siABCG2沉默ABCG2基因表达可增加K562细胞对ADM和DNR的敏感性,表明ABCG2基因表达可导致K562细胞产生多药耐药;Ad-siABCG2对ABCG2介导的细胞多药耐药有逆转作用.