siRNA干扰survivin基因对K562细胞分化及化疗敏感性的研究

摘要

目的：应用小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制survivin基因的表达，观察重组质粒对K562细胞分化及化疗敏感性的影响并探讨其机制，为临床白血病治疗提供理论依据。 方法： 1.转染survivin重组质粒对K562细胞survivin mRNA和蛋白表达的影响。实验分三组：RNAi组、脂质体组、空白组。经阳离子脂质体介导的方式进行转染。转染48小时后RT-PCR检测survivinmRNA表达情况，免疫组织化学法检测survivin蛋白表达。 2、重组质粒对K562细胞分化影响。实验分三组：RNAi组、脂质体组、空白组。转染48小时后用光学显微镜检查细胞的形态变化，RT-PCR方法检测c-myc、c-fos mRNA表达情况，免疫组织化学法检测c-myc、c-fos蛋白表达，流式细胞仪检测细胞表面分子CD13、CD33表达情况。 3、阿霉素对K562细胞的抑制作用。实验分两组：RNAi组、空白组。用MTT法测定不同浓度的阿霉素对各组K562细胞的抑制率，根据其对K562细胞的抑制情况选择浓度为0.2ug/ul的阿霉素作用于各组细胞，1小时后流式细胞仪检测各组细胞内阿霉素的荧光强度。流式细胞仪检测各组细胞内阿霉素的荧光强度。 4、K562细胞耐药机制研究。实验分三组：RNAi组、脂质体组、空白组。免疫组织化学法检测各组细胞p-gp、GST-π、TOPOII三种耐药蛋白的表达水平。 结果： 1、survivin mRNA和survivin蛋白在K562细胞中呈高表达，转染重组质粒后survivin表达下调(p＜0.05)，而脂质体组及空白组无明显变化。 2、RNA干扰组K562细胞转染48小时后细胞形态学出现改变， CD33表达下降(P＜0.05)，CD13的表达较对照组无明显改变。 3、转染48小时后RNA干扰组细胞c-myc mRNA及蛋白表达较两对照组降低(p＜0.05)，c-fos mRNA及蛋白与对照组相比表达无明显改变(P＞0.05)。 4、阿霉素对K562细胞的抑制作用呈浓度依赖性，浓度越大抑制作用越强。RNA干扰组K562细胞对阿霉素敏感性较对照组增高(P＜0.05)，RNA干扰组细胞内阿霉素平均荧光强度为120.71，较两对照组明显增高(P＜0.05)。 5、RNA干扰组K562细胞耐药蛋白GST-π表达下降(P＜0.05)。 结论： 1、重组质粒pshRNA-survivin可下调K562细胞survivin mRNA和蛋白表达。 2、survivin基因与K562细胞的分化有关，但诱导其向粒系分化可能性小。 3、RNA干扰survivin基因可增加K562细胞对阿霉素的敏感性。 4、RNA干扰survivin基因可能通过降低耐药蛋白GST-π的表达增加K562细胞对阿霉素的敏感性。

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文摘

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论文说明：符号说明

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前言

第一部分RNA干扰survivin基因对K562细胞分化的研究

1材料

2方法

3结果

4讨论

5小结

第二部分RNA干扰survivin基因对K562细胞化疗敏感性的影响及机制研究

1材料

2方法

3结果

4讨论

5小结

全文总结

参考文献

附图

文献综述：Survivin的表达调节研究现状

致谢

攻读学位期间研究成果及发表学术论文情况