天然产物莱菔素通过下调CRM1表达抑制套细胞淋巴瘤细胞增殖

摘要

目的:研究染色体区域维持因子1(chromosomal region maintenance 1,CRM1)在套细胞淋巴瘤中的表达情况,并进一步探讨天然产物莱菔素LFS-01抑制套细胞淋巴瘤细胞增殖的分子机制。方法 :通过Oncomine数据库挖掘分析CRM1在套细胞淋巴瘤中的表达水平。用LFS-01处理套细胞淋巴瘤JeKo-1细胞后,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,激光共聚焦显微镜下观察CRM1蛋白的核转运功能,蛋白质印迹法检测CRM1蛋白表达水平,FCM法检测和透射电子显微镜观察细胞周期和凋亡,蛋白质印迹法检测凋亡通路相关蛋白表达,CCK-8和FCM法检测凋亡抑制剂z-VAD-FAM对LFS-01作用的影响。构建CRM1基因突变的慢病毒稳定感染的JeKo-1细胞,激光共聚焦显微镜和CCK-8法再次检测LFS-01对CRM1核转运和细胞增殖的影响。通过RNAseq数据分析LFS-01作用后JeKo-1细胞转录组水平的变化,并采用CCK-8法检测Toll样受体(Toll-likereceptor,TLR)抑制剂TAK-242和LFS-01联用对JeKo-1细胞增殖的影响。结果 :CRM1在套细胞淋巴瘤中呈现高表达(P <0.05)。LFS-01能够抑制JeKo-1细胞增殖,24和48 h时的半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)分别为5.81μmol/L和9.09μmol/L。20.0μmol/L LFS-01可明显抑制CRM1的核转运功能(P <0.05);6.0μmol/LLFS-01可明显下调CRM1的表达水平(P <0.05);10.0μmol/L LFS-01可将细胞周期抑制在G2/M期,并诱导细胞凋亡(P值均<0.05);4μmol/L LFS-01可明显上调凋亡通路蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶、剪切型caspase-3和剪切型caspase-9(P值均<0.01)的表达。凋亡抑制剂z-VAD-FAM可逆转LFS-01的凋亡诱导作用(P <0.01)。当CRM1基因突变后,LFS-01失去靶向抑制CRM1核转运和细胞增殖的功能(P值均<0.01)。RNAseq分析表明LFS-01对细胞增殖相关信号通路有明显的抑制作用(P <0.01),并且TLR抑制剂TAK-242联合LFS-01用药具有协同抗肿瘤作用(P <0.01)。结论 :LFS-01可诱导套细胞淋巴瘤细胞发生周期阻滞和凋亡,其中CRM1是一个关键蛋白。TLR抑制剂TAK-242和LFS-01具有协同抗肿瘤作用。