猫爪草总皂苷通过下调信号素4D表达抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖

摘要

目的 探讨猫爪草总皂苷(TSRT)对人非小细胞肺癌A549细胞增殖的影响,并初步探讨其作用机制.方法 构建信号素4D(Sema4D)过表达慢病毒载体和阴性对照载体,以感染复数(MOI)10感染A549细胞,用嘌呤霉素1.0 mg·L-1筛选得到稳定转染细胞株.设感染Sema4D过表达慢病毒的A549细胞为过表达(LV-Sema4D)组,感染Sema4D过表达慢病毒的A549细胞加入TSRT 100 mg·L-1干预为给药(LV-Sema4D+TSRT)组,感染阴性对照病毒的A549细胞为阴性对照组(LV-NC组),未感染慢病毒的A549细胞为细胞对照组.实时细胞分析系统连续记录96 h细胞指数(CI),荧光定量PCR检测48 h后Sema4D、丛状蛋白B1(PlxnB1)和酪氨酸蛋白激酶(c-Met)mRNA表达;Western印迹法检测Sema4D,PlxnB1和c-Met蛋白表达;免疫荧光法检测Sema4D在细胞中的定位及表达水平.结果 LV-NC组CI值与细胞对照组相比无显著差异;与LV-NC组相比,LV-Sema4D组72 h CI值升高(P<0.01);TSRT 100 mg·L-1干预后,与LV-Sema4D组相比,48,72和96 h CI值均显著降低(P<0.05,P<0.01).LV-NC组Sema4D,PlxnB1和c-Met mRNA和蛋白表达与细胞对照组相比无显著差异;与LV-NC组相比,LV-Sema4D组上述mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01);TSRT 100 mg·L-1干预后,与LV-Sema4D组相比,上述mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.05,P<0.01).LV-NC组Sema4D荧光强度与细胞对照组相比无显著差异,LV-Sema4D组与LV-NC组相比Sema4D荧光强度显著增强(P<0.01);TSRT干预后,与LV-Sema4D组相比,Sema4D荧光强度减弱(P<0.05).结论 TSRT可通过下调Sema4D表达、减少Sema4D与PlxnB1结合、抑制c-Met信号途径,从而抑制A549细胞增殖.