Wnt信号通路抑制剂对下调PKM2表达后的肺癌A549细胞增殖凋亡及ROS水平的影响

摘要

目的 研究Wnt信号通路抑制剂对下调丙酮酸激酶M2亚型(PKM2)表达后的肺癌A549细胞增殖凋亡及活性氧(ROS)水平的影响.方法 肺癌A549细胞转染PKM2小干扰RNA(PKM2 siRNA组)和小干扰RNA阴性对照(siRNA-NC组),以没有转染的A549细胞作为对照组.Real-time PCR和Western blot检测三组PKM2水平.用含有5μmol/L的Wnt信号通路抑制剂IWR-1的细胞培养液培养,设置为PKM2 siRNA+IWR-1组和IWR-1组,同时以不含有IWR-1的正常细胞培养液培养PKM2 siRNA组和对照组细胞.噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,二氯二氢荧光素二乙酸酯(H2DCFDA)法检测ROS水平,Western blot检测 β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)水平.结果 细胞转染PKM2 siRNA后的PKM2 mR-NA和蛋白水平、细胞存活率明显下降,细胞凋亡率、ROS水平明显升高,细胞中 β-catenin、c-myc水平下降,而Cleaved Caspase-3水平升高,与不转染的对照组细胞相比差异具有统计学意义(P<0.01).Wnt信号通路抑制剂处理A549细胞后,细胞存活率也下降,细胞凋亡增多,细胞中ROS水平升高,Cleaved Caspase-3水平升高,与正常培养的A549细胞相比差异具有统计学意义(P<0.01).Wnt信号通路抑制剂处理转染PKM2 siRNA后的A549细胞,细胞凋亡率最高,细胞存活率最低,细胞中ROS水平最高,与单纯Wnt信号通路抑制剂处理和单纯转染PKM2 siRNA后的细胞相比,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 Wnt信号通路抑制剂和下调PKM2均能够抑制肺癌细胞增殖,促进肺癌细胞凋亡,ROS水平升高,并且二者共同作用后抑制肺癌细胞的作用更明显,下调PKM2可能通过抑制Wnt信号通路阻碍肺癌发生.