大鼠成骨细胞微小RNAs的筛选研究

摘要

目的 应用微小RNAs(microRNAs,miRNAs)芯片技术筛选补肾方含药血清干预大鼠成骨细胞后差异表达的miRNAs,与前期获得的软骨细胞差异miRNAs比较,筛选出共有差异miRNAs,以探讨补肾方通过共有miRNAs调控靶基因表达发挥治疗效应的机制.方法 原代培养的大鼠成骨细胞经碱性磷酸酶染色、Ⅰ型胶原免疫荧光染色和矿化结节染色鉴定后,用补肾方含药血清干预成骨细胞,在给定时间点收获细胞,抽提纯化总RNAs行miRNAs芯片检测,并挑选差异表达4倍以上的miRNAs行实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应验证.结果 所培养的原代细胞具有典型的成骨细胞形态和功能,碱性磷酸酶染色、Ⅰ型胶原免疫荧光染色和矿化结节染色均为阳性.与补肾方含药血清干预成骨细胞1 d相比,干预6 d的共有229个2倍以上表达差异的miRNAs,其中上调的52个、下调的177个.差异表达4倍以上的miRNAs实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应结果与芯片数据一致.与前期软骨细胞差异miRNAs芯片数据比较,miRNAs均上调2倍以上的有8个、下调4倍以上的2个.结论 补肾方含药血清干预成骨细胞获得了一套较为特异的miRNAs,初步预测上调的miRNAs可能通过靶向Runx2、Wnt、Notch、Axin2等基因在骨发育、骨形态发生、骨吸收以及软骨内成骨形成等相关的信号通路中发挥作用.