犀角地黄汤合方含药血清调节ITP患者Teff/Treg分化及功能的研究

摘要

目的探究犀角地黄汤合方含药血清对免疫性血小板减少症(ITP)患者效应性T细胞(Teff)/调节性T细胞(Treg)分化的影响,并探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在其中的作用机制。方法采用随机数字表法将20只大鼠分为含药血清组和空白血清组,每组10只,分别使用犀角地黄汤合方颗粒和蒸馏水连续灌胃3 d,收取2组大鼠全血制备含药血清和空白血清。收集健康志愿者和ITP患者外周血,提取外周血单个核细胞(PBMC),磁珠分选CD4^(+)T细胞,抗CD3/CD28抗体培养体系活化后,分为对照组、模型组和实验组。对照组为健康志愿者CD4^(+)T细胞,模型组及实验组为ITP患者CD4^(+)T细胞,实验组采用含药血清干预72 h,对照组及模型组采用大鼠空白血清干预72 h。流式细胞术检测各组CD4^(+)T细胞中Teff/Treg比例;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组培养上清液中白细胞介素(IL)-2、干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6、IL-17及Treg细胞因子转化生长因子(TGF)-β、IL-10水平;Western blot检测PI3K、Akt、mTOR蛋白及磷酸化蛋白水平。结果CD4阳性率为(99.44±0.01)%。与对照组相比,模型组CD4^(+)T细胞中Teff细胞比例明显升高,Treg比例明显降低,Teff/Treg比值增大,IL-2、IL-6、IL-17、IFN-γ、TNF-α水平以及PI3K、p-PI3K、mTOR、p-mTOR蛋白水平升高,TGF-β、IL-10、p-Akt蛋白水平降低(P<0.05);与模型组相比,实验组CD4^(+)T细胞中Teff细胞比例降低,Treg细胞比例升高,Teff/Treg比值减小,IL-2、IL-6、IL-17、IFN-γ、TNF-α水平以及PI3K、p-PI3K、mTOR、p-mTOR蛋白水平降低,TGF-β、IL-10水平升高(P<0.05)。结论犀角地黄汤合方含药血清能够调节ITP患者Teff/Treg的分化及细胞因子的分泌,可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路PI3K、mTOR蛋白表达及其磷酸化水平有关。