慢病毒介导CK18基因沉默对人乳腺癌BT549细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响

摘要

目的 检测靶向沉默细胞角蛋白18(CK18)基因对人乳腺癌BT549细胞增殖、凋亡、侵袭运动的影响,并探讨其潜在的分子机制.方法 建立CK18稳定沉默的BT549细胞株,分为3组,以CK18(CK18-sh21、CK18-sh22、CK18-sh23及CK18-sh24)靶向沉默的细胞为实验组CK18-shRNA,加入空载体的为阴性对照(sh-Con)组,未处理为空白对照(Wt)组.采用蛋白印迹法(Western blot)对细胞系进行CK18表达鉴定.采用CCK-8法、平板克隆形成法检测CK18表达缺失对细胞增殖能力的影响;通过流式细胞技术(PE-Annexin V双染法)检测CK18基因沉默后对BT549细胞凋亡的影响;通过PI-FACS法检测沉默CK18对BT549细胞周期的影响;采用划痕试验、Transwell法检测CK18沉默对细胞运动及侵袭能力的影响;采用Western blot检测与侵袭转移相关的分子E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达情况.结果 建立了CK18沉默的BT549细胞系,CK18的表达被显著抑制,CK18-sh23组相对sh-Con组抑制率最高,可达73％.与Wt组、sh-Con组相比,CK18-shRNA细胞增殖能力在24 h、48 h和72 h降低,克隆形成能力下降,细胞运动、侵袭能力下降,细胞凋亡率和G2期细胞比例均增加(P＜0.05).与sh-Con组和Wt组比较,CK18表达降低能促进E-cadherin表达,抑制vimentin表达(P＜0.05).结论 CK18基因沉默能有效抑制人乳腺癌BT549细胞的增殖、运动、侵袭,诱导细胞的凋亡,并阻滞细胞周期;CK18还可能通过诱导EMT发生参与乳腺癌BT549细胞的侵袭转移过程.