利用正向重复片段的GUS报告基因检测DNA双链断裂引起的基因重组研究

摘要

本研究建立了一种方便快捷地检测DNA双链断裂引起的基因重组的方法.传统的检测DNA双链断裂的方法较为复杂、繁琐.因此,构建简单、快速的此类检测技术是非常必要的.本研究构建了利用正向重复片段的GUS基因载体以及引导RNA和噬菌体MS2外壳蛋白偶联限制性核酸内切酶的基因组编辑系统,在GUS基因内部DNA重复区切割DNA,导致双链断裂(double-strand breaks,DSBs),DSB经同源序列引导修复(homology-directed repair,HDR)途径,引起GUS基因重组,恢复其功能.此方法可以经过GUS染色后快速、直观地检测位点特异的DSB.通过GUS与其底物的反应,以达到半定量、直观快速检测DSB的目的.