GUS染色

摘要： 三酰基甘油脂肪酶(SDP1)是催化三酰甘油降解的关键酶,在植物油脂代谢调控中起着重要作用。克隆棉花SDP1并研究其在3种胁迫下的表达分析,为解析棉花SDP1的生物学功能提供依据。以陆地棉品种冀丰1271为试材,克隆GhSDP1编码序列和上游启动子序列;利用PlantCARE分析GhSDP1启动子区顺式作用元件;qRT-PCR检测逆境胁迫下GhSDP1的表达谱;通过烟草瞬时表达pGhSDP1启动子+GUS载体检测启动子活性。结果表明,GhSDP1的编码序列为2 541 bp,其在盐、低温和干旱胁迫下呈差异表达模式。pGhSDP1除具有启动子所必需的TATA-box和CAAT-box等基本顺式作用元件外,还含有多个与光响应、激素响应及逆境应答等相关的顺式作用元件。棉花pGhSDP1启动子能驱动GUS蛋白高效表达,具有较强的启动子活性。研究揭示了棉花GhSDP1参与胁迫应答的新功能。

摘要： 【目的】SPL(SQUAMOSA promoter binding protein-like)是植物特有的转录因子,参与植物幼年期向成年期的转变、营养生长向生殖生长的转变、花发育、孢子发生、叶片和根发育、逆境响应等多个过程,在植物的生长发育过程中起着非常重要的作用。探究白桦中BpSPL6基因启动子区的顺式作用元件,以及该启动子在正常和胁迫条件下的表达模式,可为进一步研究BpSPL6基因的功能提供参考,也可为了解白桦的抗逆机制提供依据。【方法】以本实验室组培白桦的总DNA为模板,经PCR克隆了BpSPL6基因上游1703 bp的启动子序列,用PLACE和Plant CARE在线软件分析启动子区的顺式作用元件。构建BpSPL6基因启动子驱动GUS报告基因的植物表达载体并转化拟南芥,探究其组织表达特性和胁迫条件下的表达模式。【结果】PCR成功克隆了BpSPL6基因上游1703 bp的启动子序列,对启动子区的顺式作用元件预测发现除了含有核心启动元件TATA-box、CAAT-box外,还包括2种特异组织表达元件(根、花粉),10种激素响应元件(生长素、赤霉素、水杨酸、脱落酸),4种脱水响应元件等。对转基因拟南芥进行GUS染色结果表明,BpSPL6基因启动子驱动的GUS基因在转基因拟南芥中的表达具有时空特异性。在拟南芥的整个发育过程中,BpSPL6基因启动子驱动GUS基因在真叶叶片中表达,但是表达部位不同。随着叶片的生长,首先在叶片的顶端表达,随后扩展到叶片的叶脉并直至整个叶片,并且表达量逐渐升高。同时BpSPL6基因启动子驱动的GUS基因在拟南芥营养生长时期的根部都有表达。并且经氯化钠和甘露醇胁迫后其表达量降低。对比两种胁迫,受到氯化钠胁迫后GUS基因的表达量变化更大,说明对氯化钠胁迫的响应更加强烈。【结论】BpSPL6基因可能参与了植物的叶片、根发育以及对盐和干旱胁迫的响应。

摘要： PR1是植物病程相关(Pathogenesis related,PR)蛋白家族成员之一,参与植物抗病防御反应。研究前期明确了小麦TaPR1基因受叶锈菌及信号分子水杨酸(Salicylic acid,SA)、脱落酸(Abscisic acid,ABA)的诱导表达。本研究基于中国春小麦数据库,克隆获得了小麦TaPR1基因上游2200 bp启动子序列,对启动子区域所包含的顺式作用元件进行分析预测,利用β-葡萄糖苷酸酶(β-Glucuronidase,GUS)组织化学染色、绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)观察对不同长度启动子区段进行启动活性验证,结果表明TaPR1基因启动子-2200~-290 bp区段具有启动活性,为进一步解析TaPR1基因转录调控机制提供了理论依据。

摘要： 为了进一步了解启动子在甘蓝型油菜FIL基因(BnaFIL)表达调控中的作用,根据甘蓝型油菜基因组数据,以甘蓝型油菜叶片提取的DNA为模板,对甘蓝型油菜BnaFIL基因的启动子序列pBnaFIL进行克隆,长度为1326 bp。采用PlantCARE在线分析软件对该启动子序列进行生物信息学序列分析,结果表明,该序列含有参与光反应的部分保守DNA模块以及CAAT-box和TATA-box等核心启动子必备元件,与分生组织表达有关的顺式作用的调控元件CAT-box以及光敏反应元件。通过该启动子序列替换pBI121植物表达载体上的CaMV35S启动子,使该启动子与GUS基因融合获得pBnaFIL-GUS表达载体,将载体通过农杆菌花序浸染的方法转入拟南芥中,获得了早花启动子重组质粒阳性转基因株系和晚花启动子重组质粒阳性转基因株系。之后对转基因拟南芥植株进行GUS染色分析,对启动子的表达效果进行了检测,最终在不同的转基因拟南芥植株中均发现了GUS基因的表达。结果表明,早花材料与晚花材料中启动子表达强弱存在差异,早花材料启动子的驱动基因表达效果比晚花材料启动子的驱动效果要好,由此推断,启动子的驱动效果对油菜开花早晚进行了调控,导致FIL基因在不同材料中的表达效果不一致。

摘要： 随地球环境污染,气候变化问题愈发严重,植物生长过程中面临的极端环境风险也随之增加,植物所受环境胁迫中缺铁胁迫广泛存在。文章以拟南芥基因组DNA为模板,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增克隆拟南芥MYC1基因启动子区域,经过酶切和连接,与GUS(β-葡萄糖苷酸酶)表达载体构建融合表达载体ProMYC1-GUS。通过浸花法侵染野生型拟南芥植株获得转基因材料,并对ProMYC1-GUS转基因材料进行缺铁诱导GUS组织染色,证明植物MYC1基因在缺铁胁迫下表达受到抑制。

摘要： 构建了 gpd 启动子驱动的双孢蘑菇(Agaricus bisporus)双元表达载体,研究了受体材料、农杆菌浓度、侵染时间、乙酰丁香酮(acetosyringone,AS)浓度和共培养时间对转化效率的影响.结果表明:不同受体的转化效率有较大的差异;以直径2～4 cm 的菌丝球为受体,当农杆菌菌液D600为0.2,侵染时间30 min,共培养AS浓度为200 μmol·L-1,共培养1 d 时,获得抗性转化子的百分率最高,为56.8％.拟转化子的PCR鉴定和GUS(β-glucuronidase,GUS)染色验证外源基因已整合到双孢蘑菇基因组并得到稳定表达.

摘要： 为分析编码磷脂酰肌醇转移蛋白基因Os08PTS在水稻种子发育中的功能及利用Os08PTS启动子进行遗传改良.依据T-DNA插入位点信息,克隆Os08PTS基因启动子,并利用生物信息学手段分析Os08PTS启动子的顺式作用元件特征,同时构建启动子与GUS融合表达载体,通过农杆菌介导法获得转基因植株,验证启动子的表达特征.结果表明:Os08PTS基因启动子片段中包含启动子的基本元件TATA-box和CAAT-box,以及光调控元件、赤霉素应答元件、生长素反应元件、参与防御和应激反应相关元件等多个与生长发育或者逆境胁迫相关的顺式作用元件,还含有与分生组织表达以及胚乳表达相关元件等.进一步构建Os08PTS启动子的GUS融合载体,并获得水稻遗传转化植株.Os08PTS启动子序列能够驱动Os08PTS基因在水稻茎和种子胚的表达,该启动子具有驱动下游基因转录的活性.

摘要： 为了研究外整流钾通道蛋白(stelar K+ outward rectifier channels,SKOR)基因SKOR在长穗偃麦草中的功能,利用热不对称交错PCR(Tail-PCR)技术,克隆了长穗偃麦草EeSKOR启动子,并进行启动子顺式作用元件及基因表达分析.结果 表明:(1)成功获得长穗偃麦草EeSKOR基因起始密码子上游798 bp启动子序列,命名为pEeSKOR.(2)EeSKOR启动子除必须具备的核心启动元件外,还含有特异转录因子结合位点、植物激素响应元件、光响应元件、组织特异的启动元件和胁迫响应元件.(3)成功构建植物表达载体pEeSKOR∷GUS,经农杆菌介导的瞬时转化,EeSKOR启动子驱动GUS报告基因可在拟南芥的叶、叶柄和根中表达.(4)实时定量PCR检测显示,在NaCl、PEG、ABA和SA处理下长穗偃麦草EeSKOR基因在根中呈现不同的表达模式,NaCl处理下EeS-KOR的表达量呈先下调后上调趋势;PEG处理下EeSKOR的表达量呈上调趋势,且随着时间的延长显著上调;ABA处理下EeSKOR的表达受到抑制且随处理时间延长呈显著下调趋势;SA处理下EeSKOR表现出先上调后下调趋势,且在处理72 h时表达量显著低于正常表达水平.研究认为,EeSKOR基因的表达受NaCl、PEG、ABA和SA的诱导调节.该研究结果为进一步系统研究长穗偃麦草EeSKOR基因功能提供重要理论依据.

摘要： 基于梁山慈竹转录组数据库,以梁山慈竹叶片为材料,克隆得到一个MYB转录因子,命名为DfMYB3,其开放阅读框长度为1287 bp,编码428个氨基酸,GenBank注册号为KY963358。保守结构域分析显示,DfMYB3有典型的SANT结构域,具有DNA-Binding结构域。系统进化树分析发现,DfMYB3与甘蔗、拟南芥、毛白杨等物种的R2R3-MYB转录因子聚集在一枝上。亚细胞定位结果显示,DfMYB3蛋白在细胞核以及细胞膜中均有表达,在细胞核上更为显著。通过染色体步移法克隆得到DfMYB3基因5′侧翼2000 bp左右的序列。PlantCARE在线软件分析表明,该序列具有典型的启动子特征,并含有GA、ABA、MeJA等激素以及干旱等胁迫响应元件。100μmol·L^(-1)GA、100μmol·L^(-1)ABA处理梁山慈竹后,显著上调了DfMYB3基因的表达,表明DfMYB3基因能对GA及ABA处理产生应答。为探究DfMYB3启动子的功能,构建了DfMYB3启动子融合GUS基因的表达载体,并遗传转化烟草。在转基因烟草叶片及茎杆中都检测到了GUS信号,在叶脉处最为显著。

摘要： 本研究中主要利用含GUS报告基因的植物表达载体进行甜瓜遗传转化技术体系的探讨，针对基本培养基、子叶切割方式、侵染时间、共培养时间、移栽方法等进行研究，以建立高效、稳定的甜瓜遗传转化体系，为利用转基因技术改良甜瓜品质和抗性提供参考。

摘要： 本研究中主要利用含GUS报告基因的植物表达载体进行甜瓜遗传转化技术体系的探讨，针对基本培养基、子叶切割方式、侵染时间、共培养时间、移栽方法等进行研究，以建立高效、稳定的甜瓜遗传转化体系，为利用转基因技术改良甜瓜品质和抗性提供参考。

摘要： 本研究中主要利用含GUS报告基因的植物表达载体进行甜瓜遗传转化技术体系的探讨，针对基本培养基、子叶切割方式、侵染时间、共培养时间、移栽方法等进行研究，以建立高效、稳定的甜瓜遗传转化体系，为利用转基因技术改良甜瓜品质和抗性提供参考。

摘要： 本研究中主要利用含GUS报告基因的植物表达载体进行甜瓜遗传转化技术体系的探讨，针对基本培养基、子叶切割方式、侵染时间、共培养时间、移栽方法等进行研究，以建立高效、稳定的甜瓜遗传转化体系，为利用转基因技术改良甜瓜品质和抗性提供参考。

摘要： 本试验通过调节不同激素及其不同浓度配比来寻找茄子的高效遗传转化体系，通过农杆菌介导的方法得到30株PCR阳性转基因茄子植株，GUS染色结果显示DR5启动子能在转基因茄子植株的幼嫩叶片中表达，表明转入基因己经整合到植物基因组中，并能稳定表达。

摘要： 本试验通过调节不同激素及其不同浓度配比来寻找茄子的高效遗传转化体系，通过农杆菌介导的方法得到30株PCR阳性转基因茄子植株，GUS染色结果显示DR5启动子能在转基因茄子植株的幼嫩叶片中表达，表明转入基因己经整合到植物基因组中，并能稳定表达。

摘要： 本试验通过调节不同激素及其不同浓度配比来寻找茄子的高效遗传转化体系，通过农杆菌介导的方法得到30株PCR阳性转基因茄子植株，GUS染色结果显示DR5启动子能在转基因茄子植株的幼嫩叶片中表达，表明转入基因己经整合到植物基因组中，并能稳定表达。

摘要： 本试验通过调节不同激素及其不同浓度配比来寻找茄子的高效遗传转化体系，通过农杆菌介导的方法得到30株PCR阳性转基因茄子植株，GUS染色结果显示DR5启动子能在转基因茄子植株的幼嫩叶片中表达，表明转入基因己经整合到植物基因组中，并能稳定表达。

摘要： 以石斛兰种子诱导的原球茎为受体材料,以含有GUS基因的植物表达载体PBI121为外源DNA,分别利用农杆菌介导和基因枪与农杆菌相结合的方法将PBI121转入石斛兰,经GUS染色,发现基因枪与农杆菌相结合的方法转化的石斛兰,浸染40、50和60min的原球茎呈阳性.

摘要： 以石斛兰种子诱导的原球茎为受体材料,以含有GUS基因的植物表达载体PBI121为外源DNA,分别利用农杆菌介导和基因枪与农杆菌相结合的方法将PBI121转入石斛兰,经GUS染色,发现基因枪与农杆菌相结合的方法转化的石斛兰,浸染40、50和60min的原球茎呈阳性.

摘要： 本发明公开一种转基因牡丹愈伤组织的GUS基因组织化学染色方法，将转基因牡丹愈伤组织从培养基中取出，用蒸馏水洗去残留菌体，放入离心管中，加入Buffer A至没过愈伤组织，置于24°C环境中，侵泡1 h，用移液枪将Buffer A吸出，加入Buffer B至没过愈伤组织，置于24°C黑暗环境中染色过夜或数小时，至愈伤组织出现蓝色。本发明将原GUS基因组织化学染色方法中的37°C优化为24°C。将试验筛选得到的增殖生长良好的愈伤组织进行GUS组织化学染色的检测，试验结果成功检测到GUS活性的表达，愈伤组织碎块呈蓝色，表明新生的愈伤组织中存在GUS活性位点。

摘要： 本发明提供一种草莓

摘要： 本发明涉及一种可特异性识别GUS(β‑葡糖苷酸酶)的单克隆抗体的制备方法和其在转基因生物检测中的应用方法。目的是提供一种可检测GUS蛋白质的单克隆抗体和将该抗体用于转基因植物、动物和细胞等生物体的高灵敏度免疫学检测方法。GUS蛋白质被广泛用于基因转移报告基因，它可催化底物形成β‑D‑葡萄糖苷酸，传统方式是以分光光谱、荧光等进行检测，依赖于酶的活性，易受温度变化及加工过程的影响，一直以来缺乏一种快速有效、灵敏度高的检测方法。制备该抗体所用抗原为大肠杆菌表达的可溶性的全长GUS重组蛋白，最终获得的抗体属于IgG1a亚型，可以检测转基因植物(水稻、棉花、玉米等)、转基因动物和细胞中存在的GUS蛋白质的表达，从而对转基因生物做出鉴定。

摘要： 本发明提供一对用于检测含GUS报告基因的转基因材料的PCR引物，是根据GUS基因序列设计的一对引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1和2所示，该对引物不仅能通过传统定性PCR方法检测转基因材料中的GUS报告基因片段(SEQ ID NO:3)，同时能扩增出水稻基因组中特有的一段序列(SEQ ID NO:4)，因此可同时作为检测水稻基因组DNA的内参基因标记。本发明提供的PCR检测引物及检测方法，既可用于检测含GUS报告基因的转基因样品，又可用于确定模板基因组DNA是否来源于稻属及其基因组DNA的质量。该方法简单、快捷，成本低，实验结果直观清晰。

摘要： 利用GUS染色显示拟南芥植株不同部位转录因子ABI5活力的方法，主要包括:受ABI调控的GUS表达载体的构建；GUS表达载体转化进入农杆菌；农杆菌介导的花粉管法将GUS表达载体转入拟南芥中；拟南芥转化株系的筛选和鉴定。本发明的方法可以用于研究拟南芥中与ABI5蛋白相关代谢路径的调控机制；且该构建方法具有广泛的适用性，可以普遍用于其他植株中，利用GUS染色显示不同部位转录因子的调控活力。

摘要： 本发明公开一种转基因牡丹愈伤组织的GUS基因组织化学染色方法，将转基因牡丹愈伤组织从培养基中取出，用蒸馏水洗去残留菌体，放入离心管中，加入Buffer？A至没过愈伤组织，置于24°C环境中，侵泡1？h，用移液枪将Buffer？A吸出，加入Buffer？B至没过愈伤组织，置于24°C黑暗环境中染色过夜或数小时，至愈伤组织出现蓝色。本发明将原GUS基因组织化学染色方法中的37°C优化为24°C。将试验筛选得到的增殖生长良好的愈伤组织进行GUS组织化学染色的检测，试验结果成功检测到GUS活性的表达，愈伤组织碎块呈蓝色，表明新生的愈伤组织中存在GUS活性位点。

摘要： 本发明公开了一种新的Gus染色液配制方法，包括以下步骤：1)K

摘要： 本发明提供一种含有榨菜IFL1启动子融合GUS基因的表达载体及其应用。本发明涉及一种榨菜IFL1基因启动子，核苷酸序列为如SEQ ID NO.3所示的核酸序列；或由SEQ ID NO.3所示的核酸序列衍生的具有同等功能的序列。本发明还涉及榨菜IFL1基因启动子在驱动目的基因表达中的应用。本发明启动子可以驱动GUS基因在烟草中的表达，可作为体外研究榨菜基因表达的理论基础。本发明启动子序列位于IFL1基因上游，可启动IFL1基因的表达，同时在序列上存在多个激素和胁迫位点，可通过激素或胁迫处理调控IFL1基因表达，调控榨菜生长发育及维管束形成。本发明有利于对榨菜生长发育及维管束形成发育调控机制的深度研究，在榨菜遗传改良及分子育种上具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明是一种拟南芥FIPV启动子融合GUS基因的表达载体构建方法，以拟南芥Col‑01周大的植株为材料，采用CTAB法提取其基因组DNA(gDNA)，设计特异性引物(F和R)扩增FIPV基因启动子，以提取的gDNA为模板，设计的F和R为特异性引物，进行PCR反应再经过酶切，与Gateway兼容的载体pENTR 3C进行连接，构建克隆载体pENTR FIPV‑Promoter，然后将pENTR FIPV‑Promoter与包含GUS报告基因的载体pMDC162进行LR反应，得到FIPV‑Promoter融合GUS的表达载体pMDC FIPV‑Promoter‑GUS。

摘要： 本实用新型揭示了一种GUS染色装置，包括壳体，壳体限定一封闭的容纳腔以容纳生物样品，壳体上开设气流出口，容纳腔内配置阻挡件，阻挡件位于生物样品与气流出口之间，以部分阻挡气流出口与生物样品之间的气体流通。