胎鼠大脑皮质神经元的分离培养和鉴定

摘要

目的 探讨胎鼠皮质神经元分离和培养的方法,并对分离得到的细胞进行鉴定.方法 分离17 d胎鼠大脑皮质,切碎后经0.3%胰蛋白酶和DNaseI消化得到细胞悬液,用含N1添加剂和10%胎牛血清的MEM培养基进行培养,相差显微镜下观察神经元的生长情况.培养第3和6 d以微管相关蛋白-2(MAP-2)和神经元核心抗原(NeuN)为标志物,用免疫细胞化学的方法对分离培养的细胞进行鉴定.结果 培养第5～6 h时神经元已贴壁,长出数个小突起,培养第3 d可见突起增多、延长,培养第6 d细胞突起明显延长,相邻细胞的突起交错形成网络;培养第3 d MAP2免疫反应阳性细胞率(87.5±3.5)%,与培养第6 d的阳性细胞率(90.2±5.1)%无明显差异(P＞0.05);培养第3 d NeuN免疫反应阳性细胞率(92.4±2.7)%,与培养第6 d的阳性细胞率(88.7±4.6)%无明显差异(P＞0.05).结论 本方法分离培养的神经元纯度高,在含N1的完全培养基中培养神经元存活状态良好,未见胶质细胞明显增生.