吡罗红为底物的辣根过氧化物酶催化荧光反应测定葡萄糖

摘要

吡罗红在辣根过氧化物酶催化下可被过氧化氢氧化而使其荧光猝灭. 在pH 7.2中性介质中, 稳态催化速率由酶和底物浓度决定, 催化体系服从Michaelis-Menten方程, 用Lineweaver-Burk作图法求得米氏常数、最大反应速度、催化常数分别为 2.4×10-5 mol*L-1, 2.5×10-6 mol·L-1s-1, 75.8 s-1. 在最佳反应条件下, 荧光F0/F的猝灭程度与过氧化氢浓度在0～3.6×10-7 mol·L-1范围内成线性关系, 检测限为6.3×10-9mol·L-1; 当与葡萄糖氧化酶联用时, 可定量检测葡萄糖, 线性关系为0～8.0×10-7 mol·L-1, 检测限为3.4×10-8 mol·L-1. 方法用于分析人血清中葡萄糖含量, 分析结果与苯酚-4-氨基安替比林法基本一致.