辣根过氧化物酶

摘要： 建立了基于二胺氧化酶-辣根过氧化物酶双酶显色的紫外-可见分光光度法测定牛奶中组胺与腐胺含量的方法。取10mL牛奶样品,加入10mL 2%(质量分数)硝酸铅标准溶液,混匀,再加入20mL 0.1%(质量分数)三氯乙酸标准溶液,混匀,离心,取上清液,将溶液pH调至7.2,得到待测样品溶液。移取1.0g·L^(-1)二胺氧化酶标准溶液100μL,加入100μL待测样品溶液,于50°C水浴中反应15min。反应结束后,依次加入1.0g·L^(-1)辣根过氧化物酶标准溶液50μL,0.5g·L^(-1)四甲基联苯胺标准溶液200μL和2mol·L^(-1)盐酸溶液50μL,采用紫外-可见分光光度计测定体系的吸光度。结果显示:样品溶液由无色变为蓝色又变为黄色;组胺、腐胺的浓度分别在2.5~150μmol·L^(-1)和5~200μmol·L^(-1)内与其对应的吸光度呈线性关系,检出限(3S/N)分别为0.6522μmol·L^(-1)和1.1341μmol·L^(-1)。对空白牛奶样品进行加标回收试验,组胺和腐胺的回收率分别为80.5%~88.3%和89.5%~92.3%,测定值的相对标准偏差(RSD,n=5)分别为2.5%~4.4%和4.4%~5.1%。

摘要： 开发一种结合两步双水相萃取和亲和吸附分离的新型集成化方法,用于从辣根中分离和纯化辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)。首先,将两步双水相萃取工艺用于糖和色素的分离,然后将"多价"苯硼酸亲和磁性石墨烯复合材料(d-PBA-GO@Fe_(3)O_(4)@PEI)用作进一步吸附分离,实现从杂质蛋白中选择性分离HRP。通过研究温敏聚合物17R4-盐双水相体系的液液相平衡行为,以及9种模型化合物在双水相体系中的分配行为,最终确定8%17R4-13.2%(NH_(4))_(2)SO_(4)双水相体系作为初步纯化的工艺体系。通过构建的集成化方法,成功地从辣根中分离出HRP,而对HRP的结构没有影响,HRP的比活力和纯化因子分别达到28.93 U/mg和1.92。该方法具有优异的分离纯化性能,对植物糖蛋白的工业化生产具有良好的前景。

摘要： 针对辣根过氧化物酶催化过氧化氢(HRP/HO)体系存在对污染物降解速度慢的问题,采用2,2′-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)作为电子转移体,强化HRP/HO体系降解吲哚,对不同pH值、ABTS浓度和常见共存水体成分的吲哚降解效能进行研究.通过高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱仪及发光细菌毒性实验,考察吲哚的降解产物及毒性变化.结果表明:在pH值为5.0~11.0的范围内,ABTS可显著强化HRP/H_(2)O_(2)体系降解吲哚,且强化效能随ABTS浓度的增加而增加;常见共存水体成分对吲哚的降解均无显著影响;检测到5种吲哚降解产物,其生物毒性相较于吲哚有所下降.

摘要： 利用水热法和直接沉淀法,设计合成了5例由过渡金属(TM)-联咪唑配阳离子与Dawson型钨磷酸阴离子构成的多金属氧酸盐(POM)基有机-无机杂化化合物[Ni(H_(2)biim)_(3)]_(4)[Ni(H_(2)biim)2(P_(2)W_(18)O_(62))_(2)]·2H_(2)O(1),[Co^(Ⅲ)(H_(2)biim)_(3)]_(2)[P_(2)W_(18)O_(62)]·8H_(2)O(2),[Cu(H_(2)biim)_(2)]_(3)[P_(2)W_(18)O_(62)]·4H_(2)O(3),[Co^(Ⅱ)(H_(2)biim)_(3)]_(2)H_(2)[P_(2)W_(18)O_(62)]·9H_(2)O(4)和[Ni(H_(2)biim)_(3)]_(3)[P_(2)W_(18)O_(62)]·2H_(2)O(5);并利用X射线单晶衍射分析(SC-XRD)、红外光谱(IR)和热重-差热分析(TG-DTA)等对其进行了表征.化合物1~5作为载体用于固定辣根过氧化物酶(HRP)时,显示出了较高的酶固定化能力.另外,利用圆二色光谱(CD)和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)等方法评价了固定化酶HRP/1~HRP/5的重复使用性、储存稳定性和检测过氧化氢(H_(2)O_(2))的性能.由于该类POMs与HRP间存在强的相互作用,利用简单的物理吸附法即可实现POMs对HRP的固载.POMs对酶的固定不但提高了HRP对使用及储存环境的耐受性,同时也拓展了POMs在酶固定化领域的应用.

摘要： 本文采用2,6-二-(2-吡啶基)-4-吡啶甲酸作为水溶性的高荧光量子荧光探针,用于辣根过氧化物酶的检测。在pH = 7.2,25°C下,配体2,6-二-(2-吡啶基)-4-吡啶甲酸浓度为6 ×10−6 mol/L,H2O2浓度为1 ×10−4 mol/L时,回归方程为F = 60.934x + 1745.9,该体系的检测范围可达10−7~10−8 mol/L,灵敏度较高,操作简便,抗干扰能力强,可用作检测游离的辣根过氧化物酶和辣根过氧化物酶标记物的新方法,具有实际的应用前景。

摘要： 近期,《ACS Nano》在线发表了中国科学院院士、中科院生物物理研究所/中科院纳米酶工程实验室研究员阎锡蕴团队的最新研究进展。研究人员设计出一种新型纳米酶——硫铁矿(FeS_(2))纳米酶。这种纳米酶结合H2O2底物的亲和力极高,催化H_(2)O_(2)的效率比传统Fe_(3)O_(4)纳米酶高4144倍,比天然辣根过氧化物酶高3086倍。

摘要： 为快速检测食源性动物中沙拉沙星及二氟沙星的药物残留,将沙拉沙星单克隆抗体(SAR-Ab)与辣根过氧化物酶(HRP)偶联得到酶标抗体(McAb-HRP),从而建立直接竞争化学发光酶联免疫(dc-CLEIA)检测方法。结果显示:经紫外扫描鉴定,McAb-HRP偶联成功;以包被抗原(SAR-1-OVA)浓度1.25μg/mL,McAb-HRP稀释比1∶8000作为最佳工作条件,从而建立了dc-CLEIA分析法;精密度的平均批内批间变异系数均低于7%;建立的标准曲线呈线性关系,线性范围为0.312~20 ng/mL,回归方程式y=-0.373x+0.688(R^(2)=0.985),经计算其灵敏度IC_(50)为3.19 ng/mL;除二氟沙星外与其他氟喹诺酮类药物的交叉反应率均低于8%,与其他种类的抗生素均无交叉反应;沙拉沙星和二氟沙星在鸡肉样品中的最低检出限分别为1.25、1.36μg/kg;沙拉沙星和二氟沙星在鸡肉样品中的添加回收率分别为88.2%~108.3%、93.36%~102.7%,且其变异系数均≤13.4%。结果表明:此方法不仅快速且灵敏度高,可作为沙拉沙星及二氟沙星药物残留的定量检测方法。

摘要： 本文通过从头合成法在室温水相的温和条件下,实现了固定化辣根过氧化物酶HRP@ZIF-8的绿色合成.HRP@ZIF-8的晶体规则、结晶度高,HRP的包埋没有影响ZIF-8的结晶过程,且比表面积相对于ZIF-8降低了 7.81％.HRP@ZIF-8中HRP的负载率为1.3 wt％,HRP包埋率可达到59.5％.基于ZIF-8框架的保护作用,HRP@ZIF-8表现出了较强的热稳定性,对2,4-二氯苯酚(2,4-DCP)催化去除效率在反应30 min时最高可达游离HRP的2.1倍.

摘要： 针对生物酶在固相载体负载后存在的催化活性与稳定性之间"此消彼长"的问题,本工作采用"自牺牲模板"策略以铝基金属有机骨架材料(Al-MOF)为前驱体设计制备多级孔Al2O3 (MHAl2O3)材料,再以"聚多巴胺(PDA)"仿生膜对材料表面进行功能化修饰后用以固载辣根过氧化物酶(HRP).通过调节前驱体的煅烧温度来实现载体孔径大小的调控,探讨了载体的孔道限域效应对固定化酶反应器催化活性的影响,所得固定化酶反应器的热稳定性和重复使用性显著提高.为了解析固定化酶反应器的构效关系,采用酶动力学和热动力学参数研究了固定化酶反应器催化过程中酶与底物的相互作用,结果表明固载后酶分子对底物的亲和性和专一性得到提升.将固定化酶反应器用于模拟废水中苯胺黑药的催化降解时,表现出非常高效的催化效率.

摘要： 以提高免疫诊断技术中信号检测的灵敏度为目的,开发新型超敏化学发光HRP型鲁米诺增强液.重点探讨鲁米诺、过氧尿素及不同的增强剂对荧光强度的影响,并采用Box-Behnken响应面优化法,最终形成增强液的最佳成分组合,并检测其性能.新型超敏化学发光液最佳成分为:鲁米诺2.5 mmol/L,3-(10-吩噻嗪)-丙酸钠6 mmol/L,4-二甲氨基吡啶4 mmol/L,过氧尿素13 mmol/L,在此条件下发光液效果较好,半衰期超过1 h,灵敏度为0.09 pg/孔,可于37°C存放1个月,低温长期保存.

摘要： 葡萄糖氧化酶法(glucose oxidase,GOx)是生物体系以及葡萄糖检测中常用的方法,其中葡萄糖氧化酶可以专一地催化葡萄糖生成葡萄糖酸以及过氧化氢(H2O2).葡萄糖氧化酶内部的黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)则是其主要的活性成分,在葡萄糖的催化氧化过程中起着电子传递的作用.传统的葡萄糖氧化酶法主要是通过借助辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase,HRP)/TMB显色体系完成对葡萄糖的定量分析,即葡萄糖氧化酶可以特异地催化氧化葡萄糖,产生H2O2.在H2O2存在的体系中,辣根过氧化物酶可以将底物分子四甲基联苯胺(TMB)催化氧化.表面增强拉曼光谱(surface-enhanced Raman scattering,SERS)是一种超灵敏检测手段并且被广泛应用于生物检测中.经研究发现,TMB分子具有很高的SERS活性,并且TMB分子经过催化反应之后,其SERS光谱发生明显的增强,以此实现葡萄糖的定量分析研究.

摘要： 荧光比率法超灵敏检测辣根过氧化物酶传感器的构建主要基于酶催化邻苯二胺氧化生成2,3--氨基吩嗪,生成的2,3-二氨基吩嗪能猝灭氨基化石墨烯量子点440nm处的荧光强度,同时伴随2,3-二氨基吩嗪本身在553nm处的荧光信号增强.随着辣根过氧化物酶浓度的增加,2,3-二氨基吩嗪位于553nm处的荧光不断增强且氨基化石墨烯量子点440nm处的荧光逐渐减弱,形成荧光比率信号.当辣根过氧化物酶浓度在2～800fM范围时,其荧光比率信号与辣根过氧化物酶的浓度具有较好的线性关系,对辣根过氧化酶的检出限为0.21fM.该传感器具有良好的选择性和抗干扰能力,并能实现检测过程的可视性.

摘要： 辣根过氧化物酶广泛分布于植物体中,可参与降解环境中的大量有机污染物,因此辣根过氧化物酶的研究有着重要的环境意义.CompoundⅠ和它的单电子还原态CompoundⅡ被认为是在辣根过氧化物酶的自然循环中出现的最重要的两个活性物种.为了研究CompoundⅠ和CompoundⅡ的反应性,通过实验合成了[FeⅣ=O(TMP+·)(2-MeIm)]1+和[FeⅣ=O(TMP)(2-MeIm)]0(TMP=iron 5,10,15,20-tetramesitylporphyrin;2-MeIm=2-methylimidazole)分别作为辣根过氧化物酶CompoundⅠ和CompoundⅡ的生物仿生酶.CompoundⅠ和CompoundⅡ在环氧化、羟基化和杂原了氧化反应中的催化能力在零下15度的乙腈溶液中由紫外光谱快速扫描方法得到。通过比较实验得到二级反应常数发现，CompoundⅠ的催化能力远强于CompoundⅡ.这一结论随后得到密度泛函量了化学计算的进一步证实，同时密度泛函计算指出，辣根过氧化物酶的CompoundⅠ参与的催化反应在低自旋二重态路径上一步完成，而CompoundⅡ催化的体系却是在三重态上通过多步反应来完成。本研究通过联合使用实验和计算化学方法将有助于阐明环境中辣根过氧化物酶活性物种的基本反应性。

摘要： 2,4,6-TCP是重要的环境污染物之一.自20 世纪30年代早期,2,4,6-TCP 已广泛应用于生产制造木材防腐剂、杀菌剂、除草剂和杀虫剂.由于其具有强毒性、致癌性以及在环境中持久存在的特点,对人类健康和生态环境构成了严重威胁. 本工作选用廉价易得的粘土矿物蒙脱土为模板，经黄腐酸活化后对辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,HRP)进行固定。利用固定化的HRP催化降解水中的2,4,6-TCP，以自由酶催化反应做对比，研究了不同催化时间、pH值、温度以及固化HRP浓度对催化反应的影响，并对固化HRP催化降解2,4,6-TCP进行了动力学分析，考察了固化HRP的重复使用性和储存稳定性。结果表明，黄腐酸活化的蒙脱土固定的HRP活性可高达112 U·g-1;固化HRP催化降解100μm 2,4,6-TCP在反应20 min后即可将2,4,6-TCP基本去除，催化降解速度高于自由酶;HRP经过黄腐酸改性的蒙脱土固化后，在最优pH为6时反应1 min有最高催化去除率47.4%高于自由酶在最优pH为5的催化去除率;固化HRP催化反应的适宜温度范围比自由酶更宽泛，即使在60°C的高温下催化去除率还可达到33.6%;固化HRP在较低活性浓度0.15 U·mL-1时反应1 min对2,4,6-TCP的催化去除率已高达96.7%。通过双倒数作图法计算得出固化HRP催化2,4,6-TCP的反应动力学参数Vmax=7.14× 10-4 M·min-1，Km=1.56×10-3M。固化HRP与自由酶相比，固化HRP的储存稳定性极高，40天后依然可以保留80%以上的活性。

摘要： 辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase, HRP)是含有铁卟啉中心的一类血红素蛋白质,被广泛应用于污染控制、生物医学研究和有机合成。HRP能够将酚类和其他芳香底物催化单电子氧化,按照Chance-George机理,使底物其形成自由基(1).在水相中酚类化合物所形成的自由基能够相互反应聚合生成聚合物,其中水溶性的聚合物仍然是 HRP的底物,进一步被催化氧化聚合成大分子聚合物,直至形成沉淀(2).由于通过此聚合反应所形成的聚合物能够很容易地从水中去除或被固定于土壤／沉积物系统,酶催化氧化聚合反应在水处理和土壤修复中具有潜在的利用前景(3)。然而,此应用的一个限制因素就是在催化氧化酚类化合物过程中,酶会很快的失活。

摘要： 甲胎蛋白（AFP）作为肝癌、妊娠和胚胎癌等威胁人类健康的重要癌症的诊 断标志物，对血清中AFP的检测在临床诊断和癌症的预防方面具有至关重要的 意义。免疫测定的标记方法由于标记过程提高了操作成本、影响生物分子的活性， 免标记方法的研究受到众多研究者的关注。本文以辣根过氧化物酶（HRP）在孔 内修饰的介孔硅SBA-15 材料为载体，固定AFP的单克隆抗体，通过抗原-抗体的直接免疫反应实现AFP的电化学免标记测定。

摘要： 长期以来，研究者们以辣根过氧化物酶(HRP)为模型来探讨过氧化物酶的 结构、动力和热力学性质，从而认识和理解在生物体内过氧化物的生理作用和 电子转移机理。另外，辣根过氧化物酶生物传感器不仅可以用于检测过氧化氢， 还能检测氢受体有机过氧化物，氢供体芳香化合物、酚类化学物等[1,2]。我们 参考文献的方法[3]合成了一种新型的两亲嵌段聚合物PEG-b-PGMA，并用于构 建HRP的生物传感器，研究结果表明HRP 在聚合物与乙炔黑(AB)的复合膜中 具有良好直接电化学行为和电催化能力。

摘要： 明胶是一种来源丰富的天然高分子材料，表面含有丰富的氨基官能团，能够 与碳纳米管表面的羟基和羧基官能团结合，提高明胶与碳纳米管的界面结合力， 有利于碳纳米管在明胶基体中的分散。本实验应用所制备的明胶-多壁碳纳米管 复合材料作为基底，与辣根过氧化物酶（HRP）共固定于玻碳电极表面从而构建 过氧化氢生物传感器。由于此复合物兼具碳纳米管的大比表面积和纳米尺寸效应 和明胶良好的生物相容性，扫描电镜（SEM）结果表明分散于明胶基体中的碳纳 米管能形成三维网状结构，为HRP 提供了一个合适的仿生微环境，从而极大地 促进了HRP 与电极之间的电子转移，实现了HRP的直接电化学，并且能较好地 保持其电催化活性。结果表明，该传感器对过氧化氢（H2O2）表现出快速的安 培响应，良好的稳定性和重现性，对H2O2 检测的线性范围为10μmol/L-1.57mmol/L，线性相关系数为0.9962，最低检测限为5.0μmol/L（S/N=3）。同时， 研究表明在含有室温离子液体1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐([BMIM]BF4)溶液 中电极对H2O2 表现出更高的灵敏度和良好的选择性，初步研究表明其检出限可 以达到0.1μmol/L。

摘要： 研究鸡海马结构的传入纤维在脑干及小脑内的起始核.将40％辣根过氧化物酶(HRP)水溶液注入鸡左端脑海马结构,逆行追踪投射到海马结构的纤维在脑干和小脑内的起始核.结果在脑干的浅小细胞亚核(SPC)、圆下核(SRt)、蔡氏区(AVT)和小脑的第Ⅰ～Ⅹ叶浦氏细胞层内均出现被标记的神经元.初步表明上述部位为端脑海马结构的起始核.

摘要： 构建了一种新型、灵敏的流感病毒H1N1光化学免疫传感器,该免疫传感器利用甲型流感病毒H1N1表面HA(血球凝集素)蛋白有效吸附糖蛋白的特性,选取性质活泼的糖蛋白—辣根过氧化物酶(HRP)作为生物标记物直接标记在病毒抗原的表面,由于HRP能有效催化H2O2—OPDA(邻苯二胺)体系产生灵敏的显色反应,且反应产物具有良好荧光效应,从而可检测流感病毒H1N1.实验表明所构建的光化学免疫传感器对H2O2-OPDA体系表现出快速的颜色变化和荧光响应,对流感病毒H1N1检测的动态响应范围为0.0001～0.5μg·mL-1,检测限达50pg·mL-1(3σ).同时其他亚型病毒及干扰蛋白对该传感器的干扰较小,表现出良好的选择性,并将其应用于血清样品分析,添加回收率109.3％.结果证明HRP可作为一种直接标记物用于流感病毒H1N1的灵敏、便捷、实时监测,所构建的方法可为其他流感病毒及其他抗原的检测提供参考.

摘要： 本发明公开了一种用于检测辣根过氧化物酶的上转换纳米粒子及其制备方法和辣根过氧化物酶的检测方法，该制备方法包括：1)将1‑十八烯、油酸、镱源、钆源、铒源、钠源、NH4F进行共沉淀反应得到OA‑NaGdF4:Yb,Er；2)将1‑十八烯、油酸、钇源、钠源、NH4F和OA‑NaGdF4:Yb,Er进行共沉淀反应得到OA‑NaGdF4:Yb,Er@NaYF4UCNPs；3)将聚琥珀酰亚胺(PSI)、N,N‑二甲基甲酰胺(DMF)、油胺(OAm)混合，接着向体系中添加甲醇进行沉淀得到PSIOAm，然后将钠源、氯仿、PSIOAm和OA‑NaGdF4:Yb,Er@NaYF4UCNPs进行超声处理，最后得到‑COOH修饰的NaGdF4:Yb,Er@NaYF4上转换纳米粒子，即用于检测辣根过氧化物酶的上转换纳米粒子。该上转换纳米粒子对辣根过氧化物酶的检测具有检出限低、灵敏度高和选择性好的优点。

摘要： 本发明属于电化学生物传感器技术领域，公开了磺化碳纳米管复合辣根过氧化物酶的过氧化氢生物传感器及其制备与应用。所述生物传感器由参比电极、对电极及修饰后的工作电极组成，所述修饰后的工作电极由工作电极及固化在工作电极表面的物质识别膜组成，其中，所述物质识别膜主要由磺化碳纳米管分散液、辣根过氧化物酶溶液及全氟磺酸树脂溶液混合，负载在工作电极表面成膜制备而成。本发明还公开了传感器的制备方法。本发明的制备方法简单且成本低；获得的传感器具有良好的选择性、灵敏度和稳定性，酶的固定量和稳定性好，具有较好的电催化性能；对过氧化氢进行准确检测，抗干扰能力强；同时具有较宽的检测范围，较低的检测限。

摘要： 一种基于辣根过氧化物酶-凹土纳米复合材料的细胞内过氧化氢的检测方法，将辣根过氧化物酶吸附在纯化凹土表面，制备成辣根过氧化物酶-凹土纳米复合材料；利用滴涂法将该复合材料修饰到玻碳电极表面，构建成辣根过氧化物酶-凹土纳米复合材料生物传感器；以所述的传感器为工作电极，使用计时电流法检测细胞中H

摘要： 本发明涉及一种生物传感器，具体是一种Nafion/辣根过氧化物酶/四氧化三钴‑石墨烯/离子液体碳糊电极（Nafion/HRP/Co

摘要： 本发明提供了一种基于氧化石墨烯光活化辣根过氧化物酶(HRP)的免疫分析检测方法。氧化石墨烯在光照下可以产生活性中间体光生空穴和超氧阴离子自由基，使HRP在没有H2O2的存在下能够催化氧化色原底物。以甲胎蛋白(AFP)为模型物，通过DNA杂交链式反应以放大信号，通过氧化石墨烯的光活化HRP作用实现底物的催化氧化，以实现免疫检测。本发明将纳米材料和天然酶的优势相结合，使得AFP的检测限达到0.0001pg/mL。本发明不仅提供了一种新型的通过光激励的纳米材料调控HRP活性的方法，同时为超灵敏的酶联免疫分析法提供了一种新途径。

摘要： 本发明公开了一种用于检测辣根过氧化物酶的上转换纳米粒子及其制备方法和辣根过氧化物酶的检测方法，该制备方法包括：1)将1‑十八烯、油酸、镱源、钆源、铒源、钠源、NH

摘要： 本发明属于电化学生物传感器技术领域，公开了磺化碳纳米管复合辣根过氧化物酶的过氧化氢生物传感器及其制备与应用。所述生物传感器由参比电极、对电极及修饰后的工作电极组成，所述修饰后的工作电极由工作电极及固化在工作电极表面的物质识别膜组成，其中，所述物质识别膜主要由磺化碳纳米管分散液、辣根过氧化物酶溶液及全氟磺酸树脂溶液混合，负载在工作电极表面成膜制备而成。本发明还公开了传感器的制备方法。本发明的制备方法简单且成本低；获得的传感器具有良好的选择性、灵敏度和稳定性，酶的固定量和稳定性好，具有较好的电催化性能；对过氧化氢进行准确检测，抗干扰能力强；同时具有较宽的检测范围，较低的检测限。

摘要： 一种基于辣根过氧化物酶-凹土纳米复合材料的细胞内过氧化氢的检测方法，将辣根过氧化物酶吸附在纯化凹土表面，制备成辣根过氧化物酶-凹土纳米复合材料；利用滴涂法将该复合材料修饰到玻碳电极表面，构建成辣根过氧化物酶-凹土纳米复合材料生物传感器；以所述的传感器为工作电极，使用计时电流法检测细胞中H

摘要： 本发明涉及生物传感器技术领域，公开了一种聚合离子液体‑还原氧化石墨烯复合材料及在辣根过氧化物酶修饰电极上的应用，将还原氧化石墨烯成功修饰到聚合离子液体结构上，制备了复合材料聚合离子液体‑还原氧化石墨烯(PIL‑rGO)以提升修饰电极的电化学性能。基于材料聚合离子液体与聚合离子液体‑还原氧化石墨烯制备修饰电极：PIL‑rGO‑HRP‑Nafion/GCE表现了良好的电化学行为：该电极具有高电子转移速率，较好的稳定性和选择性，并且该生物传感器对H2O2、NaNO2具有较好的分析检测性能，可应用于实际样品中H2O2、NaNO2检测。

摘要： 本发明公开了一种基于四氧化三钴和辣根过氧化物酶修饰电极的电化学生物传感器件的制备与应用研究。采用碳离子液体碳糊电极(CILE)为载体，将纳米四氧化三钴(Co3O4)混悬液滴涂在CILE表面，再将辣根过氧化物酶(HRP)用Nafion膜固定在电极表面，得到修饰电极Nafion/HRP/Co3O4/CILE。紫外可见吸收光谱表明HRP在Co3O4复合膜内保持原有的蛋白质二级结构。利用循环伏安法测定修饰电极在pH=3 PBS缓冲溶液的电化学行为，出现一对峰型良好的氧化还原峰，表明Co3O4对HRP的直接电子转移有良好的促进作用，非均相电子转移速率常数为0.94 s‑1。同时探究了修饰电极对三氯乙酸的电催化行为，线性关系良好，灵敏度高，检测限较低，表观米氏常数为88.15 mmol/L，检测限为1.7 mmol/L，表明Co3O4可应用于第三代电化学传感器的制备。