荧光光谱法研究二溴羟基卟啉与蛋白质的结合作用机理

摘要

应用荧光光谱法研究了meso-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉[T(DBHP)P]与牛血清白蛋白(BSA)之间的结合反应,基于T(DBHP)P对BSA内源荧光的猝灭机理,测定了两者之间在不同温度下的结合常数,温度为27℃时,荧光猝灭法测得反应的结合常数为K=1.30×106 L·mor-1,温度为48℃时,K=6.32×105L·mol<-1,结合常数随温度升高而减小,由此判定该猝灭类型为静态猝灭.根据Forster非辐射能量转移理论,确定了T(DBHP)P与BSA之间的能量转移效率E=0.91,能量给体(BSA)与受体[T(DBHP)P]之间的结合距离r=239nm<7nm,符合非辐射能量转移条件.依据热力学参数△G<0,△H<0,△S0确定了T(DBHP)P与BSA之间的作用力主要是静电引力.同时,利用同步荧光光谱,考察了T(DBHP)P对BSA构象的影响,结果发现,T(DBHP)P的加入使BsA构象发生变化,BSA内部残基所处环境的疏水性降低.