裂壳菌L-14原生质体制备与再生体系构建

摘要

[目的]初步构建裂壳菌L-14原生质体制备和再生体系,为同源菌株原生质体制备研究提供理论依据.[方法]研究细胞壁裂解酶组合、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂种类对原生质体制备产量的影响,以获得最优制备方案,同时筛选适合的原生质体再生培养基.[结果]菌株经YEPG液体培养基培养7d后,使用0.7 mol/L的NaC1作为渗透压稳定剂配置浓度各为20 mg/mL的崩溃酶+裂解酶复合酶液,在30℃、80 r/min条件下酶解5.5h后可获得较高的原生质体数量,利用PDS培养基的原生质体再生率可达10.65％,显著高于其它类型培养基.[结论]确定了裂壳菌L-14的高效原生质体制备与再生体系,为该菌株遗传转化体系的建立研究奠定基础.