hAPOB的克隆、原核表达及抗体效价分析

摘要

[目的]人载脂蛋白B(hAPOB)是保持人体血脂恒定的重要蛋白,检测hAPOB具有重要的临床价值.[方法]本研究将hAPOB(97-526AA)序列连接到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建pGEX-4T-1-hAPOB(97-526AA)原核表达质粒,然后将其转入宿主菌BL21,宿主菌表达出与预期分子量大小相符的80 kDa的融合蛋白;将纯化后的融合蛋白免疫湖羊,制备抗hAPOB血清并检测抗体效价.[结果]每次注射0.4 mg的原核表达抗原,湖羊抗血清的产生效果最佳;经间接酶联免疫分析(ID-ELISA)方法检测,原核表达蛋白免疫湖羊得到的hAPOB抗体效价为1∶40000.[结论]本试验获的抗血清能够满足商用标准,为后续拓展其应用奠定了基础.