香石竹坏死斑点病毒的鉴定与检测

摘要

调查表明云南省昆明市团结乡香石竹普遍发生病毒病.电镜负染检测采自团结乡香石竹病毒病病样,病叶汁液中观察到弯曲长线型的病毒粒体, 长度约1000～1600 nm,直径约12 nm.对这些病样的叶片进行间接ELISA检测, 所有样品与香石竹坏死斑点病毒抗血清都呈阳性反应.按照报道的长线形病毒属简并引物合成引物,采用RT - PCR法对血清反应呈阳性的香石竹总RNA扩增了1059 ntsHSP70基因部分编码序列,将其克隆到pMD18-T载体上,并进行序列分析.根据测序结果设计引物建立RT-PCR扩增检测方法并测定其灵敏度.结果表明,使用简并引物和新设计的引物均能从CNFV感病香石竹组织中扩增出与预期大小一致的目标片段,而健康组织无此扩增产物.灵敏性测定结果表明该特异性引物RT-PCR可从稀释10~6植物总RNA中检测出病毒.