辣椒COI1.2基因的克隆、表达分析和植物表达载体的构建

摘要

利用RT-PCR技术,通过同源克隆从辣椒中分离到CaCOI1.2基因,采用生物学软件对序列进行生物信息学分析,采用实时定量RT-PCR技术分析基因的表达模式.结果表明:克隆到的CaCOI1.2基因长度为2041 bp,推测其读码框大小为1812 bp,编码603个氨基酸.在CaCOI1.2蛋白质N-端有一个F-box结构域,C-端有6个富含亮氨酸结构域.CaCOI1.2蛋白的氨基酸与巳知其他植物COI1蛋白序列有53.03 ％～93.37％的一致性.聚类分析结果显示:CaCOI1.2与番茄、烟草和葡萄等双子叶植物的亲缘关系较近,而和水稻、玉米、高粱等单子叶植物的亲缘关系较远.CaCOI1.2在辣椒的不同生长发育时期的组织中都能表达,在花和青熟期果实中表达水平较高,表明CaCOI1.2在花和果实的发育过程中起重要作用.构建植物表达载体pBI121-CaCOI1.2,并导入根癌农杆菌LBA4404中,得到植物转化工程菌,这为下一步用于辣椒等作物的转基因操作、研究CaCOI1.2基因在植物中的功能奠定了基础.