鸭源新城疫F基因和鸭圆环病毒Cap基因融合表达DNA疫苗的构建

摘要

设计了2对特异性引物,PCR扩增出鸭源NDV分离株GX2011/19的F基因和DuCV的Gap基因,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1,成功构建重组融合表达质粒pcDNA3.1-F-Cap.经酶切和测序鉴定正确后,将重组质粒pcDNA3.1-F-Cap转染Vero细胞,采用间接免疫荧光检测到目的基因的体外表达.将pcDNA3.1-F-Cap作为DNA疫苗对2周龄的SPF雏鸭以胸部肌肉多点注射的方式进行免疫.分3个实验组,每组接种剂量分别为100、200和300μg/只,另设2组为载体质粒空白组和灭活疫苗组.ELISA检测抗体水平,试验结果显示:各DNA疫苗免疫组的NDV抗体和DuCV抗体水平明显高于载体空白对照组,差异显著(P＜0.05);二免后不同DNA剂量组间的抗体水平随着免疫剂量的增大而增加,差异显著(P＜0.05);于第二次免疫后2周,使用分离株GX2011/19以滴鼻的方式进行攻毒试验.接种pcDNA3.1-F-Cap剂量为300μg/只免疫组的保护率为40％,高于200μg/只组(30％)和100μg/只组(10％).研究结果表明,构建的DNA疫苗对新城疫病毒的强毒攻击具有一定的抵抗力,此疫苗的保护率随着免疫剂量的增大而有所增加.