油葵转化体系建立和重组人胰岛素的初步表达

摘要

为建立并研究利用油葵油体表达系统表达重组人胰岛素蛋白的方法,采用PCR技术构建植物种子特异性表达载体,经花粉管通道用重组人胰岛素基因转化油葵.利用PCR法检测目的基因的转化情况,用SDS-PAGE和Western blot对胰岛素蛋白的表达进行鉴定.结果表明,合成了重组人胰岛素与花生油体蛋白融合基因,并获得植物种子特异性表达载体pBINOI.花粉管通道转化油葵的适宜条件为,花柱剪切1/2,质粒浓度为50 ～ 100 ng/μl转化效率最高.PCR结果显示,油葵花粉管通道法转胰岛素基因总转化率为3.2％,温室转化率(5.20％)高于大田转化率(1.12％).获得T1～T5代转基因种子,播种为T1～T5代植株.获得的l号转基因株系T5代植株阳性/阴性植株为11∶1.经SDS-PAGE电泳分析和Western blot检测结果显示,融合蛋白约为23 kDa,重组人胰岛素基因在油葵种子中得到了表达.本实验建立了转基因油葵油体表达系统,且该系统能够成功表达重组人胰岛素.