细胞因子受体-嵌合抗体真核表达载体的构建

摘要

目的:构建细胞因子受体-抗人AFP嵌合抗体基因真核表达载体.方法:用RT-PCR方法从人胚肝组织中扩增EpoR胞外区基因及gp130跨膜区基因,并用限制性酶切连接方法拼接.用PCR方法从抗人AFP单链抗体表达载体中扩增VL、VH基因,分别与人kappa轻链和人gammal重链恒定区基因重组,获得人鼠嵌合轻链和重链,再将EpoR-gp130与嵌合重链连接,最后将嵌合轻链和H-EpoR-gP130分别连接到质粒pVITR0上,构建pVITRO-E-g-Ig载体.结果:获得EpoR胞外区基因750bp,gP130跨膜区基因900bp.重组真核表达载体经限制性酶切鉴定示EpoR、gP130基因、嵌合重链基因和嵌合轻链基因正确连接到载体pVITRO.结论:成功构建细胞因子受体-抗人AFP甲嵌合抗体基因表达载体.