微波抗原修复在免疫组化PAP法中的应用

摘要

在石蜡切片制作过程中，经福尔马林固定、脱水、包埋标本以后，组织中的抗原被这或由于蜡块存放时间过长、放置时的温度变化又较大，而致使抗原丢失及其敏感度降低。若用石蜡切片做免疫组化检测，常因以上原因，导致染色效果欠佳，甚至失败。在免疫组化PAP法中，我们选择石蜡切片用微波处理，进行抗原修复，把被遮蔽的抗原暴露出来，提高反应敏感度和染色效果，并可减少反应时间，得到了较为满意的结果。所用微波炉为松下公司产品（Na－tionalNN56525），选择微波火力为-Lo档（75W），能产生92－98C温度。材料选用经Zamboni’s固定液灌注固定的大鼠甲状腺，乙醇系列脱水，石蜡包埋后放置两年的切片（7Pm），二甲醛脱蜡至水。具体方法如下：0．01MPBS漂洗3×5'→9：1甲醇-H2O2处理10Min→001MPBS2×5'→0．01M柠檬酸盐缓冲液浸泡并用微波炉“Lo”档加热9min→冷却后0．01MPBS漂洗2×5’→l％BSA37℃30min→一抗（CT）37℃2h、室温过夜（12h）-PBS漂洗2×5’→二抗（GAR）37Clh→PBS漂洗2×5’～PAP37℃1h→DAB显色。结果使整个实验过程比常规免疫组化PAP法缩短近乎30小时，并省略了胰酶消化步骤，达到了更好的染色效果。